周旺洋 賀秀云 劉夢(mèng)婷 呂秋菊 秦海燕 李越蘭 宋捷民△

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，浙江 杭州 310005；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州310053）

不同比例附子配黃連在Caco-2細(xì)胞模型中跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)研究*

周旺洋1賀秀云2劉夢(mèng)婷2呂秋菊2秦海燕2李越蘭2宋捷民2△

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，浙江 杭州 310005；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州310053）

目的 通過(guò)Caco-2細(xì)胞模型，研究不同比例的附子配黃連在Caco-2細(xì)胞中主要成分的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)情況。方法 利用Caco-2細(xì)胞模型和高效液相色譜法，研究附子配黃連比例為1∶1、1∶2、2∶1時(shí)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，計(jì)算跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量和表觀滲透系數(shù)，3種比例藥物配伍對(duì)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。結(jié)果 附子∶黃連比例為1∶1、1∶2、2∶1時(shí)，鹽酸小檗堿在150min時(shí)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量AP→BL側(cè)分別為0.625，0.161，0.055μg，BL→AP側(cè)分別為1.308，0.178，0.064μg，表觀滲透系數(shù)分別為2.095，1.107，1.172μg，次烏頭堿在150min時(shí)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量AP→BL側(cè)分別為0.634，0.401，0.204μg，BL→AP側(cè)分別為0.534，0.108，0.067μg，表觀滲透系數(shù)分別為0.842，0.268，0.328。結(jié)論 附子配黃連1∶1用量比優(yōu)于1∶2、2∶1的用量比，證明臨床用量比的最佳性。

附子配黃連 比例 Caco-2細(xì)胞 跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)

附子配黃連，出自《傷寒論》附子瀉心湯。后世醫(yī)家在治寒熱錯(cuò)雜的方劑中每每用之，附子黃連，一熱一寒，寒溫并用。臨床上常用于寒熱互結(jié)所致的心下痞滿，寒熱夾雜之瀉痢，上熱下寒之口瘡足冷等證。但在諸方劑中，二藥配伍比例各不相同。有文獻(xiàn)報(bào)道，黃連與附子不同配伍比例對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)影響各異［1］。為此本研究選用目前應(yīng)用最佳的體外吸收Caco-2細(xì)胞模型，測(cè)定二藥不同配伍的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)特征，以研究附子配黃連之間的相互作用和生物利用度?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與試藥 Caco-2細(xì)胞株購(gòu)自上海細(xì)胞庫(kù)，傳代數(shù)為25～50代。RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液（吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，產(chǎn)品型號(hào)：GNM31800-S）；0.25%胰酶（凱基生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，產(chǎn)品型號(hào)：KGM27250）；D-Hanks緩沖液（吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，產(chǎn)品型號(hào)：GNM14175）；胎牛血清（產(chǎn)品型號(hào)：Gibco，16000044）；MEMNEAA非必需氨基酸溶液100X（產(chǎn)品型號(hào)：Gibco，11140050）；L-谷氨酰胺 （杭州昊天生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品型號(hào)：PYG21051）；堿性磷酸酶ALP/AKP試劑盒 （南京建成生物工程研究所）；MTT（產(chǎn)品型號(hào)：Amresco 0793）；二氯甲烷（天津市永大化學(xué)試劑有限公司）；次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品 （中國(guó)食品藥品檢定研究院，110798-201106）；鹽酸小檗堿（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-200911）。藥材附子選自四川綿陽(yáng)市江油恒源藥業(yè)有限公司附子GAP基地，黃連購(gòu)自重慶市石柱縣黃水鎮(zhèn)黃連GAP基地，藥材經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室張水利教授鑒定，附子為毛莨科植物烏頭（AconiLum carmichaeli Debx.）的子根的加工品，黃連為毛茛科植物黃連（Coptis chinensis Franch）的干燥根莖。經(jīng)學(xué)院制劑室提取得附子提取物 （自制，13011706，烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿的含量分別為2.29、2.76、2.02mg/g）、黃連提取物（自制，12122110）。分別精密稱取黃連自制品、附子自制品適量，折合藥材質(zhì)量比例，制得附子∶黃連分別為1∶1（藥對(duì)1），1∶2（藥對(duì)2），2∶1（藥對(duì)3）的溶液，0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，存于4℃冰箱待用。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 CO2培養(yǎng)箱 Thermo scientific；SWCJ-ZFD型雙人單面凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；TE-2000-S倒置顯微鏡，日本尼康；LDZ5-2低速自動(dòng)平衡醫(yī)用離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；R502B SENCO恒溫水浴，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；YXQ-280SD型蒸汽滅菌器，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；680型酶標(biāo)儀，Thermo scientific；十萬(wàn)分之一天平，Mettler Toledo；DGG 9240B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；跨膜電阻儀，Millicell-ERS，Millipore corporation，USA；24孔Transwell小室，Greiner；24孔貼壁細(xì)胞培養(yǎng)板，Greiner；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，Corning；25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，Corning；0.22μm微孔濾器，Corning；島津LC高效液相色譜儀（日本島津公司）；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm× 150mm，5μm）。

