章淑玲，林谷園，歐高政*

(1. 福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院園藝園林系，福州 350119; 2.福建出入境檢驗檢疫局, 福州 350001)

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金線蘭灰霉病發(fā)生初報

章淑玲1，林谷園2，歐高政1*

(1. 福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院園藝園林系，福州 350119; 2.福建出入境檢驗檢疫局, 福州 350001)

灰霉病是金線蘭生產(chǎn)中出現(xiàn)的一種新的重要病害，本研究對該病癥狀進行了觀察，并通過病原形態(tài)鑒定、rDNA-ITS序列分析及致病性測定鑒定其致病菌為灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)。針對該病的發(fā)生危害特點，提出了相應的防治措施。

金線蘭； 灰霉??； 病原鑒定； 病害調(diào)查； 防治

金線蘭[Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl]又名花葉開唇蘭，屬蘭科開唇蘭屬多年生草本植物，富含有對人體有益的氨基酸、?；撬帷⒍嗵穷惣拔⒘吭氐萚1]。金線蘭自然繁殖率很低且生長十分緩慢，再加上自然環(huán)境的破壞及人為的過度采挖，其野生數(shù)量極為稀少[2]，1990年被福建省政府列為瀕危藥用植物[3]。為了緩解金線蘭市場供應的不足，組培技術(shù)逐步發(fā)展并成熟起來[4-7]。金線蘭組培苗在人工大棚種植時，由于氣候、營養(yǎng)條件以及栽培技術(shù)的改變導致某些病蟲害的發(fā)生與危害。已報道的病害有金線蘭莖枯病、猝倒病、軟腐病、炭疽病以及霜霉病等[8-10]。2013年以來通過對福建省多地棚栽金線蘭病蟲害的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)金線蘭移栽后易出現(xiàn)腐爛、發(fā)霉等癥狀，經(jīng)進一步的癥狀觀察、病原鑒定及致病性測定被鑒定為灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.exFr.)引起的金線蘭灰霉病，此病是金線蘭生長中出現(xiàn)的新病害?，F(xiàn)將結(jié)果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 病害調(diào)查與癥狀觀察

2013年3月以來作者調(diào)查了福建省福州、漳州、寧德、龍巖等地大棚中金錢蘭病蟲害，發(fā)現(xiàn)灰霉病是金線蘭上新出現(xiàn)的一種重要病害，并對該病進行了詳細的觀察與記錄。

1.2 病原菌的分離及形態(tài)鑒定

用常規(guī)的組織分離法分離病組織中的病原菌[11]，分離得到的菌株經(jīng)單孢純化后接種在馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(potato sucrose agar，PSA)平板上并置于26～28 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)，觀察其培養(yǎng)性狀及在光學顯微鏡下的形態(tài)特征。

1.3 病原菌的rDNA-ITS序列測定

根據(jù)武波等的SDS法提取病菌的DNA[12]。PCR擴增采用通用引物ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′和ITS4: 5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。PCR反應程序為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性45 s，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物委托上海生工生物工程技術(shù)服務有限公司測序，并將測序結(jié)果序列輸入GenBank中進行登錄及BLAST比對。

1.4 病原菌的致病性測定

將在PSA上培養(yǎng)10 d后的供試菌株用無菌水沖洗下表面的孢子，制成1×106個/mL的孢子懸浮液噴霧接種于移栽定植10 d后的金線蘭苗上，用塑料薄膜覆蓋置于溫室大棚內(nèi)，7 d后觀察植株的癥狀表現(xiàn)。從接種發(fā)病后的植株中重新分離鑒定其中病原物，并與原接種菌進行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害的發(fā)生及癥狀特點

灰霉病在所調(diào)查的福建省各個地區(qū)棚栽金線蘭中均有發(fā)生，發(fā)病率為5%～20%，主要發(fā)生于移栽定植期及生長期。病菌可危害金線蘭的葉片，有時也可侵染葉柄或莖。發(fā)病時多從植株中下部葉片的葉尖或葉緣開始向葉柄方向侵染，病組織初期呈淡褐色水漬狀腐爛，而后失水干枯(圖1a)。病部逐漸向上部葉片發(fā)展，最后可導致心葉腐爛或整株死亡(圖1b)。濕度大時病組織上易產(chǎn)生灰色或灰白色的霉層(圖1c)。該病主要發(fā)生于高溫高濕及通氣條件較差的大棚環(huán)境中，同時組培苗長勢較弱、出苗時培養(yǎng)基未清洗干凈及栽培過程中造成的機械傷口或蟲傷較多時發(fā)病較重。

