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        不同比例附子配黃連在Caco-2細(xì)胞模型中跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)研究*

        2015-11-11 07:52:45周旺洋賀秀云劉夢(mèng)婷呂秋菊秦海燕李越蘭宋捷民
        中國(guó)中醫(yī)急癥 2015年5期
        關(guān)鍵詞:模型

        周旺洋 賀秀云 劉夢(mèng)婷 呂秋菊 秦海燕 李越蘭 宋捷民△

        (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院,浙江 杭州 310005;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué),浙江 杭州310053)

        不同比例附子配黃連在Caco-2細(xì)胞模型中跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)研究*

        周旺洋1賀秀云2劉夢(mèng)婷2呂秋菊2秦海燕2李越蘭2宋捷民2△

        (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院,浙江 杭州 310005;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué),浙江 杭州310053)

        目的 通過(guò)Caco-2細(xì)胞模型,研究不同比例的附子配黃連在Caco-2細(xì)胞中主要成分的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)情況。方法 利用Caco-2細(xì)胞模型和高效液相色譜法,研究附子配黃連比例為1∶1、1∶2、2∶1時(shí)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn),計(jì)算跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量和表觀滲透系數(shù),3種比例藥物配伍對(duì)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。結(jié)果 附子∶黃連比例為1∶1、1∶2、2∶1時(shí),鹽酸小檗堿在150min時(shí)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量AP→BL側(cè)分別為0.625,0.161,0.055μg,BL→AP側(cè)分別為1.308,0.178,0.064μg,表觀滲透系數(shù)分別為2.095,1.107,1.172μg,次烏頭堿在150min時(shí)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量AP→BL側(cè)分別為0.634,0.401,0.204μg,BL→AP側(cè)分別為0.534,0.108,0.067μg,表觀滲透系數(shù)分別為0.842,0.268,0.328。結(jié)論 附子配黃連1∶1用量比優(yōu)于1∶2、2∶1的用量比,證明臨床用量比的最佳性。

        附子配黃連 比例 Caco-2細(xì)胞 跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)

        附子配黃連,出自《傷寒論》附子瀉心湯。后世醫(yī)家在治寒熱錯(cuò)雜的方劑中每每用之,附子黃連,一熱一寒,寒溫并用。臨床上常用于寒熱互結(jié)所致的心下痞滿,寒熱夾雜之瀉痢,上熱下寒之口瘡足冷等證。但在諸方劑中,二藥配伍比例各不相同。有文獻(xiàn)報(bào)道,黃連與附子不同配伍比例對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)影響各異[1]。為此本研究選用目前應(yīng)用最佳的體外吸收Caco-2細(xì)胞模型,測(cè)定二藥不同配伍的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)特征,以研究附子配黃連之間的相互作用和生物利用度?,F(xiàn)報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 細(xì)胞與試藥 Caco-2細(xì)胞株購(gòu)自上海細(xì)胞庫(kù),傳代數(shù)為25~50代。RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液(吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司,產(chǎn)品型號(hào):GNM31800-S);0.25%胰酶(凱基生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司,產(chǎn)品型號(hào):KGM27250);D-Hanks緩沖液(吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司,產(chǎn)品型號(hào):GNM14175);胎牛血清(產(chǎn)品型號(hào):Gibco,16000044);MEMNEAA非必需氨基酸溶液100X(產(chǎn)品型號(hào):Gibco,11140050);L-谷氨酰胺 (杭州昊天生物技術(shù)有限公司,產(chǎn)品型號(hào):PYG21051);堿性磷酸酶ALP/AKP試劑盒 (南京建成生物工程研究所);MTT(產(chǎn)品型號(hào):Amresco 0793);二氯甲烷(天津市永大化學(xué)試劑有限公司);次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品 (中國(guó)食品藥品檢定研究院,110798-201106);鹽酸小檗堿(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):110713-200911)。藥材附子選自四川綿陽(yáng)市江油恒源藥業(yè)有限公司附子GAP基地,黃連購(gòu)自重慶市石柱縣黃水鎮(zhèn)黃連GAP基地,藥材經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室張水利教授鑒定,附子為毛莨科植物烏頭(AconiLum carmichaeli Debx.)的子根的加工品,黃連為毛茛科植物黃連(Coptis chinensis Franch)的干燥根莖。經(jīng)學(xué)院制劑室提取得附子提取物 (自制,13011706,烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿的含量分別為2.29、2.76、2.02mg/g)、黃連提取物(自制,12122110)。分別精密稱取黃連自制品、附子自制品適量,折合藥材質(zhì)量比例,制得附子∶黃連分別為1∶1(藥對(duì)1),1∶2(藥對(duì)2),2∶1(藥對(duì)3)的溶液,0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌,存于4℃冰箱待用。

