姜鵬玲，尼杰，谷峰，李春艷，張敏，付麗，只向成

(天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院乳腺癌防治教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300060)

乳腺癌的高度異質(zhì)性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性存在差異［1，2］。2008年11月～2013年9月，我們觀察了多西他賽(DOC)、吡柔比星(THP)、表柔比星(EPI)、長(zhǎng)春瑞濱(NVB)、順鉑(CDDP)5種常用化療藥物對(duì)原發(fā)性乳腺癌細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞的單藥化療有效率，并分析影響化療有效率的因素。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院收治的女性原發(fā)性乳腺癌患者536例，均經(jīng)石蠟切片病理學(xué)確診，均無(wú)其他惡性腫瘤病史;年齡23～81歲，平均52歲;Ⅰ期164例，Ⅱ期282例，Ⅲ期90例。

1.2 藥物敏感性檢測(cè) 采用膠滴腫瘤藥敏檢測(cè)(CD-DST)技術(shù)。手術(shù)過(guò)程中取患者乳腺癌組織，在無(wú)菌條件下剪碎，經(jīng)膠原酶消化，獲取單細(xì)胞懸液。離心后接種于Ⅰ型膠原凝膠的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)出原代細(xì)胞后，棄去未貼壁的死細(xì)胞，獲取單細(xì)胞懸液。冰浴條件下將CD-DST試劑盒中的A、B、C液按8∶1∶1制成膠原凝膠液，與細(xì)胞沉淀混合打勻;按30 μL/滴、3滴/孔種植到6孔板中，在37℃條件下孵育1 h使其凝膠化后，加入培養(yǎng)液培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，分別加入需檢測(cè)的化療藥物DOC(10 μg/mL)、THP(0.5 μg/mL)、EPI(0.5 μg/mL)、CDDP(15 μg/mL)、NVB(4 μg/mL)，設(shè)立空白對(duì)照組。培養(yǎng)24 h后，洗去化療藥物，加入培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)7 d。中性紅染色固定干燥后，采用Scionimage軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析，結(jié)果用藥物處理組與空白對(duì)照組的腫瘤細(xì)胞克隆量光密度比值表示?！?0%為腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感，＞50%為不敏感即耐藥?；熕幬镉行?=對(duì)化療藥物敏感例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在原發(fā)性乳腺癌原代培養(yǎng)細(xì)胞中，DOC的單藥化療有效率為 46.5%(249/536)、EPI為 42.9%(230/536)、THP 為 42.7%(229/536)、CDDP 為42.5%(228/536)、NVB 為34.0%(182/536)。DOC在年齡＜60歲、ER陰性、p53陽(yáng)性、非Luminal型乳腺癌細(xì)胞中單藥有效率高(P均＜0.05);EPI在ER陰性、Her-2陽(yáng)性、非Luminal型、非Luminal A型乳腺癌細(xì)胞中單藥有效率高(P均＜0.05);THP在組織學(xué)Ⅲ級(jí)、Her-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中單藥有效率高(P均＜0.05);CDDP在ER陽(yáng)性、Luminal型乳腺癌細(xì)胞中單藥有效率高(P均＜0.05);NVB在PR陽(yáng)性、Luminal B型和非Her-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌細(xì)胞中單藥有效率高(P均＜0.05);詳見表1。

表1 單藥有效率與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

采用CD-DST技術(shù)培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞所需癌組織量少，且癌組織離體時(shí)間短，生物學(xué)性狀尚未發(fā)生大的變化，能較真實(shí)地反映整個(gè)腫瘤細(xì)胞群體的特性及不同供體的個(gè)體差異，具有較好的臨床相關(guān)性，標(biāo)本可評(píng)價(jià)率為 84.3%［3］。