1.3 確定附子黃連的配伍比例 從轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)角度出發(fā)，附子配黃連用量比例應(yīng)來(lái)自于臨床。筆者整理研究了歷代著名方書中129張含有附子、黃連的方劑，分析研究后，結(jié)果表明：有59張方附子配黃連用量比是為1∶1；10張方附子配黃連為2∶1；16張方附子配黃連為1∶2。確定臨床使用較多的3種附子配黃連用量比例1∶1、1∶2、2∶1，作為在Caco-2細(xì)胞模型中吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)情況用藥配伍比例。

1.4 建立細(xì)胞單層模型 在接種細(xì)胞前1 d將24孔Transwell小室置于4.5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵化一夜。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞按細(xì)胞傳代的方法消化離心，加培養(yǎng)液稀釋成細(xì)胞混懸液，按1×105個(gè)/mL，300μL接種到Transwell聚酯（PET）上，另取RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液1500μL于24孔板中。接種后前14 d每隔1 d換1次液，以后每天換液，培養(yǎng)21 d左右［2-3］。

1.5 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn) 待Caco-2細(xì)胞在Transwell培養(yǎng)板上形成緊密、完整的單細(xì)胞層后，吸去培養(yǎng)液。各孔貼壁加入37℃的D-Hanks液，在不破壞細(xì)胞層的條件下，蕩洗細(xì)胞3次，吸干各孔內(nèi)D-Hanks液。當(dāng)研究藥物從AP側(cè)→BL側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)，在24孔Transwell培養(yǎng)板上AP側(cè)加入0.3mL藥物，BL側(cè)加入1.5mLD-Hanks緩沖液；當(dāng)研究藥物從BL側(cè)→AP側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)，在AP側(cè)加入0.3 mL D-Hanks緩沖液，BL側(cè)加入1.5 mL藥物；然后把Transwell培養(yǎng)板放在37℃，4.5%CO2培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，分別在90、120、150min從接收側(cè)（加D-Hanks緩沖液一側(cè)）吸取0.1mL接收液于EP管中，并放置于-80℃冰箱待測(cè)，每次補(bǔ)足相應(yīng)量的D-Hanks緩沖液［4］。

HPLC檢測(cè)各成分含量。色譜條件為，色譜柱：A-gilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇（B相）-0.1%甲酸（A相），總流速：1.00mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：237 nm，柱溫：（25±1）℃，進(jìn)樣量：20μL。見(jiàn)表1。

表1 色譜條件

轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中加入空白轉(zhuǎn)運(yùn)液的一側(cè)為接收室，接收室的藥量視為吸收量（Qri）。AP-BL轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中，BL室藥量為吸收量；BL-AP轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中，AP室藥量為吸收量，由于雙向轉(zhuǎn)運(yùn)空白轉(zhuǎn)運(yùn)液體積不同，累計(jì)吸收量的計(jì)算公式略有差異。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣后，樣品不再返還Transwell系統(tǒng)，但要補(bǔ)加相同體積的空白轉(zhuǎn)運(yùn)液，以保持溶液體積不變。具體計(jì)算方法見(jiàn)以下公式：

