錢永生，蔡 蘇，馬婉琴，樓鈺函，倪炎棟，吳劍丙

(杭州師范大學(xué),生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,浙江杭州 310036)

4種殺菌劑對(duì)紅花芍藥褐斑病的室內(nèi)毒力

錢永生，蔡 蘇，馬婉琴，樓鈺函，倪炎棟，吳劍丙*

(杭州師范大學(xué),生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,浙江杭州 310036)

紅花芍藥(Paeonia lactiflora‘Hong hua’)褐斑病是其生產(chǎn)上較為常見(jiàn)的病害之一。在實(shí)驗(yàn)室前期研究工作中發(fā)現(xiàn),總狀毛霉(Mucor racemosus)是引起紅花芍藥褐斑病的重要致病菌。本試驗(yàn)測(cè)定總狀毛霉對(duì)4種常用殺菌劑的藥物敏感性,結(jié)果顯示,戊唑醇、腐霉利、異菌脲和多菌靈對(duì)總狀毛霉的抑制中濃度(EC50值)分別為12.01,168.58,691.02,6 249.66 μg·mL-1。由此可見(jiàn),戊唑醇對(duì)由總狀毛霉引起的紅花芍藥褐斑病防治效果最佳。

紅花芍藥;褐斑病;總狀毛霉;藥敏試驗(yàn)

文獻(xiàn)著錄格式:錢永生,蔡蘇,馬婉琴,等.4種殺菌劑對(duì)紅花芍藥褐斑病的室內(nèi)毒力[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,56(9):1454-1456.

DOI 10.16178/j.issn.0528-9017.20150937

芍藥(Paeonia lactiflora)為芍藥科芍藥屬多年生宿根草本花卉,花梗挺直,花色豐富,花姿典雅,是我國(guó)傳統(tǒng)名花,具有3 900年的栽培歷史,在庭院、景區(qū)栽培和盆栽等方面被廣泛運(yùn)用,與牡丹并稱為“花王”與“花相”,在國(guó)外也有“花中皇后”的美稱。此外,芍藥是我國(guó)傳統(tǒng)的中草藥,是浙江省道地藥材“浙八味”之一,主要用于治療炎癥性的疾病,如關(guān)節(jié)炎、肝炎等[1-3]。近年來(lái)其中草藥品質(zhì)逐漸被人們認(rèn)識(shí),種植面積不斷擴(kuò)大[4]。然而在栽培種植過(guò)程中,芍藥的各種病害問(wèn)題日漸突出,如輪紋病引起芍藥植株葉片枯黃;白粉病使整個(gè)植株布滿白粉狀物質(zhì),嚴(yán)重影響觀賞價(jià)值;灰霉病危害芍藥的葉、花和莖,造成花蕾枯萎、葉片焦枯等;每年8、9月高溫多雨季節(jié),芍藥炭疽病發(fā)病嚴(yán)重,引起黑褐色病斑,天氣潮濕時(shí),病斑表面產(chǎn)生粉紅色孢子堆[5-7]?；瘜W(xué)農(nóng)藥是防治植物病害最直接有效的方法。但農(nóng)藥的不合理使用造成環(huán)境污染、藥品殘留超標(biāo)及病菌耐藥等問(wèn)題,對(duì)藥用植物的安全生產(chǎn)造成重大隱患。因此,提高中藥材的安全衛(wèi)生質(zhì)量,合理篩選殺菌劑,以達(dá)到最佳藥理品質(zhì),是當(dāng)前藥用植物病害防治研究工作的重點(diǎn)。弄清化學(xué)農(nóng)藥對(duì)病原菌的殺菌效果,可有效指導(dǎo)合理用藥,科學(xué)用藥[8]。

本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定浙江省磐安地區(qū)紅花芍藥褐斑病病原菌——總狀毛霉對(duì)4種殺菌劑的藥物敏感性,確定常用化學(xué)殺菌劑最佳殺菌效果,為芍藥真菌病害合理用藥提供理論依據(jù)及科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株紅花芍藥褐斑病病株于2013年6月采集自浙江省磐安地區(qū),病原菌經(jīng)鑒定為總狀毛霉,并保存在浙江省藥用植物種質(zhì)改良與質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

供試藥劑有80%多菌靈可濕性粉劑(江蘇省太倉(cāng)市農(nóng)藥廠有限公司),測(cè)試濃度為0,10,20, 160,320,640,1 280,2 560,10 240 μg·mL-1; 500 g·L-1異菌脲懸浮劑(拜耳作物科學(xué)(中國(guó))有限公司),測(cè)試濃度為0,78,155,310,620, 1 250,2 500,5 000,10 000,20 000 μg·mL-1;鹽城利民農(nóng)化有限公司生產(chǎn)的91.5%戊唑醇原藥,測(cè)試濃度為0,1.25,2.5,5,10,20,40 μg· mL-1;50%腐霉利可濕性粉劑(日本住友化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社),測(cè)試濃度為0,1,2,4,8,16, 32,64,128,256,1 024 μg·mL-1。

1.2 處理設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)多菌靈、異菌脲、戊唑醇、腐霉利等4種殺菌劑不同處理濃度,殺菌劑按不同處理濃度加入新的PDA平板,以未加的PDA平板作對(duì)照,同一條件下接種直徑為0.5 cm的總狀毛霉病原菌,并于25℃恒溫黑暗倒置培養(yǎng),重復(fù)6個(gè),至對(duì)照病原菌直徑生長(zhǎng)距平板邊緣0.5 cm處時(shí)停止培養(yǎng)。采用十字交叉法進(jìn)行測(cè)量統(tǒng)計(jì)及拍照記錄。

