肖建華

（河南省羅山縣食品藥品檢驗所，羅山464200）

HPLC法測定丹芪血寧膠囊中丹參素的含量

肖建華

（河南省羅山縣食品藥品檢驗所，羅山464200）

目的建立HPLC法測定丹芪血寧膠囊中丹參素含量的方法。方法采用高效液相色譜法，使用WondaSil C18-WR Analytical（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱，以甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）為流動相，流速1.0 ml·min-1，檢測波長281 nm。結果丹參素在10.0～200.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好，其線性方程為y=14197x-2566（r=0.9999）。丹參素的平均回收率為99.08%，RSD＝0.16%（n＝6）。結論該方法簡便、可靠、準確，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

丹芪血寧膠囊；丹參素；HPLC；含量測定

丹芪血寧膠囊是河南省信陽市中醫(yī)院配制的口服醫(yī)院制劑，由丹參、黃芪、三七、川芎、生地黃等十九味中藥組成。具有益氣養(yǎng)血，活血止痛之功效，臨床用于血瘀阻滯所致頭痛、頭暈、耳鳴、胸悶、心悸氣短、失眠多夢、健忘怔忡、面黃乏力及腦梗塞、心肌梗塞、腦動脈硬化、冠心病、中風后遺癥。該制劑原定標準中沒有含量測定項，本文以丹參素為指標，參考有關文獻［1-5］，建立了HPLC法測定丹芪血寧膠囊中丹參素含量的方法。該法簡便、準確、重復性好，處方中其他成分對測定沒有干擾，分離效果較好，能有效地考察控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器日本島津LC-2010C高效液相色譜儀；sartorius CPA224S電子天平；日本島津UV-2550紫外分光光度計；KQ-300型超聲波清洗器；TG16-WS型臺式高速離心機；1850D型超純水機。

1.2 材料丹參素鈉對照品（批號：110855-201311，中國食品藥品檢定研究院），丹芪血寧膠囊（河南省信陽市中醫(yī)院制劑室，批號：20140408，20140802，20141020），SIGMA-ALDRICH色譜純甲醇（批號：TDCH0008），冰醋酸為分析純，水為自制純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件采用高效液相色譜法，以甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）為流動相，WondaSil C18-WR Analytical（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱，流速1.0 ml·min-1，檢測波長為281 nm，柱溫25℃，進樣體積10μl，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計應不低于4000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12h的丹參素鈉對照品，精密稱取11.11 mg置25 ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液；量取貯備液5 ml置50 ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成約相當于含丹參素40 μg·ml-1的對照品溶液。

2.2.2 樣品溶液取本品20粒，將其內(nèi)容物混勻、研細，稱取適量（約1.2 g）置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入25 ml 50%甲醇，密塞，稱定重量；超聲處理30 min（功率300 W，頻率50 kHz），放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.2.3 陰性對照溶液用相同工藝及處方比例制備空白制劑樣品（不含丹參），按2.2.2項下同法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗按2.1項下色譜條件，取對照品溶液、樣品溶液和陰性對照溶液進行試驗。記錄的色譜圖顯示，樣品溶液與對照品溶液在約17 min處有丹參素峰出現(xiàn)，陰性對照溶液在此位置處未見吸收峰出現(xiàn)，說明該方法測定丹參素不產(chǎn)生假陽性干擾。色譜圖見圖1。

圖1 丹芪血寧膠囊HPLC色譜圖

2.3.2 線性關系取2.2.1項下對照品貯備液，用50%甲醇分別制成10.0、20.0、40.0、80.0、200.0μg·ml-1濃度的系列溶液（取對照品貯備液5 ml，分別置200、100、50、25、10ml量瓶中），按2.1項下色譜條件測定，以進樣濃度（μg·ml-1）為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，方程為：y=14197x-2566（r=0.9999）。表明在10.0～200.0μg·ml-1的濃度范圍內(nèi)丹參素線性關系良好。

2.3.3 精密度試驗取2.2.1項下的對照品溶液，重復進樣5次，測得丹參素峰面積的平均值為567832，RSD= 0.47%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗取同一批樣品溶液（批號20140802），分別在0、2、4、8、12 h進樣測定，測得峰面積的RSD=0.87%（n=5），表明樣品溶液在12 h內(nèi)丹參素含量穩(wěn)定。

2.3.5 重復性試驗取同一批樣品（批號20140802），按2.2.2項下方法制備6份供試品溶液，依2.1項下色譜條件分別試驗，測得該批樣品中丹參素含量的平均值為0.7815 mg·g-1，RSD=1.41%（n=6），表明所用方法重復性好。