AP→BL QrB=0.1（Qr1+Qr2+……+Qr（i-1））+1.5Cri，

BL→AP QrA=0.1（Qr1+Qr2+……+Qr（i-1））+0.3Cri，

上式中，1.5、0.3分別為接收室所加D-Hanks液體積（mL），0.1為取樣體積（mL），Cri為接受室第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)測(cè)藥物濃度（i=1～3）。

藥物透過(guò)Caco-2細(xì)胞單層的表觀穿透系數(shù)用Papp（cm/s）值作為參考，按下式進(jìn)行藥物轉(zhuǎn)運(yùn)率計(jì)算：

其中△Q（μg）為△t（s）內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)量，A（0.33 cm2）為細(xì)胞單層膜面積，Co（μg/mL）為供給室藥物初濃度。兩側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)率比值Pratio的計(jì)算公式：

其中Papp（BL-AP）和Papp（AP-BL）分別為雙向表觀滲透系數(shù)［5］。

1.6 方法學(xué)考察

1.6.1 線性關(guān)系考察［6］精密稱取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品0.21mg于10mL容量瓶中，用二氯甲烷溶解稀釋至刻度，用D-Hanks緩沖液稀釋成13.12，26.25，52.5，105，210 ng/mL的溶液；精密稱取次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品1.05mg于10mL容量瓶中，用二氯甲烷稀釋至刻度，再用DHanks分別稀釋成65.62，131.25，262.5，525，1050 ng/mL的溶液；其中二氯甲烷的濃度小于0.5%將不會(huì)影響單細(xì)胞層的完整性。進(jìn)行HPLC色譜分析，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，分別做標(biāo)準(zhǔn)曲線。鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=473.89x-473.08（r=0.9997），次烏頭堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=220.75x-1648.8（r=0.9991）。鹽酸小檗堿在13.125～210 ng/mL，次烏頭堿在65.625～1050 ng/mL的范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

1.6.2 穩(wěn)定性考察［7］精密吸取鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差。鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.76%、1.19%。

1.6.3 精密度考察［8］分別精密吸取鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL，各重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差。鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.80%、0.42%。

1.6.4 專屬性實(shí)驗(yàn)［9］分別精密吸取D-Hanks緩沖液（含0.25%二氯甲烷）、鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品20μL，進(jìn)行HPLC分析，考察分析方法專屬性。結(jié)果溶劑對(duì)成分檢測(cè)無(wú)干擾。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用方差分析和t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果 藥對(duì)1、藥對(duì)2、藥對(duì)3分別在2.18～34.80、4.44～71.00、1.15～18.4（μg/mL，以鹽酸小檗堿計(jì)）內(nèi)對(duì)Caco-2細(xì)胞為非細(xì)胞毒性計(jì)量，選取安全濃度進(jìn)行吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，分別為34.80、71.00、18.4μg/mL。

2.2 3個(gè)比例藥對(duì)在各個(gè)時(shí)間段的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量 見(jiàn)表2～4。利用HPLC方法測(cè)定3個(gè)比例藥對(duì)在各個(gè)時(shí)間段的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量。結(jié)果顯示鹽酸小檗堿和次烏頭堿的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量隨時(shí)間的增加而不斷增加。在不同時(shí)間點(diǎn)，藥對(duì)1中鹽酸小檗堿和次烏頭堿的轉(zhuǎn)運(yùn)量大于另外兩個(gè)藥對(duì)。

表2 藥對(duì)1主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q（μg，±s）

表2 藥對(duì)1主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q（μg，±s）

藥物 轉(zhuǎn)運(yùn)方向 90min 120min 150min鹽酸小檗堿AP→BL 0.039±0.006 0.540±0.186 0.625±0.170（n=3）BL→AP 0.033±0.012 0.862±0.059 1.308±0.613次烏頭堿AP→BL 0.241±0.029 0.546±0.014 0.634±0.031（n=3）BL→AP 0.060±0.012 0.382±0.006 0.534±0.033

