周國清，藍(lán)蕾，姜穎，劉劍英

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

姬松茸多糖對(duì)輻射損傷大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用

周國清，藍(lán)蕾，姜穎，劉劍英＊

姬松茸多糖；輻射損傷；大鼠；免疫調(diào)節(jié)

輻射可引起機(jī)體物質(zhì)代謝紊亂、造成機(jī)體免疫系統(tǒng)損傷，還會(huì)引起機(jī)體多種器官的氧化損傷，使體內(nèi)防御系統(tǒng)被嚴(yán)重破壞［1］。目前一些效果明顯抗輻射藥物往往因其不良反應(yīng)較大無法廣泛應(yīng)用［2］，研究利用純天然植物中的活性成分提高機(jī)體抗輻射能力，預(yù)防和減輕輻射對(duì)機(jī)體的損害逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。

姬松茸（A garicus blazei m urill，APM）原產(chǎn)于巴西，故又名巴西蘑菇。該菌鮮香脆嫩，營養(yǎng)價(jià)值豐富，其含有的多糖類成分具有提高機(jī)體免疫力、防癌抗癌、降糖降脂、抗炎、抗動(dòng)脈硬化等多種生物學(xué)活性［3-5］。但迄今為止，尚未見對(duì)其抗輻射損傷的免疫調(diào)節(jié)作用研究報(bào)告，本文主要研究姬松茸多糖對(duì)輻射損傷大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶血度的影響。

1　材料與方法

1.1原料及試劑

1.1.1姬松茸多糖購自西安森冉生物工程有限公司，多糖濃度為50%，產(chǎn)品批號(hào)：SR20140416。

1.1.2主要試劑淋巴細(xì)胞增殖活性（MTT）試劑盒、大鼠淋巴細(xì)胞分離液、PBS、1640培養(yǎng)基、紅細(xì)胞裂解液、D-Hanks液，上述試劑均由青島渝邑祥科貿(mào)有限公司提供。水合氯醛，由天津化學(xué)試劑一廠生產(chǎn)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)選擇清潔級(jí)SD健康雄性大鼠40只，周齡6周，體重（140±20）g，于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.1.4主要儀器紫外線分光光度計(jì)（美國Bechmann DU640型）、電子天平（BL121SS北京Sartorius）、離心機(jī)（德國Eppendorf 5801型）、酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad550型）、CO2培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）等。

1.2輻射損傷大鼠模型建立

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組采用完全隨機(jī)分組的方法將40只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、姬松茸多糖低劑量組（100mg/kg·d）、姬松茸多糖高劑量組（200mg/ kg·d），每組10只，分籠飼養(yǎng)，自然晝夜，節(jié)律光照，飼養(yǎng)溫度（20±5）℃，相對(duì)濕度為40%～60%。

1.2.2建立動(dòng)物模型4組大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后開始造模，給予直線加速器X射線照射，皮源距100 cm，劑量率100 cGy/分，全身輻射，輻射劑量為5.0Gy。見表1。

表1　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立對(duì)照表

1.3實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.3.1體重測量用電子天平每日上午9點(diǎn)稱量實(shí)驗(yàn)大鼠的體重，選取實(shí)驗(yàn)前、造模后、實(shí)驗(yàn)結(jié)束三次統(tǒng)計(jì)體重，進(jìn)行分析。

1.3.2樣品采集造模后灌胃飼養(yǎng)14 d，末次給藥后24 h稱重，腹腔注射10%水合氯醛給予麻醉（0.3m l/100 g），腹主動(dòng)脈取血4m l。

1.3.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.3.1淋巴細(xì)胞增殖活性分離淋巴細(xì)胞懸液，接種于96孔板中，100μl/孔，每孔細(xì)胞數(shù)>100個(gè)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）預(yù)培養(yǎng)。做細(xì)胞數(shù)目測定時(shí)，向每孔加入10μl的CCK-8溶液。在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h。用酶標(biāo)儀測定在450～490 nm處的吸光度。

1.3.3.2紅細(xì)胞溶解度取新鮮抗凝全血2ml，經(jīng)生理鹽水洗滌、離心配制成體積分?jǐn)?shù)為1%的紅細(xì)胞懸液，取4m l分裝為A、B兩管備用。A管加入2m l的過氧化氫，B管加入2ml的蒸餾水，于37℃水浴恒溫箱溫浴30min，后離心取其上清液用分光光度計(jì)在540 nm波長比色。

1.4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以±s表示，采用t檢驗(yàn)比較實(shí)驗(yàn)各組差別有無顯著性。

