朱雁，陳燕眉，楊元北，李長彬，陳英軍，林成，杜明喜，王培永，陳綿旭，王冰，張萍

（江蘇省徐州市銅山區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 徐州 221007）

禽流感-新城疫二聯(lián)重組活疫苗（rLH5-6株）對產(chǎn)蛋雞群免疫效果觀察

朱雁，陳燕眉，楊元北，李長彬，陳英軍，林成，杜明喜，王培永，陳綿旭，王冰，張萍

（江蘇省徐州市銅山區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 徐州 221007）

本試驗(yàn)通過禽流感（AI）-新城疫（ND）二聯(lián)重組活疫苗（rLH5-6株）以不同的免疫途徑和免疫劑量單獨(dú)使用以及分別和重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）、雞新城疫滅活疫苗聯(lián)合使用，免疫產(chǎn)蛋雞群，定期采樣監(jiān)測禽流感（H5-6株）及新城疫抗體效價(jià)，根據(jù)各試驗(yàn)組免疫抗體效價(jià)、持續(xù)時(shí)間及免疫抗體合格率，評價(jià)禽流感-新城疫二聯(lián)重組活疫苗的免疫效果，確定加強(qiáng)免疫的時(shí)間間隔及適宜的免疫程序。試驗(yàn)結(jié)果表明，單獨(dú)使用禽-新二聯(lián)重組活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞群和單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗相比，禽流感HI平均抗體效價(jià)低（僅在3log2左右），但仍能產(chǎn)生有效的保護(hù)，新城疫平均抗體效價(jià)可達(dá)6～8log2，70%以上的免疫抗體合格率能維持2個(gè)月左右。禽－新二聯(lián)重組活疫苗與禽流感二價(jià)滅活疫苗聯(lián)合使用，和單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗相比，禽流感HI平均抗體效價(jià)有所提高，且維持時(shí)間較長，70%以上的免疫抗體合格率至少維持6個(gè)月，新城疫HI平均抗體效價(jià)稍低于單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗的平均抗體效價(jià)。禽－新二聯(lián)重組活疫苗與新城疫滅活疫苗聯(lián)合使用，和單獨(dú)使用新城疫滅活疫苗相比，導(dǎo)致新城疫HI平均抗體有所降低，且70%以上的免疫抗體合格率僅能維持6個(gè)月左右，禽流感HI平均抗體效價(jià)與單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗相比，沒有明顯差異。禽－新二聯(lián)重組活疫苗肌注免疫的效果優(yōu)于飲水免疫，而不同免疫劑量，在免疫效果上沒有明顯差異。建議，對于產(chǎn)蛋雞群，單獨(dú)使用禽流感－新城疫二聯(lián)重組活疫苗時(shí)，可每間隔2個(gè)月按說明書劑量進(jìn)行一次飲水或肌注加強(qiáng)免疫，單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗時(shí)，可每間隔4個(gè)月按說明書劑量進(jìn)行一次肌注加強(qiáng)免疫；對于產(chǎn)蛋雞群禽流感免疫，禽－新二聯(lián)重組活疫苗可聯(lián)合使用禽流感二價(jià)滅活疫苗，每間隔6個(gè)月用禽流感二價(jià)滅活疫苗按說明書劑量進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，期間每間隔2個(gè)月再單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗按說明書劑量進(jìn)行一次飲水或肌注加強(qiáng)免疫；對于產(chǎn)蛋雞群新城疫免疫，新城疫滅活疫苗不宜和禽－新二聯(lián)重組活疫苗聯(lián)合使用。

禽流感；新城疫；二聯(lián)重組活疫苗；滅活疫苗；抗體效價(jià)；免疫效果

禽流感（AI）、新城疫（ND）是目前危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的一類傳染病，被我國列為強(qiáng)制免疫病種，使用疫苗免疫是主要的預(yù)防措施。本試驗(yàn)通過禽流感-新城疫二聯(lián)重組活疫苗（rLH5-6株）（簡稱禽-新二聯(lián)重組活疫苗）以不同的免疫途徑和免疫劑量單獨(dú)使用以及分別和重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）（簡稱禽流感二價(jià)滅活疫苗）、雞新城疫滅活疫苗聯(lián)合使用，免疫產(chǎn)蛋雞群，定期采樣監(jiān)測禽流感（H5Re-6株）及新城疫抗體效價(jià)，根據(jù)各試驗(yàn)組免疫抗體效價(jià)、持續(xù)時(shí)間及免疫抗體合格率，評價(jià)禽流感-新城疫二聯(lián)重組活疫苗的免疫效果，確定加強(qiáng)免疫的時(shí)間間隔及適宜的免疫程序。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 試驗(yàn)疫苗禽流感-新城疫二聯(lián)重組活疫苗（rLH5-6株），哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號2014042；重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株），哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號201423；雞新城疫滅活疫苗，揚(yáng)州威克生物工程有限公司生產(chǎn)，批號1409038。

