周國清,藍(lán)蕾,姜穎,劉劍英
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)
姬松茸多糖對輻射損傷大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用
周國清,藍(lán)蕾,姜穎,劉劍英*
姬松茸多糖;輻射損傷;大鼠;免疫調(diào)節(jié)
輻射可引起機(jī)體物質(zhì)代謝紊亂、造成機(jī)體免疫系統(tǒng)損傷,還會引起機(jī)體多種器官的氧化損傷,使體內(nèi)防御系統(tǒng)被嚴(yán)重破壞[1]。目前一些效果明顯抗輻射藥物往往因其不良反應(yīng)較大無法廣泛應(yīng)用[2],研究利用純天然植物中的活性成分提高機(jī)體抗輻射能力,預(yù)防和減輕輻射對機(jī)體的損害逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。
姬松茸(A garicus blazei m urill,APM)原產(chǎn)于巴西,故又名巴西蘑菇。該菌鮮香脆嫩,營養(yǎng)價(jià)值豐富,其含有的多糖類成分具有提高機(jī)體免疫力、防癌抗癌、降糖降脂、抗炎、抗動脈硬化等多種生物學(xué)活性[3-5]。但迄今為止,尚未見對其抗輻射損傷的免疫調(diào)節(jié)作用研究報(bào)告,本文主要研究姬松茸多糖對輻射損傷大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶血度的影響。
1.1原料及試劑
1.1.1姬松茸多糖購自西安森冉生物工程有限公司,多糖濃度為50%,產(chǎn)品批號:SR20140416。
1.1.2主要試劑淋巴細(xì)胞增殖活性(MTT)試劑盒、大鼠淋巴細(xì)胞分離液、PBS、1640培養(yǎng)基、紅細(xì)胞裂解液、D-Hanks液,上述試劑均由青島渝邑祥科貿(mào)有限公司提供。水合氯醛,由天津化學(xué)試劑一廠生產(chǎn)。
1.1.3實(shí)驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn)動選擇清潔級SD健康雄性大鼠40只,周齡6周,體重(140±20)g,于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。
1.1.4主要儀器紫外線分光光度計(jì)(美國Bechmann DU640型)、電子天平(BL121SS北京Sartorius)、離心機(jī)(德國Eppendorf 5801型)、酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad550型)、CO2培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)等。
1.2輻射損傷大鼠模型建立
1.2.1實(shí)驗(yàn)動物及分組采用完全隨機(jī)分組的方法將40只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為4組,正常對照組、模型對照組、姬松茸多糖低劑量組(100mg/kg·d)、姬松茸多糖高劑量組(200mg/ kg·d),每組10只,分籠飼養(yǎng),自然晝夜,節(jié)律光照,飼養(yǎng)溫度(20±5)℃,相對濕度為40%~60%。
1.2.2建立動物模型4組大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后開始造模,給予直線加速器X射線照射,皮源距100 cm,劑量率100 cGy/分,全身輻射,輻射劑量為5.0Gy。見表1。
表1 實(shí)驗(yàn)動物模型建立對照表
1.3實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1.3.1體重測量用電子天平每日上午9點(diǎn)稱量實(shí)驗(yàn)大鼠的體重,選取實(shí)驗(yàn)前、造模后、實(shí)驗(yàn)結(jié)束三次統(tǒng)計(jì)體重,進(jìn)行分析。
1.3.2樣品采集造模后灌胃飼養(yǎng)14 d,末次給藥后24 h稱重,腹腔注射10%水合氯醛給予麻醉(0.3m l/100 g),腹主動脈取血4m l。
1.3.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.3.1淋巴細(xì)胞增殖活性分離淋巴細(xì)胞懸液,接種于96孔板中,100μl/孔,每孔細(xì)胞數(shù)>100個(gè)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱(37℃,5%CO2)預(yù)培養(yǎng)。做細(xì)胞數(shù)目測定時(shí),向每孔加入10μl的CCK-8溶液。在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h。用酶標(biāo)儀測定在450~490 nm處的吸光度。
1.3.3.2紅細(xì)胞溶解度取新鮮抗凝全血2ml,經(jīng)生理鹽水洗滌、離心配制成體積分?jǐn)?shù)為1%的紅細(xì)胞懸液,取4m l分裝為A、B兩管備用。A管加入2m l的過氧化氫,B管加入2ml的蒸餾水,于37℃水浴恒溫箱溫浴30min,后離心取其上清液用分光光度計(jì)在540 nm波長比色。