        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 CO2培養(yǎng)箱 Thermo scientific;SWCJ-ZFD型雙人單面凈化工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司;TE-2000-S倒置顯微鏡,日本尼康;LDZ5-2低速自動(dòng)平衡醫(yī)用離心機(jī),北京醫(yī)用離心機(jī)廠;R502B SENCO恒溫水浴,上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;YXQ-280SD型蒸汽滅菌器,上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;680型酶標(biāo)儀,Thermo scientific;十萬(wàn)分之一天平,Mettler Toledo;DGG 9240B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;跨膜電阻儀,Millicell-ERS,Millipore corporation,USA;24孔Transwell小室,Greiner;24孔貼壁細(xì)胞培養(yǎng)板,Greiner;96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,Corning;25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶,Corning;0.22μm微孔濾器,Corning;島津LC高效液相色譜儀(日本島津公司);色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm× 150mm,5μm)。

        1.3 確定附子黃連的配伍比例 從轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)角度出發(fā),附子配黃連用量比例應(yīng)來(lái)自于臨床。筆者整理研究了歷代著名方書中129張含有附子、黃連的方劑,分析研究后,結(jié)果表明:有59張方附子配黃連用量比是為1∶1;10張方附子配黃連為2∶1;16張方附子配黃連為1∶2。確定臨床使用較多的3種附子配黃連用量比例1∶1、1∶2、2∶1,作為在Caco-2細(xì)胞模型中吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)情況用藥配伍比例。

        1.4 建立細(xì)胞單層模型 在接種細(xì)胞前1 d將24孔Transwell小室置于4.5%CO2,37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵化一夜。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞按細(xì)胞傳代的方法消化離心,加培養(yǎng)液稀釋成細(xì)胞混懸液,按1×105個(gè)/mL,300μL接種到Transwell聚酯(PET)上,另取RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液1500μL于24孔板中。接種后前14 d每隔1 d換1次液,以后每天換液,培養(yǎng)21 d左右[2-3]。

        1.5 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn) 待Caco-2細(xì)胞在Transwell培養(yǎng)板上形成緊密、完整的單細(xì)胞層后,吸去培養(yǎng)液。各孔貼壁加入37℃的D-Hanks液,在不破壞細(xì)胞層的條件下,蕩洗細(xì)胞3次,吸干各孔內(nèi)D-Hanks液。當(dāng)研究藥物從AP側(cè)→BL側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí),在24孔Transwell培養(yǎng)板上AP側(cè)加入0.3mL藥物,BL側(cè)加入1.5mLD-Hanks緩沖液;當(dāng)研究藥物從BL側(cè)→AP側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí),在AP側(cè)加入0.3 mL D-Hanks緩沖液,BL側(cè)加入1.5 mL藥物;然后把Transwell培養(yǎng)板放在37℃,4.5%CO2培養(yǎng)箱里培養(yǎng),分別在90、120、150min從接收側(cè)(加D-Hanks緩沖液一側(cè))吸取0.1mL接收液于EP管中,并放置于-80℃冰箱待測(cè),每次補(bǔ)足相應(yīng)量的D-Hanks緩沖液[4]。

