關(guān)有良，臧東鈺，王丹

OCT4和P27kip1蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性

關(guān)有良1，臧東鈺2，王丹3△

目的研究OCT4和P27kip1蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)24例腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本OCT4和P27kip1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。觀察OCT4和P27kip1在腎癌組織中的陽性表達(dá)百分比及細(xì)胞分布情況。考察OCT4和P27kip1在性別、年齡（＜60歲和≥60歲）及癌細(xì)胞有無轉(zhuǎn)移間的表達(dá)水平差異。對(duì)兩者進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本OCT4和P27kip1蛋白陽性表達(dá)分別為16例（66.7%）和18例（75%），OCT4蛋白高、中及低表達(dá)分別為8例（33.3%）、5例（20.5%）及3例（12.5%），主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)，另有少部分在胞膜中表達(dá)。P27kip1高、中及低表達(dá)分別為3例（12.5%）、6例（25%）、9例（37.5%），陽性著色在胞漿和胞膜，少部分細(xì)胞核可表達(dá)。OCT4和P27kip1的表達(dá)水平在年齡、性別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在腫瘤有無轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。OCT4和P27kip1在腎癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.408，P＜0.05）。結(jié)論OCT4和P27kip1呈負(fù)相關(guān)，采用抑制OCT4表達(dá)或P27kip1的降解，尤其是降低胞質(zhì)中P27kip1的表達(dá)，可作為基因治療腎癌的一個(gè)新的的作用靶點(diǎn)。

基因療法；腎透明細(xì)胞癌；OCT4；P27kip1；免疫組織化學(xué)

腎癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其中60%～85%為腎透明細(xì)胞癌，腫瘤干細(xì)胞與癌癥發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，OCT4是胚胎干細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子，為一種重要的癌干細(xì)胞因子，其表達(dá)水平與一些惡性腫瘤如肝癌、喉癌等發(fā)生密切相關(guān)，并影響這些惡性腫瘤的生物學(xué)行為、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、治療及預(yù)后，水平表達(dá)高者進(jìn)展快、易發(fā)生轉(zhuǎn)移且預(yù)后差［1-3］。細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的紊亂與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，P27kip1屬于細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶抑制蛋白。目前關(guān)于OCT4在人腎癌組織中的表達(dá)情況及OCT4聯(lián)合P27kip1表達(dá)水平與臨床病理因素關(guān)系的研究尚少見報(bào)道。本研究旨在探討OCT4和P27kip1在腎癌組織中的表達(dá)及其與腎癌的臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2013年10月—2014年10月于本院行腎癌手術(shù)的24例患者的腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本，男16例，女8例，年齡50～74歲，平均（60.4±8.5）歲，中位年齡60歲。依據(jù)2004年WHO腎細(xì)胞癌病理分型標(biāo)準(zhǔn)，所有患者均于術(shù)后病理證實(shí)為腎透明細(xì)胞癌。

1.2 主要儀器和試劑小鼠抗人OCT4單克隆抗體（批號(hào)：14394708）、兔抗人P27kip1單克隆抗體（批號(hào)：14620812）、兔超敏二步法檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：k145611f）均購于中杉金橋生物技術(shù)有限公司；DAB顯色系統(tǒng)（武漢博士德公司），光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS BX51）。

1.3 OCT4和P27kip1蛋白表達(dá)的檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)OCT4、P27kip1蛋白在石蠟包埋病理標(biāo)本中的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)操作步驟按試劑盒說明，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。陰性對(duì)照以PBS代替一抗。

1.4 結(jié)果判定（1）OCT4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)［2］：隨機(jī)讀取5個(gè)高倍鏡視野（×200），按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比綜合判定。染色強(qiáng)度：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。陽性細(xì)胞數(shù)：＜5%0分，5%～25%1分，26%～50%2分，＞50%3分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞數(shù)得分之乘積，0分為陰性（-），1～3分為低表達(dá)（+），4～5分為中度表達(dá)（++），≥6分為高表達(dá)（+++）。P27kip1結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)讀取5個(gè)高倍鏡視野（×200），按陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比判定，P27kip1陽性細(xì)胞數(shù)＜10%記為“-”，10%～30%記為“+”，31%～60%記為“++”，＞60%記為“+++”。（2）考察OCT4和P27kip1在性別、年齡（＜60歲和≥60歲）及癌細(xì)胞有無轉(zhuǎn)移中的表達(dá)水平差異。（3）計(jì)算腎細(xì)胞癌中OCT4、P27kip1蛋白表達(dá)間的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OCT4和P27kip1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況癌組織中OCT4表達(dá)陽性為16例（66.7%），高、中及低表達(dá)分別為8例（33.3%）、5例（20.5%）及3例（12.5%），主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)，另有少部分在胞膜中表達(dá)，陽性染色呈現(xiàn)粗大棕黃色顆粒。癌組織有P27kip1表達(dá)18例（75%），高、中及低表達(dá)分別為3例（12.5%）、6例（25%）、9例（37.5%），P27kip1陽性著色在胞漿和胞膜，少部分在細(xì)胞核可表達(dá)，見圖1。

Fig.1Expressions of OCT4 and P27kip1in renal hyaline cell carcinoma（DAB staining，×200）圖1 OCT4和P27kip1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)（DAB顯色，×200）

2.2 OCT4和P27kip1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系OCT4、P27kip1的表達(dá)水平在性別、年齡間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與腫瘤在腫瘤有無轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.3 OCT4與P27kip1的相關(guān)性O(shè)CT4與P27kip1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.408，P=0.048），見表2。

