趙照林，楊 杰，駢躍斌，劉 欣，郭 尚

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西 太原 030031）

白色金針菇作為金針菇[Flammulina velutipes(Fr.V.)Sing.]的變種，與傳統(tǒng)的黃色品系相比，菇體質(zhì)地鮮嫩柔軟，菌蓋滑嫩、柄脆，味美適口，口味感覺獨(dú)特且更富食欲感，外觀色澤品相宜人，商品價(jià)值高，為金針菇之上品[1－2]。

目前，白色金針菇工廠化生產(chǎn)技術(shù)在食用菌生產(chǎn)中較為成熟[3]，但在菌種制作方面，國(guó)內(nèi)大部分企業(yè)金針菇菌種生產(chǎn)仍采用固體菌種形式。采用固體菌種存在生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、菌齡不一致等缺點(diǎn)[4]。液體菌種具有培養(yǎng)周期短、菌絲體生長(zhǎng)條件相同、菌齡一致、出菇整齊、現(xiàn)蕾快、成本低、純度高、活力強(qiáng)、接種方便和接種效率高等特點(diǎn)，且有利于工廠化、規(guī)范化高效率栽培，可解決食用菌集約化生產(chǎn)中的瓶頸制約難題，頗受食用菌行業(yè)關(guān)注[5]。

近年來，有關(guān)金針菇液體菌種培養(yǎng)的研究已有一些相關(guān)的報(bào)道。但在具體應(yīng)用方面，只有少數(shù)實(shí)力強(qiáng)的大型企業(yè)能在工廠化生產(chǎn)上應(yīng)用液體菌種培養(yǎng)金針菇。其主要原因除了設(shè)備要求高，技術(shù)難度大外，還有工廠化生產(chǎn)的科學(xué)配方與合理工藝，以及大規(guī)模應(yīng)用液體菌種的技術(shù)尚有進(jìn)一步提升空間和研究。本研究主要從白色金針菇液體菌種培養(yǎng)基配方優(yōu)化的角度出發(fā)，以期達(dá)到采用白色金針菇液體菌種提升生產(chǎn)效益目的。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

白色金針菇8903菌株，由山西省晉城市澤州澤地萃綠農(nóng)開發(fā)有限公司提供。

1.2 供試培養(yǎng)基配方

母種培養(yǎng)基：馬鈴薯（削皮、去眼）200 g、瓊脂 20 g、葡萄糖 20 g、蛋白胨 1.5 g、KH2PO43 g、MgSO4·7H2O 1.5 g、VB15 mg、VB25 mg、H2O 1 000 mL。

初級(jí)液體菌種培養(yǎng)基：玉米粉2%、麥麩2%、葡萄糖2%、蛋白胨2%、KH2PO40.05%、MgSO40.05%、VB10.005%、VB20.005%，pH自然。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 母種活化

將供試母種菌株在超凈工作臺(tái)上接種到經(jīng)過滅菌的斜面綜合培養(yǎng)基上，接約0.5 cm2菌種1塊，在恒溫培養(yǎng)箱23℃條件下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)試管。選取菌絲潔白、粗壯、長(zhǎng)勢(shì)好、無污染的試管作為下一步供試菌種。

1.3.2 初級(jí)液體菌種的制備

在250 mL三角瓶中裝入100 mL初級(jí)液體菌種培養(yǎng)基，用高壓滅菌鍋在121℃條件下滅菌30 min，冷卻至室溫，在無菌環(huán)境下接入2塊約0.5 cm2的上述供試菌母種塊，靜置培養(yǎng)24 h，然后在25℃下振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為 200 r·min－1，培養(yǎng) 8 d。

1.3.3 C源、N源優(yōu)化正交試驗(yàn)

移取生長(zhǎng)良好的初級(jí)液體菌種，按10%（v·v－1）的接種量接種到裝有不同液體培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，三角瓶裝液量為100 mL。液體培養(yǎng)基C源、N源根據(jù)試驗(yàn)要求按表1配置，無機(jī)鹽和維生素因子仍按照初級(jí)液體培養(yǎng)基百分比配置。每種液體培養(yǎng)基重復(fù)3次，在25℃下振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為200 r·min－1，培養(yǎng) 8 d。

試驗(yàn)選用液體培養(yǎng)基中的2種C源和2種N源，分別設(shè)置3個(gè)不同的水平。利用正交表L9（34）設(shè)計(jì)試驗(yàn)，利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化液體培養(yǎng)基中C源和N源的配比，研究探索C源、N源的最佳配比。試驗(yàn)因素水平見表1。

表1 C源、N源優(yōu)化正交試驗(yàn)的因素及水平Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment about carbon and nitrogen sources in this paper

1.3.4 無機(jī)鹽、維生素優(yōu)化正交試驗(yàn)

移取生長(zhǎng)良好的初級(jí)液體菌種，按10%（v·v－1）的接種量接種到裝有不同液體培養(yǎng)基250 mL的三角瓶中，三角瓶裝液量為100 mL。液體培養(yǎng)基C、N源按照初級(jí)液體培養(yǎng)基百分比配置，無機(jī)鹽和維生素因子根據(jù)試驗(yàn)要求配置（表2）。每種液體培養(yǎng)基重復(fù)3次，在25℃下振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為200 r·min－1，培養(yǎng) 8 d。