        HPLC檢測(cè)各成分含量。色譜條件為,色譜柱:A-gilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×150mm,5μm),流動(dòng)相:甲醇(B相)-0.1%甲酸(A相),總流速:1.00mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm,柱溫:(25±1)℃,進(jìn)樣量:20μL。見(jiàn)表1。

        表1 色譜條件

        轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中加入空白轉(zhuǎn)運(yùn)液的一側(cè)為接收室,接收室的藥量視為吸收量(Qri)。AP-BL轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中,BL室藥量為吸收量;BL-AP轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中,AP室藥量為吸收量,由于雙向轉(zhuǎn)運(yùn)空白轉(zhuǎn)運(yùn)液體積不同,累計(jì)吸收量的計(jì)算公式略有差異。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣后,樣品不再返還Transwell系統(tǒng),但要補(bǔ)加相同體積的空白轉(zhuǎn)運(yùn)液,以保持溶液體積不變。具體計(jì)算方法見(jiàn)以下公式:

        AP→BL QrB=0.1(Qr1+Qr2+……+Qr(i-1))+1.5Cri,

        BL→AP QrA=0.1(Qr1+Qr2+……+Qr(i-1))+0.3Cri,

        上式中,1.5、0.3分別為接收室所加D-Hanks液體積(mL),0.1為取樣體積(mL),Cri為接受室第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)測(cè)藥物濃度(i=1~3)。

        藥物透過(guò)Caco-2細(xì)胞單層的表觀穿透系數(shù)用Papp(cm/s)值作為參考,按下式進(jìn)行藥物轉(zhuǎn)運(yùn)率計(jì)算:

        其中△Q(μg)為△t(s)內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)量,A(0.33 cm2)為細(xì)胞單層膜面積,Co(μg/mL)為供給室藥物初濃度。兩側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)率比值Pratio的計(jì)算公式:

        其中Papp(BL-AP)和Papp(AP-BL)分別為雙向表觀滲透系數(shù)[5]。

        1.6 方法學(xué)考察

        1.6.1 線性關(guān)系考察[6]精密稱取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品0.21mg于10mL容量瓶中,用二氯甲烷溶解稀釋至刻度,用D-Hanks緩沖液稀釋成13.12,26.25,52.5,105,210 ng/mL的溶液;精密稱取次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品1.05mg于10mL容量瓶中,用二氯甲烷稀釋至刻度,再用DHanks分別稀釋成65.62,131.25,262.5,525,1050 ng/mL的溶液;其中二氯甲烷的濃度小于0.5%將不會(huì)影響單細(xì)胞層的完整性。進(jìn)行HPLC色譜分析,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),分別做標(biāo)準(zhǔn)曲線。鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=473.89x-473.08(r=0.9997),次烏頭堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=220.75x-1648.8(r=0.9991)。鹽酸小檗堿在13.125~210 ng/mL,次烏頭堿在65.625~1050 ng/mL的范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

        1.6.2 穩(wěn)定性考察[7]精密吸取鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL,分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算各峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差。鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.76%、1.19%。

        1.6.3 精密度考察[8]分別精密吸取鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL,各重復(fù)進(jìn)樣6次,計(jì)算各峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差。鹽酸小檗堿、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.80%、0.42%。

        1.6.4 專屬性實(shí)驗(yàn)[9]分別精密吸取D-Hanks緩沖液(含0.25%二氯甲烷)、鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品、次烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品20μL,進(jìn)行HPLC分析,考察分析方法專屬性。結(jié)果溶劑對(duì)成分檢測(cè)無(wú)干擾。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以(±s)表示,采用方差分析和t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果 藥對(duì)1、藥對(duì)2、藥對(duì)3分別在2.18~34.80、4.44~71.00、1.15~18.4(μg/mL,以鹽酸小檗堿計(jì))內(nèi)對(duì)Caco-2細(xì)胞為非細(xì)胞毒性計(jì)量,選取安全濃度進(jìn)行吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn),分別為34.80、71.00、18.4μg/mL。

