萬學(xué)鋒++劉俊斌++陳漢鑫++鄭春生

摘要 以長泰砂仁筍芽為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究。結(jié)果表明：0.2% HgCl2浸泡15 min，消毒效果最好；筍芽分化增殖的最佳培養(yǎng)基是MS+BA 5.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，培養(yǎng)30 d的增殖系數(shù)為3.0；最適壯苗生根培養(yǎng)基是1/2MS+IBA 3.0 mg/L+BA 0.2 mg/L，生根系數(shù)達(dá)到4.60，煉苗移栽后，成活率為100%。

關(guān)鍵詞 長泰砂仁；筍芽；快速繁殖

中圖分類號 S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）18-0079-02

Establishment of Rapid Propagation Technique in Amomum villosum CV：Changtaisa

WAN Xue-feng LIU Jun-bin CHEN Han-xin ZHENG Chun-sheng

（Zhangzhou Institute of Agricultural Sciences in Fujian Province，Zhangzhou Fujian 363005）

Abstract The techniques of the tissue culture and rapid propagation of Amomum villosum CV：Changtaisa were studied.The results showed that the sterilization time of using 0.2% of HgCl2 was 15 min.The best medium for multiplication was MS+BA 5.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，and the multiplication could be 3.0 after 30 d.The best medium for rooting was 1/2MS+IBA 3.0 mg/L+BA 0.2 mg/L，and the root coefficient was 4.60 after 30 d，the survival rates reached 100% after transplanting.

Key words Amomum villosum CV：Changtaisa；stem tip；rapid propagation

長泰砂仁，學(xué)名Amomum villosum CV：Changtaisa，別名泰砂，屬于春砂仁中的一種[1]，產(chǎn)于福建省長泰縣，屬姜科豆蔻屬多年生常綠草本植物，被列為國家重點(diǎn)發(fā)展的名貴中藥之一，具有很高的藥用價值[2]。其藥用部分主要是果實(shí)內(nèi)的種子團(tuán)，性味辛溫，具有理氣行滯、開胃消食、止吐安胎等功效[3]，具有很高的經(jīng)濟(jì)開發(fā)價值。長泰砂仁是長泰縣政府特優(yōu)農(nóng)產(chǎn)品及林下經(jīng)濟(jì)的主打產(chǎn)品，在農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和林權(quán)改革中產(chǎn)生新效益，是增加農(nóng)民收入的一個值得關(guān)注的亮點(diǎn)。長泰砂仁有悠久的栽培歷史，在1687年及1750年出版的《長泰縣志》就有砂仁的記錄[4]。長泰砂仁目前的研究主要集中在砂仁化學(xué)成分[5-6]、藥理研究[7]及栽培技術(shù)[8]上，對栽培前期的優(yōu)質(zhì)砂仁種源研究較少。砂仁繁殖有分株繁殖、種子繁殖，經(jīng)過多代長時間栽培，田間已經(jīng)出現(xiàn)種源退化，特別是盛果期后植株老化黃化嚴(yán)重，產(chǎn)量逐漸銳減[9]；而組培快繁技術(shù)可以提純復(fù)壯，改善植株老化，因此利用快速繁殖技術(shù)，獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗，進(jìn)而工廠化育苗，保證產(chǎn)業(yè)發(fā)展所需的優(yōu)良種質(zhì)資源。因此，筆者對長泰砂仁的快繁技術(shù)進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)材料為長泰砂仁，果實(shí)采后1個月，11月中旬取材自福建省漳州市長泰縣吳田山。在晴天中午時分挖取筍芽，去除多余根莖，保留每個外植體有1個芽眼。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒。將采集的長泰砂仁剝離老葉，留取2～3 cm長的筍芽，晾干1 h，先用無菌水沖洗，再用0.1% HgCl2（8、12、15 min）、0.2% HgCl2（8、12、15 min）進(jìn)行消毒，10 d后統(tǒng)計污染率。3次重復(fù)。

1.2.2 不同細(xì)胞分裂素對長泰砂仁誘導(dǎo)分化。將無菌系的外植體轉(zhuǎn)接到添加不同細(xì)胞分裂素的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中，MS+BA（1.0、2.0 mg/L）、MS+KT（1.0、2.0 mg/L）、MS+TDZ（1.0、2.0 mg/L），25±1℃，30 d后統(tǒng)計分化率。3次重復(fù)。

1.2.3 不同BA濃度對長泰砂仁增殖的影響。將誘導(dǎo)分化的叢生芽切下后轉(zhuǎn)移至增殖培養(yǎng)基MS+BA（2.0～8.0 mg/L）+NAA 0.2 mg/L中進(jìn)行培養(yǎng)，統(tǒng)計叢生芽數(shù)和增殖系數(shù)。3次重復(fù)。

1.2.4 不同生長調(diào)節(jié)劑組合對長泰砂仁試管苗壯苗及生根的影響。將長泰砂仁試管苗轉(zhuǎn)移到壯苗生根培養(yǎng)基MS+BA 0.2 mg/L+NAA（1.0、2.0、3.0 mg/L）和MS+BA 0.2 mg/L+IBA（1.0、2.0、3.0 mg/L）中，30 d后統(tǒng)計生長情況及生根率。3次重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用DPS v9.50數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，對試驗(yàn)樣本進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒組合對筍芽消毒的影響

長泰砂仁外植體無菌體系的建立是快繁的基礎(chǔ)。接種培養(yǎng)10 d后，污染數(shù)和受傷數(shù)統(tǒng)計后如表1所示。采用0.2% HgCl2浸泡15 min污染率最低，為15%，存活率達(dá)到77.5%，而0.1% HgCl2消毒8 min時，污染率達(dá)90%，存活率為7.5%?？梢娤緯r間過短且HgCl2濃度為0.1%污染率高，不利于外植體的表面滅菌，其原因是筍芽長時間生長在土壤中，容易滋生細(xì)菌和病毒，消毒不徹底。endprint