1.1.2 試驗(yàn)雞群由銅山區(qū)助農(nóng)養(yǎng)雞專業(yè)合作社提供，120日齡左右的臨開產(chǎn)蛋雞群，存欄1萬只，取2000只，隨機(jī)分成10組，每組200只，試驗(yàn)前隨機(jī)采集20只血樣，經(jīng)HI試驗(yàn)監(jiān)測H5亞型（Re-6株）禽流感抗體，群體免疫抗體合格率≤70%時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)，其余未參試雞群仍按本場免疫程序?qū)嵤┟庖?。該雞群禽流感前期免疫程序?yàn)?4日齡禽-新二聯(lián)重組活疫苗2羽份滴鼻點(diǎn)眼，35日齡禽-新二聯(lián)重組活疫苗3羽份飲水，65日齡禽流感二價(jià)滅活疫苗0.5mL肌注免疫。對于未參試雞群禽流感的免疫，110日齡禽流感二價(jià)滅活疫苗0.5mL肌注免疫，以后每間隔4個(gè)月用禽流感二價(jià)滅活疫苗0.5mL肌注免疫一次。試驗(yàn)前免疫抗體監(jiān)測結(jié)果見表1。

表1 試驗(yàn)前禽流感（H5Re-6株）、新城疫免疫抗體監(jiān)測結(jié)果（抗體效價(jià)平均值（-log2）/免疫抗體合格率%

1.1.3 1%的雞紅細(xì)胞懸液、抗原及陽性血清用3.8%的枸櫞酸鈉作為抗凝劑，采集健康成年公雞新鮮血液，用生理鹽水離心洗滌3次，取紅細(xì)胞配成1%的懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。禽流感H5亞型Re-6株標(biāo)準(zhǔn)抗原，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)批號2014006；新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原，批號20140603、陽性血清，批號20140701、禽流感H9亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原，批號20140406、陽性血清，批號20140312，均為青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)。

1.1.4 HI試驗(yàn)根據(jù)禽流感、新城疫監(jiān)測技術(shù)規(guī)范，采用β微量法進(jìn)行HI試驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組試驗(yàn)分組情況見表2。

表2 試驗(yàn)分組情況

1.2.2 免疫抗體監(jiān)測及判定標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)開始后每15d進(jìn)行一次采樣，每組隨機(jī)翅靜脈采集20只雞血樣，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｊ褂猛慌噭┻M(jìn)行HI試驗(yàn)，監(jiān)測抗體效價(jià)，確定免疫抗體持續(xù)時(shí)間及加強(qiáng)免疫的時(shí)間間隔。禽-新二聯(lián)重組活疫苗H5-6株免疫抗體效價(jià)≥23判定為合格，重組禽流感二價(jià)滅活疫苗Re-6株免疫抗體效價(jià)≥24判定為合格；新城疫免疫抗體效價(jià)≥25判定為合格。雞群免疫抗體合格率≥70%判定為免疫合格。

2 試驗(yàn)結(jié)果（見表3）

表3 試驗(yàn)后禽流感（AI）、新城疫（ND）HI抗體監(jiān)測結(jié)果（抗體效價(jià)平均值（-log2）/免疫抗體合格率%

表3 續(xù)

3 小結(jié)與討論

3.1 由監(jiān)測結(jié)果可以看出，單獨(dú)使用禽流感－新城疫二聯(lián)重組活疫苗的第1、2、3、4組，禽流感HI平均抗體效價(jià)僅在3log2左右或低于3log2，70%以上的免疫抗體合格率僅能維持2個(gè)月左右，新城疫平均抗體效價(jià)可達(dá)6～8log2，70%以上的免疫抗體合格率至少能維持2個(gè)月；但肌注免疫的第3、4組優(yōu)于飲水免疫的第1、2組，而飲水免疫使用方便，省工省時(shí)；用法相同的第1組和第2組、第3和第4組，雖然疫苗使用劑量不同，但免疫效果沒有明顯差異；而單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗的第5組，禽流感HI平均抗體效價(jià)可達(dá)到8log2以上，且70%以上的免疫抗體合格率維持時(shí)間較長，在6個(gè)月左右，90%以上的免疫抗體合格率至少能維持4個(gè)月。有報(bào)道，禽－新二聯(lián)重組活疫苗，雖不能產(chǎn)生高滴度的抗體應(yīng)答，但能夠抵御相同亞型禽流感病毒的攻擊，保護(hù)效果達(dá)到或優(yōu)于滅火苗。本試驗(yàn)中單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗的1、2、3、4組和單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗的第5組相比，雖然抗體效價(jià)明顯較低，但整個(gè)試驗(yàn)期各組均未出現(xiàn)感染發(fā)病的情況，在一定意義上說明仍能提供有效的保護(hù)，與以上報(bào)道相符，限于試驗(yàn)條件，未能進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，有待進(jìn)一步試驗(yàn)證明。同時(shí)，通過本試驗(yàn)也進(jìn)一步驗(yàn)證了活疫苗和滅活疫苗各自的特性。