1.4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以±s表示,采用t檢驗(yàn)比較實(shí)驗(yàn)各組差別有無顯著性。
2.1一般情況造模前,4組實(shí)驗(yàn)大鼠體重?zé)o明顯差異(P>0.05),說明動物分組合理。造模后各組動物的體重較造模前均有所增加,模型對照組和姬松茸多糖高、低劑量組動物體重增加均顯著低于正常對照組(P<0.05);干預(yù)后,姬松茸多糖高、低劑量組大鼠的體重較模型對照組均顯著增加(P<0.05)。見表2。
表2 實(shí)驗(yàn)大鼠造模前后體重變化
2.2姬松茸多糖對輻射損傷大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶解度的影響與正常對照組相比,模型對照組淋巴細(xì)胞增殖活性下降,差異有顯著性(P<0.05);與模型對照組相比,姬松茸多糖高、低劑量組淋巴細(xì)胞增殖活性升高,差異有顯著性(P<0.05);與姬松茸多糖低劑量相比,姬松茸多糖高劑量組淋巴細(xì)胞增殖活性差異不顯著(P>0.05)。
與正常對照組相比,模型對照組組紅細(xì)胞溶血度下降,差異有顯著性(P<0.05);與模型對照組相比,姬松茸多糖低劑量組紅細(xì)胞溶解度差異無顯著性(P>0.05),姬松茸多糖高劑量組紅細(xì)胞溶解度升高,差異有顯著性(P<0.05);與姬松茸多糖低劑量組相比,姬松茸多糖高劑量組紅細(xì)胞溶血度升高,差異有顯著性(P>0.05)。見表3。
表3 姬松茸多糖對輻射損傷大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶解度的影響
隨著工業(yè)信息技術(shù)的不斷發(fā)展,電腦、微波爐、手機(jī)等電子設(shè)備的普及,生活中接觸到的輻射越來越多,長時(shí)間接觸輻射會對人體產(chǎn)生一定的危害。另外,接受放射治療的癌癥患者,以及輻射相關(guān)職業(yè)從業(yè)人員也會受到一定程度輻射損害,因此,輻射損傷逐漸受到人們的關(guān)注[6]。輻射損傷的主要危害之一是損傷機(jī)體免疫系統(tǒng),降低淋巴細(xì)胞增殖活性以及紅細(xì)胞溶血度等一系列免疫學(xué)指標(biāo),導(dǎo)致免疫力低下,引發(fā)各種病癥。除此之外,輻射損傷還會對內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及機(jī)體其他組織器官等各方面產(chǎn)生不同程度的危害。同時(shí)會引起記憶力衰退、視力下降、渾身無力、染色體畸變率升高以及細(xì)胞微核率升高等主要表現(xiàn)[7-9]。
在機(jī)體免疫系統(tǒng)中,淋巴細(xì)胞的增殖是人體對非己抗原刺激而產(chǎn)生免疫應(yīng)答過程中的重要表現(xiàn)。機(jī)體經(jīng)非己抗原刺激促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生效應(yīng)淋巴細(xì)胞,進(jìn)而吞噬非己抗原,最終達(dá)到維護(hù)人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的目的。淋巴細(xì)胞增殖的效果直接影響效應(yīng)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的數(shù)量,產(chǎn)生效應(yīng)淋巴細(xì)胞的數(shù)量決定了人體免疫應(yīng)答反應(yīng)的強(qiáng)度,從而反映了人體細(xì)胞免疫的狀態(tài)。因此,淋巴細(xì)胞增殖活性是衡量細(xì)胞免疫的一個(gè)檢測指標(biāo)[10]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明輻射損傷后大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性明顯下降,姬松茸多糖干預(yù)后淋巴細(xì)胞增殖活性較模型對照組明顯上升,說明姬松茸多糖能顯著提升輻射損傷大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性。
紅細(xì)胞免疫是脊椎動物非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分,其免疫活性與生物進(jìn)化水平、環(huán)境因素、藥物等密切相關(guān)。RBC免疫功能對環(huán)境和藥物因素的改變較為敏感,是檢測機(jī)體健康狀況的一個(gè)重要指標(biāo)[11]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明輻射損傷后大鼠的紅細(xì)胞溶血度明顯下降,姬松茸多糖干預(yù)后紅細(xì)胞溶血度較模型對照組明顯上升,姬松茸多糖高劑量組的差異更顯著,說明姬松茸多糖能顯著提升輻射損傷大鼠的紅細(xì)胞溶血度。
綜上所述,姬松茸多糖可顯著提高輻射損傷大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶血度,對輻射損傷大鼠的免疫調(diào)節(jié)具有一定的保護(hù)作用。
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[2015-06-18收稿,2015-07-17修回]
[本文編輯:吳蓉]
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