2　結(jié)果

2.1一般情況造模前，4組實(shí)驗(yàn)大鼠體重?zé)o明顯差異（P＞0.05），說明動(dòng)物分組合理。造模后各組動(dòng)物的體重較造模前均有所增加，模型對(duì)照組和姬松茸多糖高、低劑量組動(dòng)物體重增加均顯著低于正常對(duì)照組（P＜0.05）；干預(yù)后，姬松茸多糖高、低劑量組大鼠的體重較模型對(duì)照組均顯著增加（P＜0.05）。見表2。

表2　實(shí)驗(yàn)大鼠造模前后體重變化

2.2姬松茸多糖對(duì)輻射損傷大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶解度的影響與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組淋巴細(xì)胞增殖活性下降，差異有顯著性（P＜0.05）；與模型對(duì)照組相比，姬松茸多糖高、低劑量組淋巴細(xì)胞增殖活性升高，差異有顯著性（P＜0.05）；與姬松茸多糖低劑量相比，姬松茸多糖高劑量組淋巴細(xì)胞增殖活性差異不顯著（P＞0.05）。

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組組紅細(xì)胞溶血度下降，差異有顯著性（P＜0.05）；與模型對(duì)照組相比，姬松茸多糖低劑量組紅細(xì)胞溶解度差異無顯著性（P＞0.05），姬松茸多糖高劑量組紅細(xì)胞溶解度升高，差異有顯著性（P＜0.05）；與姬松茸多糖低劑量組相比，姬松茸多糖高劑量組紅細(xì)胞溶血度升高，差異有顯著性（P＞0.05）。見表3。

表3　姬松茸多糖對(duì)輻射損傷大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶解度的影響

3　討論

隨著工業(yè)信息技術(shù)的不斷發(fā)展，電腦、微波爐、手機(jī)等電子設(shè)備的普及，生活中接觸到的輻射越來越多，長時(shí)間接觸輻射會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害。另外，接受放射治療的癌癥患者，以及輻射相關(guān)職業(yè)從業(yè)人員也會(huì)受到一定程度輻射損害，因此，輻射損傷逐漸受到人們的關(guān)注［6］。輻射損傷的主要危害之一是損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)，降低淋巴細(xì)胞增殖活性以及紅細(xì)胞溶血度等一系列免疫學(xué)指標(biāo)，導(dǎo)致免疫力低下，引發(fā)各種病癥。除此之外，輻射損傷還會(huì)對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及機(jī)體其他組織器官等各方面產(chǎn)生不同程度的危害。同時(shí)會(huì)引起記憶力衰退、視力下降、渾身無力、染色體畸變率升高以及細(xì)胞微核率升高等主要表現(xiàn)［7-9］。

在機(jī)體免疫系統(tǒng)中，淋巴細(xì)胞的增殖是人體對(duì)非己抗原刺激而產(chǎn)生免疫應(yīng)答過程中的重要表現(xiàn)。機(jī)體經(jīng)非己抗原刺激促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生效應(yīng)淋巴細(xì)胞，進(jìn)而吞噬非己抗原，最終達(dá)到維護(hù)人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的目的。淋巴細(xì)胞增殖的效果直接影響效應(yīng)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的數(shù)量，產(chǎn)生效應(yīng)淋巴細(xì)胞的數(shù)量決定了人體免疫應(yīng)答反應(yīng)的強(qiáng)度，從而反映了人體細(xì)胞免疫的狀態(tài)。因此，淋巴細(xì)胞增殖活性是衡量細(xì)胞免疫的一個(gè)檢測指標(biāo)［10］。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明輻射損傷后大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性明顯下降，姬松茸多糖干預(yù)后淋巴細(xì)胞增殖活性較模型對(duì)照組明顯上升，說明姬松茸多糖能顯著提升輻射損傷大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性。

紅細(xì)胞免疫是脊椎動(dòng)物非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其免疫活性與生物進(jìn)化水平、環(huán)境因素、藥物等密切相關(guān)。RBC免疫功能對(duì)環(huán)境和藥物因素的改變較為敏感，是檢測機(jī)體健康狀況的一個(gè)重要指標(biāo)［11］。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明輻射損傷后大鼠的紅細(xì)胞溶血度明顯下降，姬松茸多糖干預(yù)后紅細(xì)胞溶血度較模型對(duì)照組明顯上升，姬松茸多糖高劑量組的差異更顯著，說明姬松茸多糖能顯著提升輻射損傷大鼠的紅細(xì)胞溶血度。

綜上所述，姬松茸多糖可顯著提高輻射損傷大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶血度，對(duì)輻射損傷大鼠的免疫調(diào)節(jié)具有一定的保護(hù)作用。

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［2015-06-18收稿，2015-07-17修回］

［本文編輯：吳蓉］

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