3.2 禽－新二聯(lián)重組活疫苗與禽流感二價(jià)滅活疫苗聯(lián)合使用的第6、7組，和單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗的第5組相比，禽流感HI平均抗體效價(jià)有所提高，且70%以上的免疫抗體合格率至少維持6個(gè)月，而單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗的第5組，禽流感70%以上的免疫抗體合格率僅能維持6個(gè)月左右，這可能與活疫苗激發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答有關(guān)；新城疫HI平均抗體效價(jià)似乎稍低于單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗的第1、2、3、4組，但沒有明顯差異，這與有關(guān)報(bào)道禽流感二價(jià)滅活疫苗與禽－新二聯(lián)重組活疫苗聯(lián)合使用，可抑制機(jī)體對新城疫的免疫應(yīng)答相符，但具體機(jī)制尚不明確；而禽－新二聯(lián)重組活疫苗肌注免疫的第7組，禽流感HI平均抗體效價(jià)優(yōu)于飲水免疫的第6組，但沒有明顯差異。

3.3 禽－新二聯(lián)重組活疫苗與新城疫滅活疫苗聯(lián)合使用的第8、9組，和單獨(dú)使用新城疫滅活疫苗的第10組相比，新城疫HI平均抗體效價(jià)似乎有所降低，且70%以上的免疫抗體合格率僅能維持6個(gè)月左右，而單獨(dú)使用新城疫滅活疫苗的第10組，70%以上的免疫抗體合格率至少能維持6個(gè)月，這可能與禽流感疫苗抑制機(jī)體對新城疫疫苗的免疫應(yīng)答有關(guān)；禽流感HI平均抗體效價(jià)與單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗的1、2、3、4組相比，沒有明顯差異；而禽－新二聯(lián)重組活疫苗肌注免疫的第9組，新城疫HI平均抗體效價(jià)稍低于飲水免疫第8組，但沒有明顯差異。

3.4 我們曾在其他雞場進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，取得一致的結(jié)果。

4 結(jié)論

4.1 單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞群和單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗相比，禽流感HI平均抗體效價(jià)較低，僅在3log2左右，但仍能產(chǎn)生有效的保護(hù)；新城疫平均抗體效價(jià)可達(dá)6～8log2，70%以上的免疫抗體合格率能維持2個(gè)月左右；且肌注免疫的效果優(yōu)于飲水免疫，但飲水免疫使用方便，省工省時(shí)；而同一種疫苗，相同的免疫方法不同使用劑量，免疫效果沒有明顯差異。建議，對于產(chǎn)蛋雞群，單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗時(shí)，每間隔2個(gè)月按說明書劑量進(jìn)行一次飲水或肌注加強(qiáng)免疫；單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗時(shí)，每間隔4個(gè)月按說明書劑量進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫。

4.2 禽－新二聯(lián)重組活疫苗與禽流感二價(jià)滅活疫苗聯(lián)合使用，和單獨(dú)使用禽流感二價(jià)滅活疫苗相比，禽流感HI平均抗體效價(jià)有所提高，且維持時(shí)間較長，70%以上的免疫抗體合格率至少維持6個(gè)月，新城疫HI平均抗體效價(jià)則稍低于單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗的平均抗體效價(jià)，但差異不明顯，禽－新二聯(lián)重組活疫苗肌肉注射免疫與禽流感二價(jià)滅活疫苗聯(lián)合使用的效果優(yōu)于飲水免疫，但沒有明顯差異。建議，對于產(chǎn)蛋雞群禽流感免疫，禽－新二聯(lián)重組活疫苗可聯(lián)合使用禽流感二價(jià)滅活疫苗，每間隔6個(gè)月按說明書劑量進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，期間每間隔2個(gè)月再單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗按說明書劑量進(jìn)行一次飲水或肌注加強(qiáng)免疫。

4.3 禽－新二聯(lián)重組活疫苗與新城疫滅活疫苗聯(lián)合使用，和單獨(dú)使用新城疫滅活疫苗相比，導(dǎo)致新城疫HI平均抗體效價(jià)有所降低，且70%以上的免疫抗體合格率僅能維持6個(gè)月左右，禽流感HI平均抗體效價(jià)與單獨(dú)使用禽－新二聯(lián)重組活疫苗相比，沒有明顯差異，而禽－新二聯(lián)重組活疫苗肌注免疫時(shí)，導(dǎo)致新城疫HI平均抗體效價(jià)稍低于飲水免疫，但沒有明顯差異。建議，對于產(chǎn)蛋雞群新城疫免疫，新城疫滅活疫苗不宜和禽－新二聯(lián)重組活疫苗聯(lián)合使用。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．08.025