范雅麗

摘要 對(duì)酶抑制檢測(cè)法和化學(xué)試劑速測(cè)法的檢測(cè)方法和原理進(jìn)行了概述，有助于區(qū)別蔬菜水果中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的其他速測(cè)方法，可為蔬菜、水果中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的提高提供參考。

關(guān)鍵詞 蔬菜；水果；檢測(cè)技術(shù)；農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào) TS207.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2015）18-0289-02

Summary on Common Fruits and Vegetables Pesticide Residue Detection Technology

FAN Ya-li

（Agricultural Product Quality Safety Supervision and Management Station in Qingyang City of Gansu Province，Qingyang Gansu 745000）

Abstract This paper summarized the test method and principle of the enzyme inhibition test and chemical reagents speed measuring method，which helped to distinguish other measuring methods of organophosphorus pesticide residues in fruits and vegetables，so as to provide references for the improvement of detection technology of pesticide residue in fruits and vegetables.

Key words fruits；vegetables；detection technology；pesticide residue

近年來，我國(guó)對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)技術(shù)雖然一直在完善，但是蔬菜農(nóng)藥殘留引發(fā)的中毒事件也在頻繁發(fā)生，政府及相關(guān)部門對(duì)檢測(cè)技術(shù)的要求也越來越高。蔬菜農(nóng)藥殘留污染主要是有機(jī)磷類的和氨基甲酸類，有機(jī)磷類的超標(biāo)情況尤其明顯。我國(guó)現(xiàn)有的測(cè)定農(nóng)藥殘留的方法主要有4種，即酶抑制檢測(cè)、色譜檢測(cè)、酶聯(lián)免疫以及化學(xué)試劑速測(cè)法。本文主要就酶抑制法、化學(xué)速測(cè)進(jìn)行了研究，因他們都有相對(duì)較低的使用成本，易于推廣。

1 酶抑制法

1.1 檢測(cè)原理

在環(huán)境特定的情況下，有機(jī)磷可以抑制膽堿酯酶的相應(yīng)功能，即催化水解過程的基本功能，同樣，氨基甲酸酯類農(nóng)藥也有相同的抑制作用。蔬菜和水果中農(nóng)藥的濃度越大，它的抑制能力也會(huì)相對(duì)增強(qiáng)。對(duì)其進(jìn)行抑制的基本原理是，氨基甲酸酯類農(nóng)藥或者有機(jī)磷和乙酰膽堿酯酶經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)后就抑制了酶的活性，如果將擬除蟲菊酯類農(nóng)藥和AchE經(jīng)過相應(yīng)的化學(xué)反應(yīng)后就抑制不了酶的活性。AchE和樣本經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)后抑制了酶的活性，說明蔬菜或者水果中包含著對(duì)人體神經(jīng)有害的物質(zhì)，反之，沒有抑制酶的活性，說明蔬菜和水果中基本沒有對(duì)人體有害的物質(zhì)[1]。在進(jìn)行試驗(yàn)的時(shí)候所采用的試劑分別是顯色劑、緩沖液、底物以及膽堿酯酶。

1.2 檢測(cè)步驟

把樣本，即蔬菜或者水果的樣本取出來，擦掉上面黏著的泥土和水之類的東西，取出1 g樣本之后將其切碎，如果不是帶葉的蔬菜就取出2 g。在取出的樣本里面加入5 mL緩沖液，并搖晃2～3 min不等，將提取液倒出靜置5 min，接著給比色杯內(nèi)加入樣本的提取液和酶，分別為2.5 mL、100 μL，10 min后加入100 μL顯色劑，然后加入100 μL底物，將兩者充分混合后再進(jìn)行比色，比色環(huán)節(jié)必須在412 nm長(zhǎng)的波長(zhǎng)下進(jìn)行。酶抑制法的基本計(jì)算公式如下：

抑制率（%）=（？駐AC-？駐AS）/？駐AC×100

式中，？駐AC是對(duì)照樣本3 min后與3 min前吸光值之差，？駐AS是被測(cè)樣本3 min后與3 min前吸光值之差。

1.3 判定結(jié)果

當(dāng)對(duì)酶的抑制率<50%的時(shí)候，在蔬菜和水果上農(nóng)藥殘留的數(shù)量就會(huì)趨近于沒有；當(dāng)抑制率在50%～70%之間的時(shí)候，蔬菜或者水果中存在這2種農(nóng)藥殘留的可能性會(huì)比較大；當(dāng)抑制率≥70%的時(shí)候，表示這2種農(nóng)藥殘留肯定是存在的。通過一些氣相色譜儀等檢測(cè)工具進(jìn)行定量定性監(jiān)測(cè)的時(shí)候，-10%～110%之間的數(shù)字就表示其抑制率必須保持的范圍，假如超過了這個(gè)范圍就說明這個(gè)操作過程是錯(cuò)誤的，必須把檢測(cè)過程再重新來1遍。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