        2.2 3個(gè)比例藥對(duì)在各個(gè)時(shí)間段的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量 見(jiàn)表2~4。利用HPLC方法測(cè)定3個(gè)比例藥對(duì)在各個(gè)時(shí)間段的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量。結(jié)果顯示鹽酸小檗堿和次烏頭堿的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量隨時(shí)間的增加而不斷增加。在不同時(shí)間點(diǎn),藥對(duì)1中鹽酸小檗堿和次烏頭堿的轉(zhuǎn)運(yùn)量大于另外兩個(gè)藥對(duì)。

        表2 藥對(duì)1主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q(μg,±s)

        表2 藥對(duì)1主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q(μg,±s)

        藥物 轉(zhuǎn)運(yùn)方向 90min 120min 150min鹽酸小檗堿AP→BL 0.039±0.006 0.540±0.186 0.625±0.170(n=3)BL→AP 0.033±0.012 0.862±0.059 1.308±0.613次烏頭堿AP→BL 0.241±0.029 0.546±0.014 0.634±0.031(n=3)BL→AP 0.060±0.012 0.382±0.006 0.534±0.033

        表3 藥對(duì)2主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q(μg,±s)

        表3 藥對(duì)2主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q(μg,±s)

        藥物 轉(zhuǎn)運(yùn)方向 90min 120min 150min鹽酸小檗堿AP→BL 0.027±0.006 0.119±0.009 0.161±0.026(n=3)BL→AP 0.074±0.010 0.146±0.006 0.178±0.008次烏頭堿AP→BL 0.335±0.042 0.339±0.056 0.401±0.044(n=3)BL→AP 0.045±0.006 0.081±0.011 0.108±0.007

        表4 藥對(duì)3主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q(μg,±s)

        表4 藥對(duì)3主要成分在不同時(shí)間的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)量△Q(μg,±s)

        藥物 轉(zhuǎn)運(yùn)方向 90min 120min 150min鹽酸小檗堿AP→BL 0.037±0.002 0.048±0.005 0.055±0.007(n=3)BL→AP 0.024±0.007 0.039±0.008 0.064±0.015次烏頭堿AP→BL 0.152±0.015 0.176±0.004 0.204±0.036(n=3)BL→AP 0.034±0.001 0.046±0.005 0.067±0.003

        2.3 鹽酸小檗堿和次烏頭堿的表觀轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)(Papp)和雙向轉(zhuǎn)運(yùn)率(Pratio) 見(jiàn)表5,表6。根據(jù)公式計(jì)算鹽酸小檗堿和次烏頭堿的Papp和Pratio。結(jié)果鹽酸小檗堿在藥對(duì)1中以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主,而在藥對(duì)2和藥對(duì)3中則表現(xiàn)為以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。次烏頭堿表現(xiàn)為以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。

        表5 鹽酸小檗堿的Papp和Pratio比較(±s)

        表5 鹽酸小檗堿的Papp和Pratio比較(±s)

        藥對(duì)n Papp(AP→BL)Papp(BL→AP)Pratio(×10-6cm/s) (×10-6cm/s) (BL→AP/AP→BL)藥對(duì)1 3 6.043±1.640 12.659±5.9352.095藥對(duì)2 3 0.765±0.125 0.846±0.0401.107藥對(duì)3 3 0.998±0.122 1.169±0.2781.172

        表6 次烏頭堿的Papp和Pratio比較(±s)

        表6 次烏頭堿的Papp和Pratio比較(±s)

        藥對(duì)n Papp(AP→BL)Papp(BL→AP)Pratio(×10-6cm/s) (×10-6cm/s) (BL→AP/AP→BL)藥對(duì)1 3 15.705±0.759 13.216±0.8260.842藥對(duì)2 3 9.925±1.094 2.662±0.1620.268藥對(duì)3 3 5.069±0.880 1.663±0.0640.328

