何蘇琴, 荊卓瓊, 白 濱, 文朝慧, 陳建軍

(1. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，蘭州 730070；2. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，蘭州 730070；3. 甘肅省出入境檢驗(yàn)檢疫局，蘭州 730020；4. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果花卉研究所，蘭州 730070)

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有害生物動(dòng)態(tài)
Information of Pests

桃樹黃萎病在我國首次發(fā)生報(bào)道

何蘇琴1*, 荊卓瓊1, 白 濱2, 文朝慧3, 陳建軍4

(1. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，蘭州 730070；2. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，蘭州 730070；3. 甘肅省出入境檢驗(yàn)檢疫局，蘭州 730020；4. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果花卉研究所，蘭州 730070)

在甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果所2010年建植的桃園內(nèi)，自2011年以來，每年6-8月都陸續(xù)出現(xiàn)枯死的桃樹；嚴(yán)重年份桃樹病株率達(dá)20%。經(jīng)病原菌分離培養(yǎng)、形態(tài)觀察和致病性測定，確認(rèn)桃樹枯死是由大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)侵染所致。這是桃樹黃萎病在我國的首次發(fā)生報(bào)道。

桃樹；Verticilliumdahliae； 黃萎病

大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)是一種農(nóng)田中常見、寄主范圍廣泛的植物病原菌，可以侵染數(shù)百種有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的植物，包括觀賞花卉、蔬菜、纖維作物、精油和調(diào)料作物、漿果、觀賞樹木、果樹和灌木等。易感病的果樹和灌木有：咖啡屬(CoffeaLinn.)小?？Х?C.arabicaLinn.)；木犀欖屬(OleaLinn.)木犀欖(O.europaeaLinn.)；鱷梨屬(PerseaMill.)鱷梨(P.americanaMill.)；黃連木屬(PistaciaLinn.)阿月渾子(P.veraLinn.)；李屬(PrunusLinn.)巴旦杏(P.amygdalusDulcis)、甜櫻桃(P.aviumLinn.)、酸櫻桃(P.cerasusLinn.)、櫻桃李(P.cerasiferaEhrhar)、歐洲李(P.domesticaLinn.)、桂櫻(P.laurocerasusLinn.)、盧李梅(P.lusitanicaLinn.)、P.pennsylvanicaLinn.;杏屬(ArmeniacaMill.)梅(A.mumeSieb.)；桃屬(AmygdalusLinn.)桃(A.persicaLinn.)、扁桃(A.communisLinn.)；櫻屬(CerasusMill.)圓葉櫻桃[C.mahaleb(Linn.) Mill.);懸鉤子屬(RubusLinn.)黑莓(R.allegheniensisPorter)、覆盆子(R.idaeusLinn.)、喜陰懸鉤子(R.occidentalisLinn.)、空心泡(R.rosae-foliusSmith)、黑樹莓(R.ursinusCham.)；可可樹屬(TheobromaLinn.)可可(T.cacaoLinn.)等。蘋果屬(MalusMill.)和梨屬(PyrusLinn.)植物不受侵染。由于歷史的原因，Verticilliumdahliae常與黑白輪枝菌(V.albo-atrum)混淆，在一些早期文獻(xiàn)中，許多木本植物黃萎病的病原被錯(cuò)定為V.albo-atrum。這兩個(gè)種除了在形態(tài)上存在一定差別外(V.dahliae菌絲和分生孢子梗白色，產(chǎn)生微菌核；V.albo-atrum分生孢子梗具暗色的基部，產(chǎn)生暗色的休眠菌絲，不產(chǎn)生微菌核),其寄主范圍也存在差異：V.dahliae擁有極其廣泛的寄主范圍，而V.albo-atrum的寄主范圍很窄，主要從啤酒花(HumuluslupulusLinn.)、臭椿[Ailanthusaltissima(Mill.)Swingle]、馬鈴薯(SolanumtuberosumLinn.)和紫花苜蓿(MedicagosativaLinn.)上分離到[1-2]。

2011年以來，在甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果花卉研究所2010年建植的桃園內(nèi)(該園為桃樹品種圃，之前園內(nèi)種植的是蘋果樹和棗樹)，每年的6-8月都陸續(xù)出現(xiàn)枯死的桃樹，嚴(yán)重年份(2011年)，病株率達(dá)20%，病害在園內(nèi)呈點(diǎn)、片狀發(fā)生。

