高洪元

原發(fā)性肝癌是常見的惡性程度較高的腫瘤，其發(fā)病存在一定的區(qū)域分布特性，其中，在肝炎病毒流行的亞洲和非洲，發(fā)病率相對(duì)較高。常規(guī)的針對(duì)肝癌易感個(gè)體的普查可以明顯延長(zhǎng)很多患者的生存期，但是對(duì)于許多晚期肝癌患者來說，效果仍然不容樂觀。目前認(rèn)為腫瘤炎性微環(huán)境可能影響肝癌患者的轉(zhuǎn)歸［1］。而在腫瘤微環(huán)境中，細(xì)胞因子所起的作用非常重要，貫穿于腫瘤發(fā)展的全過程。細(xì)胞因子是由一組具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、免疫激活等作用的蛋白質(zhì)或小分子所構(gòu)成的物質(zhì)［2］。大多數(shù)細(xì)胞因子可由單核－巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血小板、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生。機(jī)體在炎癥和免疫應(yīng)答過程中會(huì)由相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，對(duì)炎癥的發(fā)生發(fā)展起調(diào)節(jié)作用［3］。不同的細(xì)胞因子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中所發(fā)揮的作用各有不同，有些抑制腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，有些卻直接或間接地促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。近期研究［4－7］表明，白介素 6（interleukin－6，IL－6）、IL－1β、IL－10、IL－17、IL－27及腫瘤壞死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF－α）均能夠調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，但國(guó)內(nèi)對(duì)于上述細(xì)胞因子在肝癌早期轉(zhuǎn)移中的作用研究較少。本文研究通過檢測(cè)IL－1β、IL－6、IL－10、IL－17、IL－27 及 TNF－α 這 6 種細(xì)胞因子在肝癌患者血清中的水平，探討其與肝癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集我院2012年1月－2014年12月收治并經(jīng)病理明確診斷的肝細(xì)胞癌患者100例，其中男性56例，女性44例，根據(jù)肝癌轉(zhuǎn)移情況分為無轉(zhuǎn)移組48例，肝轉(zhuǎn)移組52例（門靜脈轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等），年齡 27～82歲，中位年齡 43.5歲。各組年齡、性別、HBeAg狀態(tài)、ChildPugh評(píng)分等數(shù)據(jù)見表1。

表1 100例肝癌患者的臨床資料

1.2 儀器與試劑 Luminex 200液相芯片分析系統(tǒng)（美國(guó)Luminex公司），液相芯片六因子組合試劑盒（加拿大eBioscience公司），洗滌液（杭州萊茲生物有限公司），裂解液（杭州萊茲生物有限公司），細(xì)胞裂解液（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司），鏈霉親和素－藻紅蛋白（杭州萊茲生物有限公司）。

表2 肝轉(zhuǎn)移組與無轉(zhuǎn)移組血清各細(xì)胞因子水平的比較（±s，pg／mL）

表2 肝轉(zhuǎn)移組與無轉(zhuǎn)移組血清各細(xì)胞因子水平的比較（±s，pg／mL）

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1.3 方法

1.3.1 Luminex xMAP 技術(shù)檢測(cè)血清細(xì)胞因子 將樣本裂解液移至孵育板上，加入支持探針微球、支持延伸探針和緩沖液，55℃震蕩孵育過夜；孵育結(jié)束后將孵育板放在磁力架上1 min，當(dāng)磁性微球聚集在底部時(shí)，吸取棄去上清；加入洗滌液，震蕩洗漆1 min后，孵育板放在磁力架上1 min，當(dāng)磁性微球聚集在底部時(shí)，吸取棄去上清；此步驟重復(fù)洗3次；加入擴(kuò)增延伸探針和標(biāo)記探針，50℃震蕩反應(yīng)1 h；孵育板放在磁力架上1 min，吸取棄去上清；用洗滌液洗2次；加入鏈霉親和素－藻紅蛋白，50℃震蕩反應(yīng)30 min；孵育板放在磁力架上1 min，吸取棄去上清；用洗滌液清洗2次；加入洗滌液，震蕩5 min，在Luminex 200閱讀儀上讀取數(shù)據(jù)，得出檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)；各指標(biāo)間的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線等臨床診斷性能指標(biāo)評(píng)估各指標(biāo)的預(yù)測(cè)效能。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清各細(xì)胞因子水平的比較 除肝轉(zhuǎn)移組IL－17和IL－27水平均顯著高于無轉(zhuǎn)移組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）外，其余各指標(biāo)兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），見表2。