        3 討 論

        Caco-2細(xì)胞于1977年由Fogh等首次分離自人類結(jié)腸腺癌細(xì)胞,其結(jié)構(gòu)和功能類似于分化的小腸上皮細(xì)胞,具有微絨毛,緊密連接等結(jié)構(gòu),并含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶系和一定程度的蛋白表達(dá),因此Caco-2細(xì)胞模型的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn),可以用來(lái)模擬藥物在體內(nèi)的經(jīng)小腸上皮吸收過(guò)程。本研究采用Caco-2單細(xì)??稍诩?xì)胞水平上提供藥物分子透過(guò)小腸黏膜的吸收、分布、代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)以及毒性的綜合信息。

        中醫(yī)臨床上不少急癥處方有寒性熱性藥物合用,如治蛔厥腹痛的烏梅丸,治肝火內(nèi)郁、胃脘劇痛、嘔吐酸水的連附六一湯等,中藥“寒熱并用”在機(jī)體內(nèi)的作用機(jī)制如何,尚不完全清楚。本實(shí)驗(yàn)借助寒熱藥性有代表性的附子配黃連為載體,通過(guò)建立Caco-2細(xì)胞模型,研究不同比例附子黃連配伍后在Caco-2細(xì)胞中的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,以探究的寒藥熱藥配伍后對(duì)機(jī)體的影響。附子味辛、甘,大熱,有毒,功效回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛。其中烏頭堿、中烏頭堿、次烏頭堿被證實(shí)是附子發(fā)揮強(qiáng)心、抗炎、鎮(zhèn)痛功效的有效成分。黃連味苦性寒,能清熱燥濕,瀉火解毒,含有多種生物堿,其中主要生物堿為小檗堿。其具有廣譜抗生素的作用,在臨床上長(zhǎng)期以來(lái)用于降熱鎮(zhèn)痛、抗腸道細(xì)菌感染。目前關(guān)于附子黃連配伍在細(xì)胞層面研究尚未見(jiàn)報(bào)道。鑒于二者配伍之主治多在胃腸,而Caco-2細(xì)胞又能模擬小腸上皮細(xì)胞之功能,故利用其研究甚為合適。

        本文首次報(bào)道關(guān)于利用Caco-2細(xì)胞模型研究附子黃連不同配伍后的成分吸收變化。通過(guò)建立Caco-2細(xì)胞模型,研究不同比例附子黃連配伍后在Caco-2細(xì)胞中的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:鹽酸小檗堿、次烏頭堿作為附子黃連配伍后的主要有效成分,性質(zhì)穩(wěn)定,建立的檢測(cè)方法穩(wěn)定可靠,可作為檢測(cè)指標(biāo)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其次,小檗堿和次烏頭堿的轉(zhuǎn)運(yùn)量大小依次為1∶1>1∶2>2∶1。結(jié)果顯示附子配黃連比例為1∶1最有利于有效成分的吸收及利用。與歷代方書中1∶1使用最多相合,證明了中醫(yī)歷代以來(lái)附子配黃連1∶1配伍的科學(xué)性,為臨床中附子黃連配伍比應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。有實(shí)驗(yàn)表明,單用黃連,其所含的小檗堿在胃腸道吸收不好[10]。在Caco-2細(xì)胞模型中藥物分子的Papp與口服吸收相關(guān)聯(lián),因?yàn)镻app的大小直接反映藥物經(jīng)腸道的吸收能力。吸收良好藥物的Papp大于1×10-6cm/s,而吸收差的藥物,其Papp小于1×10-7cm/s[11]。本實(shí)驗(yàn)中不同配比的附子配黃連中,小檗堿和次烏頭堿的Papp均大于1×10-6cm/s,說(shuō)明附子配黃連用量比例1∶1、1∶2、2∶1均具有良好的口服吸收性。鹽酸小檗堿在藥對(duì)1∶1中表現(xiàn)為以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主,在藥對(duì)1∶2、2∶1表現(xiàn)以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。提示附子配黃連的寒熱偏性對(duì)物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)方式有一定的影響,具體機(jī)制有待更深入研究。

        [1]張媛,王建,王瓊,等.黃連與附子對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19,(10):2456.

        [2]謝社平,譚曉蜻,畢開(kāi)順,等.鹽酸巴馬汀在Caco-2細(xì)胞中的吸收機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)志,2011,17(3):209-213.