要對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確判定就必須遵照相關(guān)儀器測(cè)得的數(shù)據(jù)，每個(gè)測(cè)定儀器都有規(guī)定的測(cè)定范圍。很多速測(cè)法可以通過目測(cè)的方式進(jìn)行農(nóng)藥殘留物的測(cè)定，即顏色會(huì)把陽(yáng)性和陰性數(shù)據(jù)顯示出來。超標(biāo)是陽(yáng)性的，比如在使用速測(cè)靈I型和新靈的時(shí)候，檢測(cè)液體的顏色逐漸從紫色變成無色時(shí)就表示超標(biāo)，如果紫色根本沒有發(fā)生變化或者變化不明顯，仍可以看出是紫色液體，說明農(nóng)藥殘留沒有超標(biāo)，即顯示陰性。速測(cè)卡顏色的變化也會(huì)顯示超標(biāo)和不超標(biāo)，速測(cè)卡如果完全變?yōu)樗{(lán)色就表示農(nóng)作物殘留沒有超標(biāo)，如果速測(cè)卡的顏色沒有發(fā)生任何變化就表示農(nóng)作物殘留超出了標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍。還有一些檢測(cè)儀的亮燈顏色變化也會(huì)體現(xiàn)出超標(biāo)和不超標(biāo)的情況[2]。

1.5 試驗(yàn)結(jié)果和分析

在整個(gè)研究試驗(yàn)中，采用了快速檢測(cè)方法即酶抑制法進(jìn)行了對(duì)有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留的監(jiān)測(cè)，最后確定了農(nóng)藥殘留濃度。本文主要采用酶抑制法，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)（GB/T 5009.199—2003）》和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法（NY/448-2001）》和化學(xué)檢測(cè)法做了相關(guān)的對(duì)比試驗(yàn)。酶抑制法能快速檢出被測(cè)樣品中的農(nóng)藥殘留量，廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果、糧食、茶葉、水及土壤中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類的農(nóng)藥殘留進(jìn)行的快速檢測(cè)中，適用于各級(jí)農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)中心、工商、技術(shù)監(jiān)督、衛(wèi)生監(jiān)督、食品藥品監(jiān)督管理局、農(nóng)產(chǎn)品加工企業(yè)、農(nóng)產(chǎn)品種植基地、種植專業(yè)合作社、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、生鮮超市、學(xué)校、環(huán)保部門、賓館、酒店等領(lǐng)域[3]。endprint

最后對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證之時(shí)，采用了氣相色譜的方法對(duì)酶抑制法的監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證，通過檢測(cè)結(jié)果來看，陽(yáng)性的結(jié)果符合率明顯大于陰性結(jié)果符合率，陽(yáng)性的是83%，陰性的是77%。在室內(nèi)溫度和濕度都進(jìn)行嚴(yán)格的控制之下，即室溫控制在25～28 ℃，室內(nèi)濕度控制在50%的時(shí)候?qū)υ囼?yàn)結(jié)果進(jìn)行測(cè)定，這次選取的是對(duì)這4種有機(jī)磷反應(yīng)較為靈敏的RP_410型農(nóng)藥殘留快速測(cè)定儀，這個(gè)測(cè)定儀可以檢測(cè)到0.5 mg/kg，CL-1型農(nóng)藥殘留測(cè)定儀再對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果是有0.5 mg/kg，甲胺磷和久效磷的測(cè)定數(shù)據(jù)都相對(duì)較大，分別為1、2 mg/kg。換一種檢測(cè)方式檢測(cè)到的結(jié)果也不同，利用新靈對(duì)甲胺磷、敵敵畏進(jìn)行測(cè)試時(shí)，可以檢測(cè)到1 mg/kg，也可以檢測(cè)到4 mg/kg的氧化樂果。甲胺磷、敵敵畏、久效磷可以用速測(cè)靈I型檢測(cè)到3 mg/kg，也可檢測(cè)到5 mg/kg的氧化樂果。速測(cè)卡的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)最差是6 mg/kg。

2 化學(xué)試劑速測(cè)法

2.1 檢測(cè)原理

研制金屬離子催化劑，利用這種金屬離子催化劑使得像磷酸酯之類的有機(jī)農(nóng)藥進(jìn)行催化水解，最后水解成為磷酸和醇。有機(jī)磷農(nóng)藥在強(qiáng)催化劑和監(jiān)測(cè)液B的催化之下，分解形成了磷酸和醇。然后對(duì)顏色呈紫色的檢測(cè)液A進(jìn)行研究，這樣有機(jī)磷進(jìn)行水解之后的產(chǎn)物和檢測(cè)液A進(jìn)行反應(yīng)之后，顏色會(huì)發(fā)生非常明顯的變化，即紫色最后會(huì)逐漸變淺，最后呈無色狀態(tài)[4]。