根據(jù)藥物篩選結(jié)果,以設(shè)定的藥劑濃度為橫坐標(biāo),以病原菌生長(zhǎng)相對(duì)直徑作縱坐標(biāo),采用SigmaPlot軟件繪制藥物敏感濃度回歸曲線,求出各藥劑對(duì)病原菌的毒力回歸方程、抑制中濃度(EC50值)及相關(guān)系數(shù)(R2)。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥劑敏感性

測(cè)定紅花芍藥褐斑病致病菌總狀毛霉對(duì)4種殺菌劑敏感性。由圖1可見(jiàn),4種殺菌劑對(duì)總狀毛霉均有抑制作用。其中,戊唑醇效果最佳,在40 μg· mL-1時(shí)真菌基本無(wú)法生長(zhǎng),而異菌脲和多菌靈在極高濃度下仍不能完全抑制真菌生長(zhǎng)。此外,預(yù)實(shí)驗(yàn)所用的腐霉利濃度128 μg·mL-1的抑菌效果不佳。

圖1 總狀毛霉對(duì)異菌脲、腐霉利、多菌靈和戊唑醇的敏感性

2.2 EC50值

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,設(shè)定殺菌劑濃度梯度,測(cè)定總狀毛霉對(duì)4種殺菌劑的EC50值,計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

抑制率/%=(對(duì)照處理菌落直徑-殺菌劑處理菌落直徑)/(對(duì)照處理菌落直徑-0.5)×100。

由表1可見(jiàn),多菌靈濃度為2 560 μg·mL-1時(shí),對(duì)總狀毛霉的抑制率僅為35.47%,與使用異菌脲310 μg·mL-1時(shí)抑制效果相當(dāng),而戊唑醇10 μg·mL-1效果較前2種殺菌劑好。

表1 4種殺菌劑對(duì)紅花芍藥致病菌（總狀毛霉）菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

進(jìn)一步計(jì)算4種殺菌劑對(duì)總狀毛霉的毒力回歸方程、抑制中濃度(EC50值)及相關(guān)系數(shù)(R2) (表2)。

表2 4種殺菌劑對(duì)紅花芍藥致病菌總狀毛霉的EC50測(cè)定

其中,多菌靈的EC50值最大,為6 249.66 μg· mL-1,戊唑醇EC50值最小,僅為12.01 μg·mL-1,其余異菌脲EC50值為691.02 μg·mL-1,腐霉利EC50值為168.59 μg·mL-1。這一結(jié)果與平板試驗(yàn)相一致,戊唑醇對(duì)總狀毛霉的抑菌效果最佳。

3 小結(jié)與討論

近年來(lái),隨著我國(guó)中藥材植物種植面積的不斷擴(kuò)大和自然生態(tài)環(huán)境的不斷改變,造成藥用植物病害問(wèn)題日漸突出,對(duì)藥材產(chǎn)量和質(zhì)量產(chǎn)生很大威脅[9]。據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì),一般病害可造成藥用植物產(chǎn)量減少20%～30%,嚴(yán)重的高達(dá)50%,甚至絕收[10]。藥用植物的真菌病害屢見(jiàn)報(bào)道張爭(zhēng)等[11]報(bào)道可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)可引起白木香枝枯病;趙云青等[12]發(fā)現(xiàn)羅氏小核菌(Sclerotium rolfsii)可引起金線蓮白絹病;羅有強(qiáng)等[13]曾報(bào)道膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)可引起山麥冬葉枯病等。目前,對(duì)于中藥材農(nóng)藥殘留檢測(cè)已引起生產(chǎn)者和研究人員的重視,吳加倫等[14]在白芍中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有機(jī)氯殘留。因此,如何篩選合適的殺菌劑,達(dá)到最佳防治效果及合理用藥,對(duì)于藥用植物栽培管理具有重要意義。本試驗(yàn)采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定4種殺菌劑對(duì)紅花芍藥褐斑病病原菌總狀毛霉的室內(nèi)毒力測(cè)定,結(jié)果顯示,多菌靈和異菌脲的防效較差,用藥濃度高,有殘留及污染的風(fēng)險(xiǎn)。戊唑醇?xì)⒕Ч罴?可用于浙江地區(qū)紅花芍藥及其他藥用植物病害治理。此外,本研究?jī)H提供了室內(nèi)藥物敏感性分析,田間藥效還需進(jìn)一步驗(yàn)證,以期為解決浙江地區(qū)紅花芍藥及其他藥用植物存在的病害提供合理的防治策略。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

S 482.2

A

0528-9017(2015)09-1454-03

2015-04-24

浙江省教育廳項(xiàng)目(Y201431430);浙江省自然科學(xué)基金(LY14C010003);浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃暨新苗人才計(jì)劃(2015R423048);杭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20130432B07);浙江省藥用植物種質(zhì)改良與質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放項(xiàng)目(201308,201313)

錢永生(1980-),男,浙江蕭山人,實(shí)驗(yàn)師,主要從事植物真菌病害研究及管理工作。E-mail:qianyongsheng@163.com。

吳劍丙。E-mail:jianbingwu@zju.edu.cn。