表3 藥對(duì)2主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q（μg，±s）

表3 藥對(duì)2主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q（μg，±s）

藥物 轉(zhuǎn)運(yùn)方向 90min 120min 150min鹽酸小檗堿AP→BL 0.027±0.006 0.119±0.009 0.161±0.026（n=3）BL→AP 0.074±0.010 0.146±0.006 0.178±0.008次烏頭堿AP→BL 0.335±0.042 0.339±0.056 0.401±0.044（n=3）BL→AP 0.045±0.006 0.081±0.011 0.108±0.007

表4 藥對(duì)3主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q（μg，±s）

表4 藥對(duì)3主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q（μg，±s）

藥物 轉(zhuǎn)運(yùn)方向 90min 120min 150min鹽酸小檗堿AP→BL 0.037±0.002 0.048±0.005 0.055±0.007（n=3）BL→AP 0.024±0.007 0.039±0.008 0.064±0.015次烏頭堿AP→BL 0.152±0.015 0.176±0.004 0.204±0.036（n=3）BL→AP 0.034±0.001 0.046±0.005 0.067±0.003

2.3 鹽酸小檗堿和次烏頭堿的表觀轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)（Papp）和雙向轉(zhuǎn)運(yùn)率（Pratio） 見(jiàn)表5，表6。根據(jù)公式計(jì)算鹽酸小檗堿和次烏頭堿的Papp和Pratio。結(jié)果鹽酸小檗堿在藥對(duì)1中以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主，而在藥對(duì)2和藥對(duì)3中則表現(xiàn)為以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。次烏頭堿表現(xiàn)為以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。

表5 鹽酸小檗堿的Papp和Pratio比較（±s）

表5 鹽酸小檗堿的Papp和Pratio比較（±s）

藥對(duì)n Papp（AP→BL）Papp（BL→AP）Pratio（×10-6cm/s） （×10-6cm/s） （BL→AP/AP→BL）藥對(duì)1 3 6.043±1.640 12.659±5.9352.095藥對(duì)2 3 0.765±0.125 0.846±0.0401.107藥對(duì)3 3 0.998±0.122 1.169±0.2781.172

表6 次烏頭堿的Papp和Pratio比較（±s）

表6 次烏頭堿的Papp和Pratio比較（±s）

藥對(duì)n Papp（AP→BL）Papp（BL→AP）Pratio（×10-6cm/s） （×10-6cm/s） （BL→AP/AP→BL）藥對(duì)1 3 15.705±0.759 13.216±0.8260.842藥對(duì)2 3 9.925±1.094 2.662±0.1620.268藥對(duì)3 3 5.069±0.880 1.663±0.0640.328

3 討 論

Caco-2細(xì)胞于1977年由Fogh等首次分離自人類結(jié)腸腺癌細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)和功能類似于分化的小腸上皮細(xì)胞，具有微絨毛，緊密連接等結(jié)構(gòu)，并含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶系和一定程度的蛋白表達(dá)，因此Caco-2細(xì)胞模型的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，可以用來(lái)模擬藥物在體內(nèi)的經(jīng)小腸上皮吸收過(guò)程。本研究采用Caco-2單細(xì)?？稍诩?xì)胞水平上提供藥物分子透過(guò)小腸黏膜的吸收、分布、代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)以及毒性的綜合信息。

中醫(yī)臨床上不少急癥處方有寒性熱性藥物合用，如治蛔厥腹痛的烏梅丸，治肝火內(nèi)郁、胃脘劇痛、嘔吐酸水的連附六一湯等，中藥“寒熱并用”在機(jī)體內(nèi)的作用機(jī)制如何，尚不完全清楚。本實(shí)驗(yàn)借助寒熱藥性有代表性的附子配黃連為載體，通過(guò)建立Caco-2細(xì)胞模型，研究不同比例附子黃連配伍后在Caco-2細(xì)胞中的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，以探究的寒藥熱藥配伍后對(duì)機(jī)體的影響。附子味辛、甘，大熱，有毒，功效回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛。其中烏頭堿、中烏頭堿、次烏頭堿被證實(shí)是附子發(fā)揮強(qiáng)心、抗炎、鎮(zhèn)痛功效的有效成分。黃連味苦性寒，能清熱燥濕，瀉火解毒，含有多種生物堿，其中主要生物堿為小檗堿。其具有廣譜抗生素的作用，在臨床上長(zhǎng)期以來(lái)用于降熱鎮(zhèn)痛、抗腸道細(xì)菌感染。目前關(guān)于附子黃連配伍在細(xì)胞層面研究尚未見(jiàn)報(bào)道。鑒于二者配伍之主治多在胃腸，而Caco-2細(xì)胞又能模擬小腸上皮細(xì)胞之功能，故利用其研究甚為合適。

