孫建華

薄荷苯酚軟膏是由薄荷腦、苯酚、羊毛脂、凡士林按一定比例制成的制劑，具有止癢、消毒的功能。主要用于瘙癢性皮膚病、銀屑病、神經(jīng)性皮炎等，臨床效果良好?，F(xiàn)行質(zhì)量標準為紫外分光光度法測定軟膏中苯酚的含量。為精密控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測定薄荷苯酚軟膏中苯酚的含量［1，2］。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀Agilent 1100；METTLER AE－240電子天平，超純水器 SYNERGYUV－1（法國 MILLIPORE公司），紫外可見分光光度計UV－1100（上海精密儀器儀表有限公司）。薄荷苯酚軟膏（批號：20131102、20131103、20131104）；苯酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100509－201104）；甲醇為色譜純（國藥集團化學試劑有限公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB－C18（4．6mm×25 cm，5 μm）；流動相：甲醇－水（62∶38）；檢測波長 271 nm；柱溫 45℃；流速 1．0ml／min；進樣量 10 μl。同時按《中國人民解放軍醫(yī)療制劑規(guī)范》2002年版中薄荷苯酚軟膏處方比例［3］同法制備缺苯酚的陰性樣品，陰性樣品在苯酚色譜峰位置處無相應色譜峰出現(xiàn)，苯酚與相鄰峰的分離度＞6，理論板數(shù)按苯酚峰計算不低于10 000。見圖1。

2．2 溶液制備

2．2．1 對照品溶液的制備 取苯酚約 4．5 g，精密稱定，置于100m l量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1m l含苯酚45mg的儲備液A。精密移取2m l儲備液A置于100ml容量瓶中，加流動相定容，制成每1m l含苯酚900μg的儲備液B。精密移取1m l貯備液B，置25m l量瓶中，加流動相制成每1m l含苯酚為36μg的對照品溶液，搖勻，即得。

圖 1 苯酚色譜圖

2．2．2 供試品溶液的制備 取供試品約0．5g（含苯酚約5mg），精密稱定，置50m l量瓶中，加無水乙醇適量，于60℃下超聲15min（功率660W，頻率28 kHz），使充分溶解，放至室溫用無水乙醇稀釋至刻度，揺勻，置于冰浴中冷卻2 h，取出后迅速濾過，放至室溫，取續(xù)濾液10ml置25m l量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0．22μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2．2．3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例及制備工藝，配制不含苯酚的陰性樣品，依2．22項下方法提取制備，作為陰性樣品溶液。

2．3 線性關系考察 精密量取適量對照品儲備液B，加流動相配制成含苯酚濃度為 9、18、36、72、180、360 μg／ml 6 組標準系列溶液。精密吸取各濃度標準系列溶液10μl，按2．1項條件進行測定。以峰面積為縱坐標（Y），標準系列溶液濃度為橫坐標 （X）繪制標準曲線，得苯酚的回歸方程為Y＝9．6376X＋8．2017，r＝0．9999 （n＝6）。 表明苯酚在 9～360 μg／ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

2．4 精密度實驗 精密吸取對照品溶液10μL，按“2．1”項下色譜條件，連續(xù)重復進樣6次，記錄峰面積值，RSD為0．14%。說明精密度良好。

2．5 重復性實驗 取薄荷苯酚軟膏6份 （批號20131102），按“2．2．2”項下制備方法制備分別制備6份供試品溶液，分別進樣 10 μl，含量 RSD 為 0．23%（n＝6）。表明方法重復性良好。

2．6 供試品溶液穩(wěn)定性試驗 取薄荷苯酚軟膏 （批號20131102），“2．2．2”項下制備方法制備，分別于 0、1、3、6、9 和12 h測定含量，苯酚含量RSD值為0．61%，表明供試品溶液中苯酚在12 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2．7 回收率實驗 取已知苯酚含量的薄荷苯酚軟膏 （批號20131102）6 份，每份約 0．5 g，精密稱定，每份分別精密加入儲備液B溶液5m l，按2．22項下方法制備供試品溶液，在2．1條件下測定苯酚含量，計算加樣回收率。平均回收率為103．6%，RSD為1．26%，表明該方法回收率良好。 見表1。

2．8 樣品含量測定 取3批樣品（批號：20131102、20131103、20131104），每批樣品測定 2份，按2．22項下方法制備供試品溶液，在2．1色譜條件下測定，以外標法計算各個樣品中苯 酚 的 含 量 ， 苯 酚 含 量 分 別 為 1．04%（g／g）、1．04%（g／g）、0．96%（g／g）。

3 討 論

現(xiàn)有質(zhì)量標準《中國人民解放軍醫(yī)療制劑規(guī)范》2002年版中均為紫外分光光度法測定苯酚含量值，此操作方法誤差性較大。本實驗設計使用高效液相色譜法測定苯酚含量值，進一步提高了質(zhì)量標準。實驗中流動相（甲醇∶水）比例分別按 70∶30、62∶38、50∶50 測定，發(fā)現(xiàn)當比例為 62∶38 時，峰形對稱，無拖尾，保留時間適宜，為4．7min，分析時間短，方法簡便快速，且理論板數(shù)在4000以上。以流動相為溶劑，在190～400 nm波長范圍內(nèi)對苯酚進行紫外光譜掃描，發(fā)現(xiàn)在271 nm處有良好吸收，因此選定檢測波長為271 nm；實驗采用Agilent ZORBAX SB－C18（4．6 mm×25 cm，5 μm）、Agilent Eclipse Plus C8（4．6mm×250mm，5 μm）、Agilent ECLISPE XDB－C18（4．6mm×15 cm，5μm） 分別進行進樣， 發(fā)現(xiàn)采用Agilent ZORBAX SB－C18柱子峰形較好，分離度高，無拖尾。

綜上所述，HPLC法結(jié)果精確，設計合理、專屬性強，方法學驗證科學可靠，符合《中國藥典》2010年版二部“藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則”的要求［4］，可為進一步提高薄荷苯酚軟膏的質(zhì)量標準提供數(shù)據(jù)參考。

表 1 薄荷苯酚軟膏中苯酚回收率試驗測定結(jié)果（n＝6）

［1］荊凡波，程顯隆，馬雙成，等．高效液相色譜法測定復方硼砂溶液中苯酚的含量［J］．藥物分析雜志，2010，30（1）：28．

［2］楊 娟，黃敬群，李 紅，等．高效液相色譜法測定復方樟腦搽劑中苯酚的含量［J］．中國醫(yī)院藥學雜志，2008，5（18）：92－93．

［3］總后衛(wèi)生部．中國人民解放軍醫(yī)療制劑規(guī)范［S］．北京：人民軍醫(yī)出版社，2002．153．

［4］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典［S］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010．二部，附錄ⅩⅨ A．