劉茜(廣東環(huán)境保護(hù)工程職業(yè)學(xué)院，廣東 佛山 528216)

0 引言

食用豆類不僅是重要的糧食資源之一，還含有多種生物活性物質(zhì)，其中含有多種維生素，礦物質(zhì)以及黃酮類化合物[1]。

天然抗氧化劑普遍取自天然可以食用的原料中[2-6]，由于天然抗氧化劑具有安全，無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)而引起人們的關(guān)注。尋找高效，天然抗氧化劑符合現(xiàn)代人的健康需要，極具開發(fā)價(jià)值。

黃酮類化合物是植物界廣泛存在的成分之一，常作為植物藥的有效成分存在，廣泛存在于植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物中，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血壓、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等多種功能，還可有效清除羥自由基等活性氧組分，是一類具有廣泛開發(fā)前景的天然抗氧化劑[7]。

浸提法是黃酮類化合物提取中較常用的一種提取法。浸提法主要依據(jù)各種黃酮類化合物的極性、溶解性不同，從而使其分離出，是黃酮類化合物的一種初級(jí)分離法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

材料：花豇豆(市售)

試劑：95% 乙醇(開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司)；FeSO4·7H2O(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司)；30%過(guò)氧化氫(天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心)；水楊酸(天津市博迪化工股份有限公司)；以上試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

新苗電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)；KM 快速研磨機(jī)(湘潭湘儀儀器有限公司)；8411 電動(dòng)振篩機(jī)(湘潭湘儀儀器有限公司)；電子分析天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；數(shù)星HH-2 恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；UV-754 型紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.3 黃酮的提取

1.3.1 花豇豆的預(yù)處理

將花豇豆用自來(lái)水洗凈，然后用蒸餾水洗3 遍，平鋪于不銹鋼托盤上，自然晾干，用粉磨機(jī)將花豇豆粉碎，然后過(guò)40 目篩，將粉末至于烘箱內(nèi)于40℃下干燥5h，置于棕色試劑瓶中避光保存。

1.3.2 乙醇濃度對(duì)提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，分別加入40mL 的40%，50%，60%，70%，80%，95%的乙醇溶液，料液比為1∶20。置于回流裝置中回流45min，設(shè)置水浴溫度為80℃。冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測(cè)定其羥自由基清除率。

1.3.3 料液比對(duì)提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，分別加入20mL，40mL，60mL，80mL，100mL 的60%乙醇溶液，即料液比為：1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50。置于回流裝置中回流45min，設(shè)置水浴溫度為80℃。冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測(cè)定其羥自由基清除率。

1.3.4 水浴溫度對(duì)提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，加入60mL60%乙醇溶液，置于回流裝置中回流45min，設(shè)置水浴溫度為60℃，70℃，80℃，90℃，95℃，冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測(cè)定其羥自由基清除率。

1.3.5 浸提時(shí)間對(duì)提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，加入60mL60%乙醇溶液，置于回流裝置中回流15min，45min，75min，105min，135min，設(shè)置水浴溫度為70℃，冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測(cè)定其羥自由基清除率。

1.4 羥自由基清除實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)體系中，過(guò)氧化氫在亞鐵離子作用下生成羥自由基，向體系中加入水楊酸捕捉羥自由基，同時(shí)產(chǎn)生在可見光區(qū)有特征吸收的紫色產(chǎn)物。在反應(yīng)體系中加入抗氧化物質(zhì)，與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)捕捉羥自由基，使生成的紫色產(chǎn)物減少，溶液的吸光度發(fā)生改變。通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組與空白組反應(yīng)溶液吸光度的變化評(píng)價(jià)受試物的抗氧化活性[8]。

黃酮提取液清除羥自由基(·OH)實(shí)驗(yàn)在試管中依次加入0.5mL 水楊酸-乙醇溶液(9.1mmol/L)，0.5mL 的黃酮提取液，0.5mLFe2+溶液(9mmol/L)，3.5mL 蒸餾水，最后加入5.0mLH2O2(88mmol/L)啟動(dòng)反應(yīng)，搖勻后于510nm 處測(cè)定吸光度A1；取0.5mL 的蒸餾水代替Fe2+溶液所測(cè)得的吸光度為A2；取0.5mL 蒸餾水代替黃酮提取液所測(cè)得的吸光度為A3，均重復(fù)5 次，按下式[18]計(jì)算羥自由基(·OH)的清除率P(%)。

式中：A1為樣品的吸光度值；A2為對(duì)照體系的吸光度值；A3為空白組的吸光度值。

2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄與處理

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 乙醇濃度的影響

表1 不同濃度乙醇反應(yīng)后提取液的吸光度與羥自由基清除率關(guān)系

由表1 可看出，乙醇濃度為60%時(shí)，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

2.1.2 料液比的影響

表2 不同料液比反應(yīng)后提取液的吸光度與羥自由基清除率關(guān)系

由表2 可看出，當(dāng)料液比為1∶30 時(shí)，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

2.1.3 水浴溫度的影響

表3 不同水浴溫度反應(yīng)后提取液的吸光度與羥自由基清除率的關(guān)系

由表3 可看出，當(dāng)溫度為70℃時(shí)，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

2.1.4 浸提時(shí)間的影響

表4 不同浸提時(shí)間反應(yīng)后提取液的吸光度與羥自由基清除率的關(guān)系

由表4 可看出，當(dāng)回流時(shí)間為75min 時(shí)，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

3 結(jié)語(yǔ)

在本實(shí)驗(yàn)設(shè)置的4 個(gè)影響因素下，確定了花豇豆粉末提取黃酮的最佳提取工藝：乙醇的體積分?jǐn)?shù)為60%；料液比為1∶30；提取溫度為70℃；提取時(shí)間為75min 時(shí)，提取液中所含黃酮對(duì)羥自由基(·OH)具有較好的清除作用。使用該種方法來(lái)提取花豇豆中黃酮，對(duì)黃酮的提取和加工具有重要意義，為花豇豆加工企業(yè)進(jìn)行了合理的深加工提供技術(shù)參考。

[1]宗緒曉.關(guān)鍵平.食用豆類的植物學(xué)特征、營(yíng)養(yǎng)化及產(chǎn)業(yè)化[J].資源與生產(chǎn)，2003，32(11)：28-30.

[2]李貴榮.枸杞多糖的提取及其對(duì)活性氧自由基的清除作用[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2002，19(2)：94-96.

[3]宋力，翟秋閣，付裕，等.圣女果中番茄紅素的提取方法及其抗氧化效果研究[J].信陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，25(1)：109-112.

[4]鄭晶泉.抗氧化劑抗氧化試驗(yàn)研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生分冊(cè)，2000，27(8)：137-141.

[5]蘇克曼，潘鐵英，張玉蘭等波譜解析法[M].上海：華東理工大學(xué)出版社，2002：80-131.

[6]鄭建仙.功能性食品學(xué)[M].北京市：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2011：12-18.

[7]宋力，史朝霞，孫玉聰，等.酒石酸亞鐵法測(cè)定黃瓜中多酚的含量[J].信陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2014,27(4)：558-561.

[8]魯曉翔，唐津忠.紫背天葵中總黃酮的提取及其抗氧化性研究[J].食品科學(xué)，2007，28(4)：145-148.