本文首次報(bào)道關(guān)于利用Caco-2細(xì)胞模型研究附子黃連不同配伍后的成分吸收變化。通過(guò)建立Caco-2細(xì)胞模型，研究不同比例附子黃連配伍后在Caco-2細(xì)胞中的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：鹽酸小檗堿、次烏頭堿作為附子黃連配伍后的主要有效成分，性質(zhì)穩(wěn)定，建立的檢測(cè)方法穩(wěn)定可靠，可作為檢測(cè)指標(biāo)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其次，小檗堿和次烏頭堿的轉(zhuǎn)運(yùn)量大小依次為1∶1＞1∶2＞2∶1。結(jié)果顯示附子配黃連比例為1∶1最有利于有效成分的吸收及利用。與歷代方書中1∶1使用最多相合，證明了中醫(yī)歷代以來(lái)附子配黃連1∶1配伍的科學(xué)性，為臨床中附子黃連配伍比應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。有實(shí)驗(yàn)表明，單用黃連，其所含的小檗堿在胃腸道吸收不好［10］。在Caco-2細(xì)胞模型中藥物分子的Papp與口服吸收相關(guān)聯(lián)，因?yàn)镻app的大小直接反映藥物經(jīng)腸道的吸收能力。吸收良好藥物的Papp大于1×10-6cm/s，而吸收差的藥物，其Papp小于1×10-7cm/s［11］。本實(shí)驗(yàn)中不同配比的附子配黃連中，小檗堿和次烏頭堿的Papp均大于1×10-6cm/s，說(shuō)明附子配黃連用量比例1∶1、1∶2、2∶1均具有良好的口服吸收性。鹽酸小檗堿在藥對(duì)1∶1中表現(xiàn)為以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主，在藥對(duì)1∶2、2∶1表現(xiàn)以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。提示附子配黃連的寒熱偏性對(duì)物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)方式有一定的影響，具體機(jī)制有待更深入研究。

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Research of Transmembrane Transport of Different Proportions of Fuzi（Aconitum carmichaeli debx.）with Huanglian（Coptis chinensis）in Caco-2 Cells Model

ZHOU Wangyang1，HE Xiuyun2，LIU Mengting2，et al. 1 The Third Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Hangzhou 310005，China；2 Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Hangzhou 310053，China

Objective：To study the absorption and transport condition of the main components of different proportions of Fuzi（Aconitum carmichaeli debx.）with Huanglian（Coptis chinensis）in Caco-2 cells model.Methods：The Caco-2 cells model and high performance liquid chromatography （HPLC）method were establish to study the absorption and transport condition when the aconite-coptis ratio was 1∶1，1∶2，2∶1.The transmembrane transport amount and the apparent permeability coefficients were calculated the influence of the 3 ratios of the two drugs on absorption and transport.Results：When the aconite-coptis ratio was 1∶1，1∶2，2∶1，respectively，the transmembrane transport amounts（μg）at 150min of berberine hydrochloride on AP→BL side are 0.625，0.161，0.055.On BL→AP side were 1.308，0.178，0.064，and the apparent permeability coefficients were 2.095，1.107，1.172，the transmembrane transport amounts（μg）at 150min of hypaconitine on AP→BL side were 0.634，0.401，0.204，on BL→AP side were 0.534，0.108，0.067，and the apparent permeability coefficients were 0.842，0.268，0.328.Conclusion：The aconite-coptis ratio of 1∶1 was better than the ratio of 1∶2 and 2∶1.It is proved the best clinical ratio.

Fuzi（Aconitum carmichaeli debx.）with Huanglian （Coptis chinensis）；Ratio；Caco-2 cell；Trans-membrane transport

R289.5

A

1004-745X（2015）05-0753-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.001

2015-02-01）

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81073067）

△通信作者（電子郵箱：ssc3631@163.com）