2.2 肝轉(zhuǎn)移組各細(xì)胞因子水平的相關(guān)性分析 肝轉(zhuǎn)移組的6種細(xì)胞因子中，IL－1β與IL－17呈正相關(guān)（r＝0.275，P＝0.048），其余各指標(biāo)間均無相關(guān)性，見表3。

表3 肝轉(zhuǎn)移組各細(xì)胞因子的相關(guān)性分析

2.3 IL－17與IL－27對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè) ROC曲線分析IL－17與IL－27兩指標(biāo)對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)，如圖1和表4所示，IL－17和IL－27診斷肝癌轉(zhuǎn)移的AUCROC分別為 0.664和0.818，最佳診斷 cutoff值分別為 2.005 pg／mL和238.95 pg／mL，敏感性分別為83.3%和98.5%，特異性分別為 35.7%和64.3%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（positive predictive value，PPV）分別為58.1%和62.1%，陰性預(yù)測(cè)值（negative predictive value，NPV）分別為 43.4%和44.4%，約登指數(shù)分別為35.7和62.8。IL－27與IL－17 對(duì)肝癌的轉(zhuǎn)移均有一定的預(yù)測(cè)能力，IL－27預(yù)測(cè)肝癌轉(zhuǎn)移更好。

圖1 IL－27和IL－17預(yù)測(cè)肝癌轉(zhuǎn)移的ROC曲線

表4 ROC曲線等臨床診斷性能評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)IL－27和IL－17診斷肝癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)分析

3 討論

腫瘤微環(huán)境是指腫瘤局部浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和所分泌的活性介質(zhì)等與腫瘤細(xì)胞共同構(gòu)成的局部?jī)?nèi)環(huán)境。腫瘤與其微環(huán)境之間的相互關(guān)系是現(xiàn)代腫瘤學(xué)研究的關(guān)鍵問題和熱點(diǎn)［8］。腫瘤微環(huán)境中包括免疫細(xì)胞，分為先天性免疫細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和NK細(xì)胞等），和后天性免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞）［9］。這些免疫細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子或趨化因子、產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶類因子、分泌抗體或直接作用等方式和腫瘤細(xì)胞發(fā)生關(guān)聯(lián)，并在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著促進(jìn)和免疫監(jiān)視的雙重作用，而且不同的免疫細(xì)胞、不同免疫細(xì)胞亞群以及各種免疫效應(yīng)分子在不同的腫瘤中也扮演著多種角色。研究［10］發(fā)現(xiàn)肝癌周圍組織中包含了多種炎癥或免疫相關(guān)細(xì)胞。這些細(xì)胞和癌細(xì)胞間存在直接的細(xì)胞間聯(lián)系，或通過細(xì)胞因子及趨化因子而建立聯(lián)系。因此，認(rèn)識(shí)腫瘤微環(huán)境對(duì)于認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等有著重要的意義，而且對(duì)提高腫瘤早期轉(zhuǎn)移的診斷、預(yù)后評(píng)估也有重要作用。

細(xì)胞因子是具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、免疫激活等作用的一類蛋白質(zhì)或小分子機(jī)體。在炎癥和免疫應(yīng)答過程中會(huì)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，并發(fā)揮著不同功能。多種細(xì)胞因子在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中扮演著重要角色，其可由單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生［11］。細(xì)胞因子之間存在著相互促進(jìn)或者相互抑制的作用。

IL－17具有促進(jìn)多種腫瘤生長(zhǎng)的作用，這些腫瘤包括纖維肉瘤、結(jié)腸癌、皮膚癌、非小細(xì)胞肺癌。IL－17對(duì)腫瘤的作用具有多樣性，由于所研究的不同腫瘤免疫源性和腫瘤種屬模型不同，IL－17具有對(duì)腫瘤促進(jìn)和腫瘤抑制兩種不同作用。因此需要對(duì)IL－17的臨床研究來證實(shí)其在腫瘤進(jìn)展、腫瘤患者預(yù)后中的具體作用。劉立國(guó)［12］研究發(fā)現(xiàn)肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)組較非復(fù)發(fā)組術(shù)前血清IL－17水平高，且IL－17是肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)及生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，他推測(cè)IL－17可能是潛在的預(yù)測(cè)肝癌患者預(yù)后的指標(biāo)，認(rèn)為IL－17有希望作為肝癌的治療靶點(diǎn)。

