袁凱　張智瑜　許素秀　趙黎明　徐秀榮（山東省淄博市動物疫病預(yù)防與控制中心255000）

劉素玉（山東省淄川區(qū)畜牧獸醫(yī)局）

牛布魯氏菌病凝集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

袁凱張智瑜許素秀趙黎明徐秀榮（山東省淄博市動物疫病預(yù)防與控制中心255000）

劉素玉（山東省淄川區(qū)畜牧獸醫(yī)局）

本試驗(yàn)用3種檢測方法(PBPT、SAT、ELISA)對170份奶牛血清進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，3種方法的檢測陽性率分別為5.29%、100%、14.1%。

牛布魯氏菌病凝集試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

布魯氏菌病(brucellosis)是由布魯氏桿菌侵入機(jī)體，引起的傳染變態(tài)反應(yīng)性人畜共患慢性傳染病[1]。近些年來，隨著牛肉、奶制品的需求不斷增加，導(dǎo)致牛的調(diào)運(yùn)越來越頻繁，因此加強(qiáng)牛布病監(jiān)測，逐步淘汰凈化布病陽性牛是預(yù)防控制牛布病傳播的必不可少的手段之一。牛布病日常檢測方法常用虎紅平板試驗(yàn)(RBPT)和試管凝集試驗(yàn)(SAT)，但在操作上、敏感性和特異性等方面不太令人滿意[2]。筆者用IDEXX公司的牛布魯氏菌病抗體檢測試劑盒與傳統(tǒng)的RBPT和SAT進(jìn)行了比較。具體情況如下：

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1設(shè)備酶標(biāo)儀、恒溫箱、試管架、移液器、刻度吸管等。

1.1.2試劑虎紅平板凝集抗原、試管凝集抗原、陰陽性血清由青島易邦公司提供，牛布魯氏菌病抗體檢測試劑盒由IDEXX公司提供。

1.1.3樣本奶牛血清樣本為2015年本市春季集中監(jiān)測的170份樣本。

1.2方法

1.2.1虎紅平板試驗(yàn)按GB/T 18646-2002方法進(jìn)行。

1.2.2試管凝集試驗(yàn)按GB/T 18646-2002方法進(jìn)行。

1.2.3ELSIA方法參照試劑盒說明書。（1）樣品加樣和孵育：吸取190μl稀釋緩沖液加入到酶標(biāo)板各孔中，在適宜的孔中分別加入未經(jīng)稀釋的陰陽性血清和待檢血清各

10μl，覆膜后，18～26℃孵育1h。（2）洗滌：用300μl的洗滌溶液進(jìn)行洗滌，每個板孔洗滌3次。最后一次洗滌后在吸水材料上拍板吸干。（3）酶標(biāo)抗體的加入和孵育：每孔中加入100μl酶標(biāo)抗體，覆膜后，18～26℃孵育30min。（4）洗滌同上。（5）加入TMB底物：每孔加入100μl TMB底物溶液，18～26℃避光孵育20min。（6）終止并讀取結(jié)果：每孔加入100μl終止液后，測量并記錄樣品和對照在450nm下的吸光值。（7）結(jié)果判斷：樣品的S/P的百分率小于或等于110%時，為陰性；大于或等于120%時為陽性；兩者之間為可疑。

2　結(jié)果

170份樣本中，RBT方法檢測陽性樣品9份，對該9份樣品用SAT方法進(jìn)行復(fù)核檢測，結(jié)果9份全為陽性；用ELISA方法進(jìn)行檢測陽性樣品24份(其中包括SAT檢測陽性的9份)，可疑樣品3份(見附表)。

附表　ELISA、RBPT和SAT檢測結(jié)果

3　討論

（1）上述試驗(yàn)結(jié)果表明SAT試驗(yàn)與ELISA試驗(yàn)相比較，SAT敏感性低于ELISA檢測方法，而且前期準(zhǔn)備、操作較為繁瑣，結(jié)果判定上有一定人為因素的影響。（2）三種檢測方法的比較：RBPT操作簡單，敏感性較高，特異性較低，結(jié)果判斷上容易受人為因素的影響。SAT操作復(fù)雜，敏感性較低，特異性較高，結(jié)果判斷上容易受人為因素的影響。ELISA操作適中，敏感性較高，特異性有待進(jìn)一步研究，結(jié)果判斷較為客觀。（3）RBPT檢測的9份陽性樣品，經(jīng)SAT和ELISA方法檢測也均為陽性，9份陽性樣品的三種檢測方法復(fù)合率為100%，證明了ELISA方法可以替代SAT對RBPT檢測陽性的樣品進(jìn)行復(fù)核，尤其是檢測數(shù)量較多時可以大大減少檢測時間，并提高結(jié)果判斷的準(zhǔn)確性。因ELISA試驗(yàn)的特異性有待研究，是否可以完全替代SAT方法，還需進(jìn)一步研究。

[1]王殿滋.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].長春: 吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1985, 167-171.

[2]趙智香,康京麗等.OIE標(biāo)準(zhǔn)全乳iELISA與國標(biāo)全乳環(huán)狀試驗(yàn)在奶牛布魯氏菌病檢測中的研究[J].中國動物檢疫,2007(24): 11.

S858.23

A

1007-1733(2015)10-0008-01

（2015–07–20）