試驗(yàn)中選用液體培養(yǎng)基中的2種無機(jī)鹽和2種維生素，分別設(shè)置了3個(gè)不同的水平，利用正交表L9（34）設(shè)計(jì)試驗(yàn)，利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化液體培養(yǎng)基中無機(jī)鹽和維生素配比，研究探索無機(jī)鹽和維生素的最佳配比。試驗(yàn)因素水平見表2。

表2 無機(jī)鹽和維生素優(yōu)化正交試驗(yàn)的因素及水平Tab.2 Salts and vitamins optimization factors and levels of the orthogonal test in this paper

1.3.5 菌絲干重測(cè)定

用60目篩網(wǎng)過濾收集菌絲球，用蒸餾水反復(fù)沖洗干凈，置于60℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重，用電子天平稱量菌絲干重。

2 結(jié)果和分析

2.1 不同C源、N源對(duì)白色金針菇菌絲干重的影響

不同C源、N源優(yōu)化正交試驗(yàn)直觀分析見表3。

由表3可見，C源、N源最佳水平組合為A2B2C3D1，菌絲體干重為1.963 g/100mL，均高于其他8個(gè)處理，與直觀分析結(jié)果相一致。因而得出白色金針菇液體菌種培養(yǎng)基中最佳C源、N源組合為玉米粉3.0%、葡萄糖1.5%、麥麩2.5%、蛋白胨0.5%。同時(shí)，從表3直觀分析可以得出上述4種試驗(yàn)因素，對(duì)白色金針菇菌絲體干重的影響依次為玉米粉＞麥麩＞葡萄糖＞蛋白胨。

表3 不同C源、N源優(yōu)化正交試驗(yàn)直觀分析Tab.3 Optimized result of C,N sources by the orthogonal experiment

2.2 不同無機(jī)鹽、維生素對(duì)白色金針菇菌絲干重的影響

無機(jī)鹽和維生素優(yōu)化正交試驗(yàn)直觀分析見表4。

表4 無機(jī)鹽和維生素優(yōu)化正交試驗(yàn)直觀分析Tab.4 Optimized result of salts and vitamins by orthogonal experiment

由表4可見，無機(jī)鹽和維生素的最佳水平組合為A2B1C2D2，但在試驗(yàn)中并沒有出現(xiàn)該組合。驗(yàn)證試驗(yàn)重復(fù)3次A2B1C2D2水平組合，菌絲體平均干重為1.980 g/100mL，該數(shù)據(jù)大于優(yōu)化試驗(yàn)中的所有水平組合。因而得出白色金針菇液體菌種培養(yǎng)基中最佳無機(jī)鹽和維生素組合為KH2PO40.10%、MgSO40.05%、VB10.005%、VB20.005%。同時(shí)，從表4直觀分析可以得出，上述4種試驗(yàn)因素對(duì)白色金針菇菌絲體干重的影響依次為 KH2PO4＞MgSO4＞VB1≈VB2。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

本試驗(yàn)采用多因子正交試驗(yàn)對(duì)白色金針菇液體菌種培養(yǎng)基的成分配比進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)白色金針菇菌絲體干重的影響依次為玉米粉＞麥麩＞葡萄糖＞蛋白胨。當(dāng)C源、N源比例為玉米粉3.0%、麥麩2.5%、葡萄糖1.5%、蛋白胨0.5%，其菌絲干重最大可達(dá)1.963 g/100mL；微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)白色金針菇菌絲體干重的影響依次為KH2PO4＞MgSO4＞VB1≈VB2。 當(dāng)微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)比例為KH2PO40.10%、MgSO40.05%、VB10.005%、VB20.005%，菌絲干重為1.980 g/100mL。

3.2 討論

液體菌種培養(yǎng)基中主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都對(duì)白色金針菇菌絲生長(zhǎng)有著重要影響，不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)白色金針菇菌絲含量影響不同。在本研究中，玉米粉、麥麩等主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是優(yōu)質(zhì)的C源和N源，與葡萄糖、蛋白胨相比，不僅能提供充分的多層次C源和N源，而且也能提供一些必要的其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；微量元素對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)也存在明顯的促進(jìn)作用，其中K、Mg尤為重要，維生素B也是取得較高菌絲生物量的重要物質(zhì)。在白色金針菇液體菌種生產(chǎn)中，選擇優(yōu)質(zhì)的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和添加必須的微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有利于液體菌種有效物質(zhì)含量的提高，進(jìn)而有利于提升液體菌種生產(chǎn)效益和工廠化白色金針菇生產(chǎn)的整體效益。

[1]常明昌.食用菌栽培[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2009.

[2]常明昌.食用菌栽培學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2003.

[3]阮海東，陳秀娟等.工廠化栽培白色金針菇培養(yǎng)料優(yōu)化試驗(yàn)[J].食用菌，2007（4）：28－29.

[4]馬瑞霞，姚獻(xiàn)華，魏志華.白色金針菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)研究[J].中國(guó)食用菌，2005（6）：16－17.

[5]王淑芳.金針菇液體培養(yǎng)[J].中國(guó)食用菌，1996（6）：6－8.

[6]張引芳.食用菌液體菌種生產(chǎn)與應(yīng)用[J].食用菌，2004（6）：11－12.