IL－27與IL－23、IL－12 共同組成 IL－12 分子家族，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，在抗感染免疫，抗腫瘤免疫以及自身免疫病中發(fā)揮著重要的作用。IL－27是異二聚體，主要由抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生，是EBI3（與IL－12P40亞基同源）和P28（與IL－12P35亞基同源）通過二硫鍵組成異二聚體，而P28在不與EBI3結(jié)合時(shí)無IL－27的生物學(xué)活性，IL－27主要參與中性粒細(xì)胞、DC 細(xì)胞的增殖、成熟及趨化過程［13］。IL－27與腫瘤的關(guān)系也具有兩面性：一方面，有文獻(xiàn)［14］報(bào)道IL－27具有抗腫瘤的作用，其作用機(jī)制主要通過抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和血管生成，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的主要作用是抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫和促進(jìn)血管生成；另一方面，IL－27能夠通過IL－10和程序性死亡受體－1發(fā)揮其促腫瘤的作用。IL－27的抗腫瘤作用以結(jié)腸癌、顱內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)瘤報(bào)道為多。IL－27可以直接作用于CD8＋T細(xì)胞，以T－bet依賴和非依賴性的途徑促進(jìn)細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞增殖，伴隨粒酶B表達(dá)增髙，并輕微上調(diào)穿孔素（細(xì)胞毒效應(yīng)的一種重要的效應(yīng)分子）表達(dá)。然而，IL－27在肝癌中可能起到促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用。有研究［6］發(fā)現(xiàn)，IL－27在肝癌患者血清中的水平顯著高于對(duì)照組，這也是國(guó)內(nèi)首次報(bào)道IL－27在肝癌早期診斷中的臨床意義。

本文研究對(duì)100例原發(fā)性肝癌患者的6種常見的細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，52例肝轉(zhuǎn)移組患者中只有IL－17和IL－27水平均顯著高于48例無轉(zhuǎn)移組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。說明IL－17和IL－27均參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展及癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，起到了促進(jìn)腫瘤發(fā)展的作用。肝轉(zhuǎn)移組患者的 IL－1β、IL－6、IL－10和TNF－α 水平也均高于無轉(zhuǎn)移組患者，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。說明上述細(xì)胞因子雖然也對(duì)肝癌的發(fā)生發(fā)展起到促進(jìn)作用，但在肝癌轉(zhuǎn)移后升高幅度不大，因此不能作為肝癌早期轉(zhuǎn)移的檢測(cè)指標(biāo)。

對(duì)肝轉(zhuǎn)移患者中6種細(xì)胞因子的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，只有IL－1β與IL－17呈正相關(guān)，其余細(xì)胞因子間均無相關(guān)性。IL－1β為促炎型細(xì)胞因子，與IL－17共同作用起到促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。IL－27雖然也起到了促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，但其與其他細(xì)胞因子均無相關(guān)性，說明IL－27在促進(jìn)肝癌發(fā)生發(fā)展的過程中獨(dú)立發(fā)揮作用。

采用ROC曲線評(píng)價(jià)IL－17和IL－27對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移的診斷效能，結(jié)果顯示，IL－17 的 AUCROC＝0.664，IL－27 的 AUCROC＝0.818，最佳診斷 cutoff值分別為2.005 pg／mL和238.95 pg／mL，敏感性分別為 83.3%和98.5%，特異性分別為 35.7%和64.3%，PPV 分別為 58.1%和62.1%，NPV 分別為 43.4%和44.4%，約登指數(shù)分別為 35.7和62.8。IL－27 的 AUCROC及其他臨床診斷性能評(píng)價(jià)指標(biāo)水平均高于IL－17，說明雖然IL－17和IL－27都可作為評(píng)價(jià)肝癌是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，但I(xiàn)L－27的預(yù)測(cè)效果應(yīng)更好。

綜上，IL－17和IL－27均為促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞因子，可作為預(yù)測(cè)肝癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的有效指標(biāo)。其中IL－27對(duì)檢測(cè)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的靈敏度、特異性均高于IL－17，可作為肝癌轉(zhuǎn)移早期診斷及治療的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

1 孫義長(zhǎng).調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17細(xì)胞在肝癌中的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)信息，2012，25：608－610.

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