采用0.2% HgCl2消毒后要用無菌水多沖洗，盡可能消除有害離子Hg2+，避免筍芽雙重侵害。在消毒過程中適當(dāng)添加1～2滴吐溫-60，有利于增加外植體表面活性，降低污染率。

2.2 細(xì)胞分裂素對長泰砂仁筍芽誘導(dǎo)的影響

不定芽的誘導(dǎo)是快繁技術(shù)中的第一步，而細(xì)胞分裂素起著關(guān)鍵性的作用，因此設(shè)置了常用的3種不同細(xì)胞分裂素，通過相同濃度條件找出適合長泰砂仁的細(xì)胞分裂素。每組接種20個，30 d后統(tǒng)計不同組合下的誘導(dǎo)率，結(jié)果如表2所示。這3種細(xì)胞分裂素都能對筍芽進(jìn)行誘導(dǎo)，6-BA和TDZ能取得較高的誘導(dǎo)效果，分別達(dá)到90%、85%；而KT的誘導(dǎo)率偏低，這是因?yàn)樵诟邏哼^程中KT不穩(wěn)定，容易分解。在相同濃度下，6-BA的誘導(dǎo)率高于其他2種。而從經(jīng)濟(jì)角度考慮，6-BA比TDZ在工廠化育苗過程更便宜，更實(shí)惠，低成本高產(chǎn)出。

2.3 6-BA對長泰砂仁叢生芽增殖的影響

不定芽的增殖也是快繁的關(guān)鍵，6-BA濃度直接影響長泰砂仁不定芽的增殖速率，試驗(yàn)中通過7個水平來篩選最適合筍芽分化的6-BA濃度。每組20個，30d后統(tǒng)計叢生芽的個數(shù)，計算增殖系數(shù)，結(jié)果如表3所示。在6-BA濃度2.0～8.0 mg/L區(qū)間內(nèi)，誘導(dǎo)出的芽均能有較好分化增殖。隨著6-BA濃度的提高，叢生芽分化數(shù)量也隨著增加，6-BA濃度增至7.0 mg/L時，增殖系數(shù)最大，達(dá)3.3，此時葉片開始卷曲，葉表面出現(xiàn)白化透明，與培養(yǎng)基相接觸的部位開始愈傷化，分化苗整體生長勢弱；隨著6-BA濃度再繼續(xù)增加，增殖系數(shù)下降，芽長勢更弱，愈傷化程度更明顯多。因此，比較苗的增殖率及芽長勢，6-BA濃度以5.0 mg/L為佳。

2.4 生長調(diào)節(jié)劑對長泰砂仁誘導(dǎo)生根的影響

由表4可知，在所做的試驗(yàn)中長泰砂仁生根率都是100%。隨著NAA濃度的逐漸增加，生根系數(shù)一直都在增加，在3.0 mg/L時最多，達(dá)到3.65；而IBA濃度的逐漸增加，生根系數(shù)先升后降，在2.0 mg/L時生根系數(shù)達(dá)到4.60。在相同濃度條件下，IBA促進(jìn)生根的作用要高于NAA。因此，長泰砂仁試管苗生根培養(yǎng)選擇IBA 2.0 mg/L，6-BA 0.2 mg/L。

將根系發(fā)達(dá)、生長健壯的試管苗移瓶至有2層遮陰網(wǎng)的大棚內(nèi)，放置14 d；然后移栽于泥炭土中培養(yǎng)，30 d后，其成活率約為100%。在煉苗過程中注意不要太早把瓶蓋打開，取苗后要在清水中洗凈根部的培養(yǎng)基，多菌靈殺菌然后移栽。

3 結(jié)論與討論

在組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)中，無菌苗的建立是基礎(chǔ)，沒有良好的無菌體系，其他試驗(yàn)就不能很好地延續(xù)。而外植體的消毒成活則又是無菌培養(yǎng)體系建立的基礎(chǔ)。由于長泰砂仁筍芽生長在地表以下，長期與微生物接觸，極容易自身帶菌。通過晾干1 h可以減少植物自身的含水量，降低微生物的存活率。用無菌水沖洗減少了自來水清洗增加有害因素的機(jī)會。長泰砂仁筍芽消毒效果以0.2% HgCl2為佳，消毒時間以15 min為宜，能有效提高外植體的成活率達(dá)75%。

在長泰砂仁快繁中，6-BA比KT和TDZ增殖效果好，試驗(yàn)所得到的BA濃度與劉進(jìn)平[10]的建議6-BA濃度相似，這說明高濃度的確可以帶來高增殖，但也會造成苗生長勢偏弱，不利于最后煉苗移栽的成活率。在快繁培養(yǎng)過程中，高濃度的BA可以誘導(dǎo)出愈傷組織，這與刁玲武等[11]、張雅明等[12]研究結(jié)論都不同，在后續(xù)的長泰砂仁愈傷組織培養(yǎng)中進(jìn)行研究，是一個新的研究點(diǎn)。叢生芽增殖的因素除了細(xì)胞分裂素6-BA的影響之外，還包括在培養(yǎng)過程中，及時繼代也是一個影響叢生芽增殖的因素之一。有限的培養(yǎng)基供養(yǎng)往往會跟不上叢生芽的增殖速度，從而造成叢芽由于沒有營養(yǎng)而發(fā)黃、萎縮甚至死亡，合理繼代時間以及繼代中能夠刺激叢生芽保持高速擴(kuò)繁也是未來的研究要點(diǎn)。

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（上接第80頁）

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