本研究通過(guò)CD-DST發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性乳腺癌原代培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)5種常用化療藥物的敏感性不同;而且，通過(guò)對(duì)乳腺癌患者臨床病理特征進(jìn)一步分層發(fā)現(xiàn)，同一種化療單藥在不同分層中的敏感性也存在差異。其中，DOC在ER陰性、p53陽(yáng)性和非Luminal型乳腺癌細(xì)胞中較敏感，與Rouzier等［4］和Holmes等［5］提出DOC在ER陰性、p53陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞中敏感性較高的結(jié)論一致。但是，Durbecq等［6］認(rèn)為，乳腺癌對(duì)DOC的敏感性與p53表達(dá)無(wú)關(guān)。因此，以上結(jié)論還需更多的臨床數(shù)據(jù)驗(yàn)證。此外，本研究中DOC對(duì)年齡≥60歲乳腺癌患者的化療有效率較低，與老年患者乳腺癌組織學(xué)分級(jí)低、ER高表達(dá)、p53 低表達(dá)、化療敏感性低的特點(diǎn)相符［5，7，8］。THP在組織學(xué)Ⅲ級(jí)和Her-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中的敏感性較高;EPI在ER陰性、Her-2陽(yáng)性和非Luminal型乳腺癌細(xì)胞中的敏感性較高;與 Carey等［9］和Pritchard等［10］報(bào)道的蒽環(huán)類藥物在Her-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌中的敏感性較高的結(jié)果一致。Petrelli等［11］報(bào)道，CDDP用于乳腺癌新輔助化療中，其病理完全緩解率(pCR)可達(dá)41.9%;三陰型乳腺癌患者達(dá)到pCR的例數(shù)約是非三陰型患者的2倍。本研究結(jié)果顯示，CDDP在ER陽(yáng)性和Luminal型乳腺癌細(xì)胞中化療敏感性較高，在三陰型和非三陰型乳腺癌細(xì)胞中其化療敏感性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。目前，三陰型乳腺癌能否在含有CDDP的新輔助化療中獲益尚不明確。伴有BRCA突變的三陰型乳腺癌對(duì)CDDP最敏感，pCR 可達(dá) 83%～100%［12］。然而，BRCAness型乳腺癌在三陰型乳腺癌中更常見，約占2/3，BRCAness型乳腺癌具有散發(fā)性乳腺癌和BRCA突變型乳腺癌的混合特征，與BRCA突變型相比，在含CDDP 的新輔助化療中其 pCR 明顯下降［13，14］。本研究觀察到，CDDP單藥有效率在三陰型乳腺癌和非三陰型乳腺癌中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但不能說(shuō)明CDDP在三陰型乳腺癌中不敏感。由于本研究中未對(duì)三陰型乳腺癌進(jìn)行基因方面的檢測(cè)，所以上述推斷尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。而同樣屬于作用于微管的生物堿類化療藥，NVB與DOC的敏感因素完全不同，也為臨床上兩者聯(lián)合使用不會(huì)產(chǎn)生交叉耐藥［15］提供一定的依據(jù)。

［1］Moulder S，Hortobagyi GN.Advances in the treatment of breast cancer［J］.Clin Pharmacol Ther，2008，83(1):26-36.

［2］Wang H，Vo T，Hajar A，et al.Multiple mechanisms underlying acquired resistance to taxanes in selected docetaxel-resistant MCF-7 breast cancer cells ［J］.BMC Cancer，2014，14(37):1471-2407.

［3］臧夢(mèng)芳，張?jiān)伱罚怯⑤x，等.乳腺癌對(duì)吡柔比星和表柔比星的藥物敏感性及有效性的對(duì)比觀察［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2011，91(20):1388-1392.

［4］Rouzier R，Perou CM，Symmans WF，et al.Breast cancer molecular subtypes respond differently to preoperative chemotherapy［J］.Clin Cancer Res，2005，11(16):5678-5685.

［5］Holmes CE，Muss HB.Diagnosis and treatment of breast cancer in the elderly［J］.CA Cancer J Clin，2003，53(4):227-244.

［6］Durbecq V，Paesmans M，Cardoso F，et al.Topoisomerase-II alpha expression as a predictive marker in a population of advanced breast cancer patients randomly treated either with single-agent doxorubicin or single-agent docetaxel［J］. Mol Cancer Ther，2004，3(10):1207-1214.

［7］Yates JW，Ries LG，Yates JW，et al.Breast cancer in aging women.A population-based study of contrasts in stage，surgery，and survival［J］.Cancer，1989，63(5):976-981.

［8］Diab SG，Elledge RM，Clark GM，et al.Tumor characteristics and clinical outcome of elderly women with breast cancer［J］.J Natl Cancer Inst，2000，92(7):550-556.

［9］Carey LA，Dees EC，Sawyer L，et al.The triple negative paradox:primary tumor chemosensitivity of breast cancer subtypes［J］.Clin Cancer Res，2007，13(8):2329-2334.

［10］Pritchard KI，Messersmith H，Elavathil L，et al.HER-2 and topoisomeraseⅡ as predictors of response to chemotherapy［J］.J Clin Oncol，2008，26(5):736-744.

［11］Petrelli F，Coinu A，Borgonovo K，et al.The value of platinum agents as neoadjuvant chemotherapy in triple-negative breast cancers:a systematic review and meta-analysis［J］.Breast Cancer Res Treat，2014，144(2):223-232.

［12］Byrski T，Gronwald J，Huzarski T，et al.Pathologic complete response rates in young women with BRCA1-positive breast cancers after neoadjuvant chemotherapy［J］.J Clin Oncol，2010，28(3):375-379.

［13］Turner N，Tutt A，Ashworth A.Hallmarks of＇BRCAness＇in sporadic cancers［J］.Nat Rev Cancer，2004，4(10):814-849.

［14］Lips EH，Mulder L，Oonk A，et al.Triple-negative breast cancer:BRCAness and concordance of clinical features with BRCA1-mutation carriers［J］.Br J Cancer，2013，108(10):2172-2177.

［15］唐黎，申劍，武明花.卡培他濱聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱治療復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的臨床觀察［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2010，15(1):67-69.