韓俊偉（河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 453000）

杜海燕（河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 453000）

一例高致病性豬藍(lán)耳病和豬瘟混合感染的診斷

韓俊偉（河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 453000）

杜海燕（河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 453000）

某規(guī)?；i場(chǎng)存欄生豬519頭，其中公豬5頭，母豬280頭，后備母豬134頭，斷奶仔豬100頭，養(yǎng)殖方式為自繁自養(yǎng)，主要從事仔豬生產(chǎn)銷售。免疫方面，該豬場(chǎng)按春秋兩防給豬群進(jìn)行免疫，接種豬瘟弱毒疫苗，并對(duì)即將出售的60日齡仔豬接種豬瘟疫苗一次。2014年12月5日，豬群開始發(fā)病，病情不斷發(fā)展變化。12月26日，實(shí)驗(yàn)室收到該豬場(chǎng)送檢的20～50日齡病死仔豬3頭，對(duì)發(fā)病原因進(jìn)行檢測(cè)診斷。

1 流行病學(xué)調(diào)查

豬群發(fā)病后，有130頭妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)，死胎現(xiàn)象，初產(chǎn)或經(jīng)產(chǎn)母豬均出現(xiàn)繁殖障礙癥狀，流產(chǎn)率達(dá)到46.4%；哺乳仔豬曾有黃、白痢的流行病史，斷奶后發(fā)病的仔豬體溫升高，伴隨呼吸道癥狀，肢體末端，包括耳朵，吻突，四肢，尾部皮膚發(fā)紫。截至送檢時(shí)，該豬場(chǎng)共死亡成年母豬4頭、仔豬120頭，死亡率達(dá)到23.89%。

2 剖檢病變

肺臟表面可見大小不等的出血點(diǎn)或出血斑，肺膈葉觀察到暗紅色的突變區(qū)（3/3）；肺表面出現(xiàn)纖維素性滲出物，肺與胸壁或膈肌相粘連（2/3）；胃底腺體區(qū)觀察到彌漫性出血病變；包皮積尿，擠壓后流出茶黃色的尿液，膀胱粘膜可見針尖大小的出血點(diǎn)；盲腸粘膜、回盲瓣區(qū)域出現(xiàn)同心圓狀的紐扣狀潰瘍；腎包膜下可見少量的出血點(diǎn)（1/3）；腹股溝淋巴結(jié)、肺門淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)水腫，切面多汁，部分病例觀察到大理石花紋狀的出血病變，參看圖1、圖2、圖3。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 RAN提取

分別取3頭病死豬的肺、淋巴結(jié)研磨組織勻漿液，8000rpm離心10min，取上清液采用離心柱提取法提取病料總RNA樣本。

圖1 胃底腺體區(qū)彌漫性出血

圖2 回盲區(qū)域紐扣狀潰瘍

圖3 肺門淋巴結(jié)腫大

3.2 豬瘟病毒核酸檢測(cè)

采用廣州維伯鑫生物科技有限公司的豬瘟病毒核酸檢測(cè)試劑盒（RT-PCR熒光探針法）對(duì)待檢病料進(jìn)行豬瘟病毒RNA體外擴(kuò)增檢測(cè)。結(jié)果見圖4。

圖4 豬瘟病毒核酸RT-PCR熒光探針法檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果判斷：（1）陽性：檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期；（2）檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次試驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期，為陽性，否則為陰性；（3）陰性：檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40。

陽性對(duì)照Ct值為13.85；樣本1的Ct值為15.72；樣本2的Ct值為19.16，樣本3未檢測(cè)到Ct值。結(jié)果表明3頭送檢病死豬的豬瘟病毒核酸檢出率達(dá)66.67%（2/3），病死豬群存在豬瘟病毒的感染。

3.3 豬藍(lán)耳病病原核酸檢測(cè)

采用針對(duì)藍(lán)耳病病毒非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2基因的引物對(duì)病料RNA樣本進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，結(jié)果見圖5。

結(jié)果表明，從3頭送檢病死豬的肺和淋巴結(jié)樣本均擴(kuò)增出1064bp的DNA帶，藍(lán)耳病病原核酸檢出率達(dá)到100%（3/3）?？芍撠i場(chǎng)存在豬藍(lán)耳病的感染。

圖5 豬藍(lán)耳病病原核酸檢測(cè)結(jié)果

4 結(jié)論與建議

根據(jù)診斷結(jié)果，對(duì)死亡豬組織檢測(cè)出豬瘟病毒和豬藍(lán)耳病病毒核酸陽性，說明該豬場(chǎng)20～50日齡斷奶仔豬出現(xiàn)豬瘟與藍(lán)耳病混合感染。高致病性藍(lán)耳病是引起母豬繁殖障礙和仔豬死亡的罪魁禍?zhǔn)祝i瘟混合感染是次發(fā)的病因。發(fā)病的仔豬曾經(jīng)接種豬瘟弱毒疫苗，可能是由于豬場(chǎng)存在管理上的漏洞等問題，單獨(dú)使用了一些不正規(guī)廠家生產(chǎn)的疫苗，且免疫的方法和劑量不當(dāng)，致使豬群沒能產(chǎn)生應(yīng)有的保護(hù)力。

防治動(dòng)物疫病應(yīng)采取綜合性措施，即加強(qiáng)預(yù)防接種，搞好飼養(yǎng)管理，加強(qiáng)檢疫和防疫，做好豬場(chǎng)衛(wèi)生和消毒工作。建議對(duì)斷奶仔豬群進(jìn)行豬瘟弱毒活疫苗緊急免疫接種，3～5d以后再接種藍(lán)耳病滅活疫苗。結(jié)合豬場(chǎng)實(shí)際，科學(xué)制定免疫程序，豬瘟免疫程序不能按春秋兩防季節(jié)性預(yù)防接種，應(yīng)20日齡豬瘟弱毒活疫苗首次免疫；50日齡加強(qiáng)免疫一次（2頭份）；以后每4～6個(gè)月接種一次豬瘟疫苗。藍(lán)耳病預(yù)防接種可以先免疫發(fā)病豬群，再接種正常豬群。配種前20d，臨產(chǎn)前30d母豬各接種1次（4頭份）。此外，豬場(chǎng)還應(yīng)注意疫苗質(zhì)量、接種方式和途徑，確保免疫質(zhì)量。目前，豬群不要急于配種，應(yīng)錯(cuò)開1～2個(gè)發(fā)情期，待豬群恢復(fù)健康以后再配種。