2.2 檢測(cè)步驟

首先，取3～4 mL蒸餾水或者潔凈水，如果沒有具體測(cè)量的物品，可以在包裝中找出塑料測(cè)試盆，把純凈水倒入塑料測(cè)試盆的1/5的位置；然后，把有柄的蔬菜葉片取出來2～3片，要求蔬菜葉片舒展，接著清洗葉面，注意要在純凈水通了吸管之后用吸管進(jìn)行清洗。接著，再取出一個(gè)吸管，把三角瓶中存儲(chǔ)的紫紅色液體吸取出來，在盆子里滴2滴，搖晃使之混合均勻，然后再取出塑料瓶中存儲(chǔ)的黃色液體，并將這些液體吸取4滴，滴入到盆子內(nèi)部，經(jīng)過振動(dòng)搖晃后靜置5～10 min后再觀察顏色變化情況。

2.3 結(jié)果判斷

如果這幾種液體混合之后顏色都變?yōu)闊o色，則說明這些蔬菜中有機(jī)磷的含量大幅度超出了標(biāo)準(zhǔn)量，是不能進(jìn)行食用的，否則將會(huì)產(chǎn)生中毒現(xiàn)象。如果一次測(cè)定還不能滿足相應(yīng)的測(cè)定結(jié)果，那么可以對(duì)這項(xiàng)內(nèi)容重復(fù)測(cè)定3～4次，以得出比較實(shí)用的結(jié)果。

3 速測(cè)方式的技術(shù)指標(biāo)

化學(xué)速測(cè)法是根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥的氧化還原特性進(jìn)行檢測(cè)的方法。有機(jī)磷農(nóng)藥比如磷酸酯、二硫代酸酯、磷酸胺在金屬催化劑作用下水解為磷酸及醇等，水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，使顯色劑的紫紅色褪去變成無色。其檢測(cè)步驟為：取農(nóng)藥溶液3～4 mL，加入紫紅色顯色劑液體2滴混勻。再加入黃色催化劑液體4滴靜5～10 min，如果液體褪色則表示農(nóng)藥殘留超標(biāo)。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于它是化學(xué)反應(yīng)，相對(duì)生化方法穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)便無需培訓(xùn)，一次可做多個(gè)樣品，檢測(cè)所需時(shí)間短。該方法的缺點(diǎn)是在臨界點(diǎn)附近顏色變化不很明顯，主要針對(duì)幾種有機(jī)磷農(nóng)藥敏感，且易受一些還原性物質(zhì)的干擾[5]。速測(cè)卡法和分光光度法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)快速檢驗(yàn)方法規(guī)定的2種快速檢測(cè)的生化方法。本儀器采用了最快捷、最簡(jiǎn)單的速測(cè)卡法。速測(cè)卡中的膽堿酯酶（白色藥片）可催化靛酚乙酸酯（紅色藥片）水解為乙酸與靛酚。由于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的活性有抑制作用，使催化水解后的顯色發(fā)生改變，利用速測(cè)卡法測(cè)量顯色的不同，即可判斷果蔬樣品是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。

按照已經(jīng)得到的相關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果和使用相關(guān)儀器的技術(shù)資料，對(duì)幾種速測(cè)方法進(jìn)行比較，比如靈敏度、成本、重現(xiàn)性、檢測(cè)速度、操作過程等。就速測(cè)卡來看，沒有較高的靈敏度，所需要的成本非常高。而惠康速測(cè)儀的劣勢(shì)是重現(xiàn)性較差，新靈和SN-IA型速測(cè)儀的優(yōu)點(diǎn)是比較明顯的，即檢測(cè)速度相當(dāng)快，靈敏度相對(duì)較高，操作實(shí)行起來簡(jiǎn)單方便，成本也相對(duì)較低。但是，ZYD-NP6 和OK-C10的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)都較為明顯，其優(yōu)點(diǎn)都具有較為寬闊的檢測(cè)對(duì)象，重現(xiàn)性也相對(duì)較好，但是缺點(diǎn)是操作試驗(yàn)的過程太過復(fù)雜，對(duì)酶的保存條件也有較高要求，而且結(jié)果也會(huì)隨著環(huán)境、組織液的色素、操作技巧等發(fā)生的變化而產(chǎn)生相應(yīng)的變化，受到的影響較大[6]。

4 結(jié)語(yǔ)

就現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)的發(fā)展水平來看，檢測(cè)蔬菜農(nóng)藥殘留的方法主要有2種，一種是色譜法，另外一種是速測(cè)法，本文主要針對(duì)速測(cè)法中的2種進(jìn)行了概述。酶抑制法和化學(xué)速測(cè)法主要是定性分析化學(xué)殘留，針對(duì)含有過高濃度農(nóng)藥殘留的蔬菜或者水果進(jìn)行藥性檢測(cè)，以防止在農(nóng)產(chǎn)品之中由于過高的農(nóng)藥殘留物而導(dǎo)致的中毒事件的發(fā)生。酶抑制法和化學(xué)速測(cè)法在這個(gè)過程中起到的作用是有目共睹的。其他諸如色譜法之類的速測(cè)方法也有其特定的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)，因此，在環(huán)境的需要發(fā)生相關(guān)變化的情況下，可以將速測(cè)方式進(jìn)行相應(yīng)的改變，以達(dá)到最終速測(cè)效果實(shí)現(xiàn)的目的。

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