        [3]韓天嬌,宋鳳瑞,劉忠英,等.附子配伍過(guò)程中二菇類生物堿在Caco-2小腸吸收細(xì)胞模型中吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的UPLC/MS研究[J].化學(xué)學(xué)報(bào)雜志,2011,69(15):1795-1802.

        [4]姚媛,廖瓊峰,謝智勇,等.新穿心蓮內(nèi)醋在Caco-2細(xì)胞單層模型中的吸收機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(14):113-116.

        [5]高秀蓉,蔣學(xué)華,杜青青,等.基于Caco-2細(xì)胞模型研究蝙蝠葛堿的跨膜吸收機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(15):139-143.

        [6]戚娟,郭濤,李海燕,等.黃連多組分在Caco-2細(xì)胞單層模型的吸收及其相互作用[J].中草藥雜志,2013,44(13):1801-1806.

        [7]吳安國(guó),曾寶,王春玲,等.HPLC考察小檗堿和黃連提取物中小檗堿在Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運(yùn)[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2011,27(7):1007-1011.

        [8]王素軍,王廣基,李曉天,等.LC-MS法測(cè)定槐果堿及其在Caco-2細(xì)胞上的轉(zhuǎn)運(yùn)特征[J].中國(guó)中藥雜志,2007,32(1):57-60.

        [9]馮志強(qiáng),謝智勇,廖瓊峰,等.氧化槐果堿在Caco-2細(xì)胞模型中的吸收機(jī)制研究[J].中國(guó)中藥雜志,2011,36(17):2399-2403.

        [10]張伯莎,安叡,王躍,等.黃連生物堿類成分經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型轉(zhuǎn)運(yùn)的協(xié)同作用研究[J].中成藥雜志,2012,34(1):15-18.

        [11]鄢良春,劉青春,趙軍寧,等.小柴胡湯在Caco 2細(xì)胞模型的吸收特性和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究[J].中國(guó)中藥雜志,2011,36(8):1087-1090.

        Research of Transmembrane Transport of Different Proportions of Fuzi(Aconitum carmichaeli debx.)with Huanglian(Coptis chinensis)in Caco-2 Cells Model

        ZHOU Wangyang1,HE Xiuyun2,LIU Mengting2,et al. 1 The Third Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University,Zhejiang,Hangzhou 310005,China;2 Zhejiang Chinese Medical University,Zhejiang,Hangzhou 310053,China

        Objective:To study the absorption and transport condition of the main components of different proportions of Fuzi(Aconitum carmichaeli debx.)with Huanglian(Coptis chinensis)in Caco-2 cells model.Methods:The Caco-2 cells model and high performance liquid chromatography (HPLC)method were establish to study the absorption and transport condition when the aconite-coptis ratio was 1∶1,1∶2,2∶1.The transmembrane transport amount and the apparent permeability coefficients were calculated the influence of the 3 ratios of the two drugs on absorption and transport.Results:When the aconite-coptis ratio was 1∶1,1∶2,2∶1,respectively,the transmembrane transport amounts(μg)at 150min of berberine hydrochloride on AP→BL side are 0.625,0.161,0.055.On BL→AP side were 1.308,0.178,0.064,and the apparent permeability coefficients were 2.095,1.107,1.172,the transmembrane transport amounts(μg)at 150min of hypaconitine on AP→BL side were 0.634,0.401,0.204,on BL→AP side were 0.534,0.108,0.067,and the apparent permeability coefficients were 0.842,0.268,0.328.Conclusion:The aconite-coptis ratio of 1∶1 was better than the ratio of 1∶2 and 2∶1.It is proved the best clinical ratio.

        Fuzi(Aconitum carmichaeli debx.)with Huanglian (Coptis chinensis);Ratio;Caco-2 cell;Trans-membrane transport

        R289.5

        A

        1004-745X(2015)05-0753-04

        10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.001

        2015-02-01)

        國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81073067)

        △通信作者(電子郵箱:ssc3631@163.com)

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