郭豫梅

（陜西理工學院化學與環(huán)境科學學院，陜西 漢中 723001）

雞油菌多糖含量的測定及抗氧化活性的研究

郭豫梅

（陜西理工學院化學與環(huán)境科學學院，陜西 漢中 723001）

采用熱水浸提、乙醇醇沉法從雞油菌中提取多糖，測得雞油菌多糖含量為7.93%。測定了雞油菌多糖對超氧自由基負離子（O2·-）及羥基自由基（·OH）的清除作用，以此來評價雞油菌的抗氧化活性的能力。雞油菌多糖對羥基自由基的清除率為68.2%，對超氧自由基負離子的清除率為65.3%。

雞油菌；多糖；抗氧化活性

雞油菌（Cantharellus cibarius），別名黃絲菌、杏菌，是一種外生菌根真菌，屬真菌界，擔子菌門，擔子菌綱，雞油菌目，雞油菌科和雞油菌屬［1］。其子實體肉質(zhì)，杏黃色、枇杷黃色或蛋黃色，有杏仁果的香氣，微甜。研究表明，雞油菌富含胡蘿卜素、VA、VC和鐵、鈣、磷等多種礦物質(zhì)元素。其性平，味甘，具有清肝、明目、利肺、和胃、益腸、美容和抗衰老等功效［2-3］。

真菌多糖作為一類天然活性產(chǎn)物，大量的研究表明其具有增強免疫、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、降低血糖、抗衰老、抗輻射等生理功效［4-5］。本實驗采用熱水浸提法對雞油菌多糖進行提取，并研究了雞油菌多糖對羥基自由基及超氧自由基負離子的清除作用，所得結果可為雞油菌在食品、醫(yī)藥等領域的應用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

雞油菌：購于陜西漢中。

葡萄糖標準品、乙醇、95%乙醇、蒽酮、Tris-HCl、鄰苯三酚、98%濃硫酸、水楊酸、過氧化氫、硫酸亞鐵、濃硫酸、濃鹽酸均為分析純。

1.2 儀器

FW177型粉碎機，HH-2型電熱恒溫水浴鍋，ALC-210.3電子天平，RE-52A旋轉蒸發(fā)儀，722E型可見分光光度計，101型電熱鼓風干燥箱，臺式離心機。

1.3 方法

雞油菌樣品加入蒸餾水，煮沸2h，抽濾，濾液經(jīng)減壓濃縮，然后加入4倍體積95%乙醇，劇烈攪拌至4℃冰箱中醇沉，過夜，然后離心，回收上清液中乙醇，沉淀用少量蒸餾水溶解，干燥后稱重。蒽酮-硫酸法［6］測定雞油菌多糖的含量。

1.4 葡萄糖標準溶液的配制（蒽酮-硫酸法）

準確稱取0.0250g葡萄糖標準品，溶于250mL容量瓶中，配置成0.1g·L-1的葡萄糖標準溶液，準確移取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL置于6個試管中，用蒸餾水定容到2.00mL，然后分別加入4.00mL蒽酮試劑，迅速浸入冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸入沸水浴中，瓶口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)，自水浴重新計算時間，準確煮沸10min取出，用蒸餾水冷卻，室溫下放置10min左右，于620nm波長處比色。以同樣處理的重蒸餾水為空白，進行比色。

1.5 抗氧化活性的測定

1.5.1 對超氧自由基（O2·-）的清除作用

采用鄰苯三酚自氧化法［7］測定。取0.05mol·L-1、pH=8.2的Tris-HCl緩沖溶液4.5mL加入含有4.2mL蒸餾水的試管中，放置于25℃水浴中加熱20min，分別加入不同濃度的試樣水提物溶液0.1mL，加入在25℃水浴中預熱的3mmol·L-1鄰苯三酚（由10mmol·L-1HCl配置）0.3mL，混合均勻后25℃水浴中反應4min，加入2滴8mol·L-1的HCl 結束反應，在420nm波長處測定吸光度（樣品管以同濃度的試樣醇提物溶液作參比）。模型組以0.1mL蒸餾水代替樣品試液。超氧自由基（O2·-）按以下公式計算清除率。

1.5.2 對羥基自由基的清除［8］

反應體系中加入9mmol·L-1FeSO4、1mL、9mmol·L-1水楊酸-乙醇1mL，不同濃度的雞油菌多糖溶液1mL。最后加入6mmol·L-1的 H2O21mL開始反應，37℃反應0.5h，以蒸餾水為參比，于510nm波長下測定各濃度的吸光度。以9mmol·L-1FeSO4、1mL，9mmol·L-1水楊酸-乙醇1mL，不同濃度的雞油菌多糖溶液1mL和1mL蒸餾水作為多糖的本底吸收值。羥基自由基清除率P（%）表示為：