2.2 病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)特征

培養(yǎng)性狀：在PSA平板培養(yǎng)基上，菌絲初期無色透明,呈輻射狀生長，中后期菌絲顏色不斷加深，呈淺褐色或深褐色(圖1d)。菌落棉絮狀，氣生菌絲發(fā)達，5～7 d后長出分生孢子梗及分生孢子，10 d后菌落表面著生褐色菌核。

形態(tài)特征：分生孢子梗直立、細長，單生或數(shù)根叢生，具有分隔；頂端的產(chǎn)孢細胞膨大呈球狀，其上著生小柄，小柄上產(chǎn)生大量的分生孢子，似葡萄穗狀(圖1e)。分生孢子形狀多樣，多數(shù)為卵圓形、卵形或長卵圓形，(8～21)μm×(5～10)μm。菌核圓形、橢圓形或不規(guī)則形，通常散生于培養(yǎng)基中，菌核(0.6～4.2)mm×(0.8～3.0)mm。

根據(jù)培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征，對比參考文獻[13]，將該病原菌鑒定為灰葡萄孢(B.cinerea)。

圖1 金線蘭灰霉病的癥狀和病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)特征Fig.1 The symptoms of gray mold on Anoectochilus roxburghii and cultural and morphologic characters of Botrytis cinerea

2.3 病原菌的分子生物學鑒定

病原菌DNA經(jīng)PCR擴增后的產(chǎn)物經(jīng)測序，獲得539 bp的rDNA-ITS序列(GenBank登錄號為KJ502656)。該序列與GenBank中核酸數(shù)據(jù)進行BLAST比對，結(jié)果表明：該菌與已報道的灰葡萄孢(B.cinerea)的有性世代富克爾核盤菌(Botryotiniafuckeliana)序列相似性最高，相似性達99%～100%。

2.4 致病性測定

接種1周后掀開塑料薄膜檢查金線蘭的生長情況，可見接種后的金線蘭表現(xiàn)出與自然發(fā)病相似的癥狀(圖1f)，從病組織上也可分離獲得與原接種菌一致的病原菌，由此通過柯赫氏法則確定了該病原菌的致病性。

3 討論

本文報道的金線蘭灰霉病為大棚栽培金線蘭生長中出現(xiàn)的一種新病害，該病的病原被鑒定為灰葡萄孢(B.cinerea)。該菌有廣泛的寄主范圍，可引起多種作物的灰霉病。病菌主要以分生孢子通過氣流進行傳播，在適宜的寄主及栽培環(huán)境條件下發(fā)病急、損失大。由于金線蘭可整株入藥或食用，故對于該病的防治應重在預防。建議采取的預防措施有：移栽前做好大棚的清潔衛(wèi)生工作；選擇長勢強壯的組培苗作為移栽苗，并做好瓶苗出瓶后的介質(zhì)清潔工作；保持栽培大棚中良好的通風環(huán)境，噴水時避免植株上留有水滴；栽培過程應盡量避免人工造成的機械傷口及減少害蟲的為害；發(fā)現(xiàn)病株立即清除，發(fā)病初期可選用50%腐霉利可濕性粉劑1 500～2 000倍，或45%噻菌靈懸浮劑800～1 200倍，或50%異菌脲可濕性粉劑1 000～1 500倍，隔7～10 d噴1次，連續(xù)噴2～3次。

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A preliminary report on occurrence of gray mold onAnoectochilusroxburghii

Zhang Shuling1, Lin Guyuan2, Ou Gaozheng1

(1. Department of Horticulture and Garden, Fujian Vocational College of Agriculture, Fuzhou 350119, China;2. Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China)

Gray mold is a new important disease onAnoectochilusroxburghii. The symptoms of the disease were observed and its pathogen was identified asBotrytiscinereaPers. based on morphology, analysis of ribosome rDNA-ITS sequences and pathogenicity. According to the occurrence characteristics of the disease, the corresponding control measures were proposed.

Anoectochilusroxburghii; gray mold; pathogen identification; investigation of disease; control measures

2014-02-28

2014-05-13

福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院2014年重點課題

S 432.4

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.027

* 通信作者 E-mail： 345535249@qq.com