通過對病樹的病原分離、回接和病原菌形態(tài)學(xué)觀察，確認(rèn)桃樹枯死是由大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)侵染引起的。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，這是桃樹黃萎病在我國的首次發(fā)生報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 病害發(fā)生觀察和標(biāo)樣采集

2011年7月18日和2013年6月14日，從甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果花卉研究所的桃園內(nèi)采集典型黃萎病癥狀的桃樹病枝，用枝剪剪取罹病枝條(每株病樹剪取5個(gè)枝條)，用于病原菌分離。共采集了14份標(biāo)樣(其中2011年4份，2013年10份)。

在2011-2014年生長季，對桃園中罹病桃樹的病害癥狀及病害發(fā)展情況進(jìn)行不定期觀察。

1.2 病原菌分離及形態(tài)學(xué)鑒定

1.2.1 培養(yǎng)基配方

PDA：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，瓊脂粉12 g，自來水1 000 mL。

PD培養(yǎng)液：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，自來水1 000 mL。

1.2.2 病原菌分離

以每株病樹為一個(gè)分離單位進(jìn)行病原菌的分離。將病枝剪成大小約0.5 cm節(jié)段，75%乙醇表面消毒3 s，滅菌水沖洗3次，用滅菌濾紙吸干病組織表面水分，置PDA平板上，(25±2)℃下培養(yǎng)，長出的菌絲及時(shí)轉(zhuǎn)至PDA平板上，并通過挑取菌絲尖端進(jìn)行純化，對純化菌株編號并進(jìn)行顯微形態(tài)觀察。

1.2.3 Koch’s法則證病

用于接種的菌株(菌株編號桃-3-1，2011年7月18日分離)在PD培養(yǎng)液中25 ℃靜置培養(yǎng)4 d(每天搖動(dòng)4次)，經(jīng)4層紗布過濾并調(diào)整分生孢子濃度為1×106個(gè)/mL；自桃園采集當(dāng)年生、50 cm長的健康枝條，每10條一組，共4組，將每組健康枝條分別插入盛200 mL清水(對照)和200 mL菌懸液的玻璃缸中，2次重復(fù)。4 h后所有處理補(bǔ)加清水200 mL。24 h后，將所有處理的菌懸浮液和清水全部倒出，重新加入500 mL清水。之后每天換清水，直至第7 天。

7 d后，取各處理桃枝1/2長處截取0.5 cm枝段，進(jìn)行病原菌的重分離。分離方法同1.3.1。

1.2.4 病原菌形態(tài)特征觀察

將菌株桃-3-1在PDA平板上20 ℃下培養(yǎng)14 d，觀察和測量分生孢子梗、分生孢子和微菌核的形態(tài)和大小。采用Olympus BH-2生物顯微鏡觀察和測量培養(yǎng)物形態(tài)特征，各項(xiàng)目測量30次；采用DCM510拍攝顯微照片。

依據(jù)病菌分生孢子梗、分生孢子和微菌核的形態(tài)特征進(jìn)行形態(tài)比對和種類鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 癥狀描述

最初，桃樹部分枝條及葉片萎蔫，之后葉片黃化脫落，幼果皺縮，大多數(shù)病樹于發(fā)病1～2周后整棵樹枯死；樹齡4年的極個(gè)別病樹來年仍可存活(罹病枝枯死，無病枝仍存活)。部分病樹主干和病枝的韌皮部和木質(zhì)部變黃褐色(圖1)。

2.2 病原菌分離和形態(tài)特征觀察

分離培養(yǎng)的14份標(biāo)樣均獲得菌落形態(tài)一致的輪枝狀真菌。病菌菌絲白色、生長慢，氣生菌絲稀疏；菌落初為白色，隨著微菌核的大量產(chǎn)生，菌落漸呈黑色(見圖2a～d)。