2.3.6 加樣回收率試驗取已知準確含量的樣品（批號20140802），精密稱取其研細內(nèi)容物約0.6 g，置100 ml具塞錐形瓶中，同時精密加入對照品貯備液1 ml（相當?shù)⑺?.4000 mg），按2.2.2項下方法平行制備6份供試液，依2.1項下色譜條件測定，計算加樣回收率（%），結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n=6）

結果表明，所采用的丹參素含量測定法準確度高。

2.4 樣品含量測定取丹芪血寧膠囊3批，按2.2.2項下方法分別制備樣品溶液，每批平行做3份，依2.1項下方法測定，計算出每粒膠囊中丹參素的平均含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 檢測波長的確定以50%甲醇為空白，取丹參素對照品溶液，在波長200 nm～350 nm的波長范圍內(nèi)進行紫外光譜掃描，結果在波長281 nm處有最大吸收，故選用該波長為檢測波長。

3.2 樣品溶液的制備采用超聲提取再離心分離的方法制備測定用供試品溶液。超聲提取技術利用高頻電磁波穿透提取介質(zhì)，到達物料內(nèi)部維管束和細胞，產(chǎn)生的電磁場可加速被提取成分向提取溶劑界面擴散，最大限度保證提取的質(zhì)量［6］；離心處理可去除不溶于50%甲醇的物質(zhì)和機械雜質(zhì)，使供試液澄清，便于濾過。參考有關文獻［7］，溶劑選用50%甲醇，超聲提取時間為30 min，即可有效提取所含丹參素；該方法提高了工作效率，避免采用回流提取、柱洗脫分離或乙酸乙酯萃取分離的繁雜流程，節(jié)省了人力物力。

3.3 流動相的選擇比較使用甲醇-0.05%磷酸-水（5∶1∶94）、甲醇-0.1%磷酸-水（5∶1∶94）、甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）、乙腈-冰醋酸-水（5∶1∶94）等流動相條件，實驗結果顯示選用甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）保留時間適當，峰形對稱，重復性好，丹參素峰和雜質(zhì)峰能有效分離。

3.4 含量限度的確定該制劑組方中君藥為丹參，丹參素為丹參中主要有效成分，所以選用丹參素作為質(zhì)控指標是可行的；根據(jù)處方中丹參用量和實驗測得數(shù)據(jù)，將1 g內(nèi)容物中丹參素含有量換算成平均每粒含有量，最終擬定本品每粒含丹參以丹參素（C9H10O5）計，不得少于0.18 mg。

［1］李靜.HPLC法測定養(yǎng)心通脈膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.中國藥師，2011，14（10）：1550-1551.

［2］張大軍，王兆華.高效液相色譜法測定腎康寧膠囊中丹參素的含量［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（10）：49-50.

［3］費超，孟蕾，劉子沐，等.HPLC法測定丹夏乳癖片中丹參素的含量［J］.中國藥房，2011，22（23）：2132-2163

［4］江慶洋，周修森.RP-HPLC法測定麥味地黃膠囊中馬錢苷的含量［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2015，13（1）：140-141.

［5］周修森，方永凱.HPLC法測定柴丹疏利膠囊中丹參素的含量［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（10）：25-27.

［6］李莉，譚蔚，馬雪松.微波輔助提取黃芪甲苷的研究［J］.中藥材，2007，30（2）：234-236.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥出版社，2010：549.

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2015年2月10日

Content Determination of Danshensu in Danqi Xuening Capsule by HPLC

XIAOJianhua
（Luoshan Institute for Food and Drug Control，Henanprovince，Luoshan464200，China）

Objective To establish the method for the content determination of Danshensu in Danqi Xuening capsule.Methods HPLC method was adopted.WondaSil C18-WR Analytical column（5 μm，4.6 mm×250 mm）was used with mobile phase consisted of methanol-glacial acetic acid-water（5∶1∶94）at flow rate of 1.0 ml·min-1.The detection wave length was set at 281 nm.Results There was a good linear relationship in the concent ration range of 10.0～200.0 μg·ml-1，the linear equation was y=14197x-2556（r= 0.9999）.The average recovery was 99.08%，with RSD=0.16%（n=6）.Conclusion The method was simple，reliable and accurate，and can be applied to the quality control of the preparation.

Danqi Xuening capsule；Danshensu；HPLC；content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.10.072

1672-2779（2015）-10-0140-03

：楊杰本文校對：周修森

2015-04-27）