式中：Ao為空白對照液的吸光度；Ax為加入雞油菌多糖溶液后的吸光度；Axo為不加H2O2的雞油菌溶液本底的吸光度。

2 結果與分析

2.1 雞油菌多糖含量的測定

以葡萄糖濃度（mg·mL-1）為橫坐標，吸光值（A）為縱坐標作圖，結果見圖1。

圖1 葡萄糖標準曲線

由圖1可以看出，在葡萄糖濃度0～0.06mg·mL-1的范圍內(nèi)，葡萄糖濃度與吸光值線性關系良好，標準曲線方程為y=0.0063x-0.0214，回歸系數(shù)R2=0.9963。經(jīng)計算，得出雞油菌多糖的含量為7.93%。

2.2 抗氧化活性的測定

2.2.1 多糖對超氧自由基負離子（O2·-）的清除作用圖2是雞油菌多糖對超氧自由基負離子的清除作用。由圖2可以得出，隨著雞油菌多糖濃度的增大，雞油菌多糖對超氧負離子的清除率也逐漸增大，清除率與濃度呈正相關。當雞油菌多糖濃度達到0.6mg·mL-1時，清除率為65.3%。濃度為0.6mg·mL-1時，雞油菌多糖的清除效果最佳。

圖2 雞油菌多糖對超氧自由基負離子的清除作用

2.2.2 多糖對羥基自由基的清除作用

圖3是多糖對羥基自由基的清除作用。由圖3可以得出，隨著雞油菌多糖濃度的增大，雞油菌多糖對羥基自由基的清除率也增大，清除率與濃度呈正相關。當雞油菌多糖濃度達到0.6mg·mL-1時，清除率為68.2%。隨著雞油菌多糖濃度的進一步增大，清除率有所下降。結果表明，雞油菌多糖對羥基自由基的最佳清除效果的濃度為0.6mg·mL-1。

圖3 雞油菌多糖對羥基自由基的清除作用

3 結論

采用熱水浸提法在最佳工藝條件下對雞油菌多糖進行提取，并利用蒽酮-硫酸法繪制葡萄糖標準曲線方程，測得雞油菌多糖的提取率為7.93%。并通過對雞油菌多糖清除自由基能力的測定，確定其有較強的清除超氧自由基和羥基自由基的能力，清除率分別為65.3%和 68.2%，可將其作為抗氧化劑應用到食品和醫(yī)藥行業(yè)中，這將為進一步促進天然抗氧化劑的研究與開發(fā)起到一定的積極作用。

［1］ 寥顯輝，楊燕紅.食用菌類保健食品的開發(fā)探討［J］.農(nóng)業(yè)科技，2008，11（7）：241-242.

［2］ 車振鵬.“三菌”復合保健口服液的功效研究（一）［J］.食品科技，2002（2）：69-70.

［3］ 王茂盛，連賓，梁宗琦，等.雞油菌多糖的提取及組成分析［J］.重慶大學學報，2005，28（7）：118-121.

［4］ 鐘耀光，臨難，王淑琴.香菇多糖的抗氧化性能與抑菌作用研究［J］.食品科技，2007（7）：141-144.

［5］ 王斌，連賓.食藥用真菌多糖的研究與應用［J］.食品與機械，2005，21（6）：96-99.

［6］ 張惟杰.糖復合物生化研究技術（第1版） ［M］.杭州：浙江大學出版社，1994.

［7］ 張曉強，浦躍樸，尹立紅，等.冬蟲夏草及人工蟲草菌絲體對超氧陰離子自由基和羥基自由基清除作用的實驗研究［J］.中國老年雜志，2003（23）：773-775.

［8］ 李志洲.美味牛肝菌多糖的抗氧化性［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33（4）：49-51.

Determination of Polysaccharide in Cantharellus Cibarius and its Antioxidant Activity

GUO Yu-mei
（School of Chemistry & Enviromental Sciences， Shaanxi University of Technology， Hanzhong 723001， China）

The polysaccharide in cantharellus cibarius was obtained by hot water extraction and ethanol deposit. The content of polysaccharide was 7.93% by spectrophotometer. The antioxidant activities of polysaccharide were studied. Percentage clearance of the superoxide radical （O2·-） was 65.3%， and percentage clearance of the hydroxyl free radical （·OH） was 68.2%.

Q 539

A

1671-9905（2015）09-0004-03

郭豫梅（1975-），女，講師，博士在讀，主要從事天然產(chǎn)物的研究與開發(fā)的研究

2015-06-26

Abstract： cantharellus cibarius； polysaccharide； antioxidant activity