顯微形態(tài)：分生孢子單細(xì)胞，無色，卵圓形、長橢圓形或桿狀，形狀和大小的變幅較大，大小為(2.44～11.35)μm× (1.22～4.89)μm，平均(5.11±2.00)μm×(2.63±1.06)μm；分生孢子梗無色，直立，單生、對生或1至多層輪生，每層輪枝上可生3～6個(gè)小梗，少數(shù)生側(cè)枝；小梗為細(xì)長的瓶梗，瓶梗大小為(12.09～29.34)μm×(1.10～2.75)μm，平均(20.68±4.94)μm×(2.00±0.54)μm；輪枝頂端的小梗長度可達(dá)30.56～71.43 μm。微菌核黑色，葚孢型，(20.90～119.40)μm×(14.93～35.82)μm，平均(54.73±24.27)μm×(25.37±5.30)μm，多個(gè)微菌核可相互連接，難分彼此(見圖2e～j)。

致病性：接種后1 h，接菌懸液的桃枝即呈萎蔫狀；接種后24 h，接菌懸液桃枝的吸水量明顯少于對照，吸水量約為對照的1/2。接種7 d后，對接種桃枝進(jìn)行病原菌的重分離，原接種菌的分出率為60%，對照枝條未分出病菌。

圖1 桃樹黃萎病田間癥狀Fig.1 Field symptoms of peach trees infected by Verticillium dahliae

依照科赫氏法則及病菌形態(tài)特征比對[1-6]，將桃樹黃萎病的病原鑒定為VerticilliumdahliaeKleb.。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)確定這是我國對桃樹黃萎病的首次報(bào)道。

3 討論

黃萎病是溫帶地區(qū)作物的重要病害，病害在農(nóng)灌區(qū)尤其突出。潮濕的土壤和21～27 ℃的溫度有利于黃萎病發(fā)生[7]，一旦被V.dahliae感染，土壤的侵染力可以保持10年或更長時(shí)間[1]。V.dahliae可以在超過25個(gè)屬的雙子葉雜草上定殖，產(chǎn)生或不產(chǎn)生病害癥狀[1]。V.dahliae通過羊的消化道后仍可保持致病力，羊可以作為病菌攜帶者跨區(qū)域遠(yuǎn)距離傳播病菌[8]。寄主和非寄主植物根分泌物可刺激微菌核萌發(fā)[7]。植物病原線蟲，特別是短體線蟲屬(Pratylenchus)的線蟲可以加重黃萎病的發(fā)生[1]。良好的土壤肥力有助于提高植物的抗病能力，合適的氮磷比可以減輕黃萎病的嚴(yán)重度[7]。在生長季的早期澆水過多可導(dǎo)致發(fā)病率增加；控制用水量可以降低病害嚴(yán)重度[7]。無論作為保護(hù)劑或治療劑，尚沒有任何一種殺菌劑能取得令人滿意的防治效果[1]。利用抗耐病品種或砧木，選用無病苗木，無病土壤種植是避免病害發(fā)生的最好辦法[7]。

圖2 病原菌形態(tài)特征Fig.2 Morphological characteristics of the pathogen

利用蕓薹屬植物作為綠肥和進(jìn)行輪作倒茬，及利用太陽暴曬進(jìn)行土壤消毒等措施，在馬鈴薯、草莓、花椰菜、油橄欖等作物的黃萎病和其他土傳病害的防治中取得了較好的效果[9-14]，值得在桃樹黃萎病的防治中借鑒并開展相關(guān)的試驗(yàn)研究。

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The first report of peach trees verticillium wilt caused byVerticilliumdahliaein China

He Suqin1, Jing Zhuoqiong1, Bai Bin2, Wen Zhaohui3, Chen Jianjun4

(1. Institute of Plant Protection, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730070, China;2. Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730070, China; 3. Gansu Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Lanzhou 730020, China; 4. Institute of Fruit and Floriculture Research, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730070, China)

Wilted and defoliated peach trees were observed in June to August since 2011 in the peach garden (established by Institute of Fruit and Floriculture Research, Gansu Academy of Agricultural Sciences in 2010) in Lanzhou. The incidence reached to as high as 20% in the most serious year 2011. Following Koch’s Postulate, the pathogen was identified asVerticilliumdahliaebased on the morphological characteristics. This is the first report of verticillium wilt of peach trees caused byVerticilliumdahliaein China.

Prunuspersica；Verticilliumdahliae； verticillium wilt

2014-06-10

2014-09-12

S 436.621.1

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.044

* 通信作者 E-mail： gshesuqin@sina.com