3 討論

OCT4主要存在于多能干細(xì)胞中，并和其他因子一起維持多能干細(xì)胞多向分化潛能和自我更新能力。有關(guān)腎細(xì)胞癌的研究表明，OCT4在癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，OCT4表達(dá)與腎細(xì)胞

癌T分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性［4-5］。本研究結(jié)果顯示，腎癌組織中有OCT4陽性表達(dá)，與文獻(xiàn)［4］報(bào)道相符，表明OCT4陽性表達(dá)可能對(duì)癌癥的發(fā)生有促進(jìn)作用。此外，結(jié)果還顯示OCT4在年齡、性別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在腫瘤有無轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與文獻(xiàn)［6-7］相符，提示OCT4可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲能力有關(guān)。但與文獻(xiàn)［5］不一致，考慮原因?yàn)槲墨I(xiàn)［5］中患者86例，采用組織免疫熒光染色法檢測(cè)OCT4表達(dá)，本研究為24例，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)OCT4表達(dá)，樣本數(shù)量和實(shí)驗(yàn)方法不同可能是結(jié)果不同的原因之一。因此，筆者認(rèn)為臨床上通過檢測(cè)OCT4的表達(dá)有助于預(yù)測(cè)腎癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移狀況。

Tab.1Relationship between expressions of OCT4，P27kip1and clinicopathological parameters in patients with renal hyaline cell carcinoma表1 OCT4和P27kip1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系例（%）

Tab.2The relationship between expressions of OCT4 and P27kip1in renal hyaline cell carcinoma表2 OCT4和P27kip1在腎透明細(xì)胞癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的紊亂與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，P27kip1屬于細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶抑制蛋白。本研究顯示，癌組織中P27kip1蛋白的表達(dá)多定位于胞質(zhì)和胞膜，少數(shù)表達(dá)在胞核，與文獻(xiàn)［8-9］報(bào)道一致。因此，筆者認(rèn)為癌組織中P27kip1在胞核與胞漿的表達(dá)比例會(huì)有所降低。另有研究顯示，OCT4與Skp2在乳腺組織中的表達(dá)呈正相關(guān)［10］。癌組織中對(duì)P27kip1與Skp2兩者相關(guān)分析較多。研究顯示，在肺癌組織中兩者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)［11］。但有關(guān)OCT4和P27kip1表達(dá)間的關(guān)聯(lián)性尚無定論。研究顯示，喉癌中OCT4是過表達(dá)，在胃癌、宮頸癌組織中P27kip1表達(dá)則下調(diào)［12-13］。本研究顯示，OCT4與P27kip1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，筆者推測(cè)組織中可能存在OCT4-P27kip1通路，OCT4可能降低P27kip1的表達(dá)，尤其是在胞核中的表達(dá)，但機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。

綜上所述，針對(duì)OCT4和P27kip1的作用機(jī)制，采用抑制OCT4表達(dá)或P27kip1的降解，尤其是降低胞質(zhì)中P27kip1的表達(dá)，可作為腎癌診治的一個(gè)新的基因治療的作用靶點(diǎn)。

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（2015-03-20收稿 2015-05-06修回）

（本文編輯 陸榮展）

The expression of OCT4 and P27kip1in renal hyaline cell carcinoma and their correlations

GUAN Youliang1，ZANG Dongyu2，WANG Dan3△
1 Department of Urinary Surgery of the First Affiliated Hospital，Liaoning Medical College，Jinzhou 121001，China；2 Department of Thoraxes Surgery of the Third Affiliated Hospital，Liaoning Medical College；3 Department of Histology and Embryology，Liaoning Medical College△

ObjectiveTo investigate the expressions of OCT4 and P27kip1and their correlations in renal hyaline cell carcinoma.MethodsA total of 24 samples of renal hyaline cell carcinoma were detected by immunohistochemistry.The rate of cells with positive labelling of OCT4 and P27kip1and their intra cellular distribution were observed in renal hyaline cell carcinoma.The expression levels of OCT4 and P27kip1were compared between different gender，age（＜60y and≥60y）and cancer cell metastasis groups.ResultsThe rates of cells with positive OCT4 and P27kip1expressions were 66.7%and 75%in renal hyaline cell carcinoma respectively.The ratio of cells with high，middle and low expression of OCT4 were 33.3%，20.5%and 12.5%in renal hyaline cell carcinoma tissues.OCT4 was mainly expressed in cytoplasm and nuclei with a few was expressed in the cell membrane.The ratio of cells with high，middle and low expression of P27kip1were 12.5%，25% and 37.5%in renal hyaline cell carcinoma tissues respectively.The positive staining of P27kip1was in the cytoplasm and cell membrane，and a small number of nuclei were expressed.There were no significant differences in OCT4 and P27kip1between different age and gender groups.There were significant differences in OCT4 and P27kip1expressions between patients with metastasis and patients without metastasis（P＜0.05）.A negative correlation was found between OCT4 and P27kip1expressions in renal hyaline cell carcinoma（rs=-0.408，P＜0.05）.ConclusionThe expression of OCT4 is negatively correlated with the expression of P27kip1.Inhibiting expressions of OCT4 or P27kip1，especially knocking down P27kip1in cytoplasm can be used as a new diagnosis and treatment of renal cancer gene therapy.

gene therapy；renal clear cell carcinoma；OCT4；P27kip1；immunohistochemistry

R737.11

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.12.018

遼寧省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2013022009）；遼寧醫(yī)學(xué)院校長(zhǎng)基金項(xiàng)目（XZJJ20130243）

1遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院泌尿外科（郵編121001）；2遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院胸外科；3遼寧醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室

關(guān)有良（1973），男，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事腎癌發(fā)病機(jī)制研究

△通訊作者E-mail：595680903@qq.com