蔣天儀等

摘要：以散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]的嫩莖段作為外植體，研究了其組織培養(yǎng)和快速繁殖體系。結(jié)果表明，外植體預(yù)處理后，經(jīng)過75%的乙醇消毒20 s，再用0.1% HgCl2處理6 min的滅菌效果最好，啟動(dòng)率達(dá)到78.40%，污染率僅為23.75%。初代培養(yǎng)最適宜的培養(yǎng)基是MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 1.0 mg/L；MS+ 6-BA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L+IBA 1.0 mg/L適用于繼代增殖培養(yǎng)，叢生芽的增殖系數(shù)達(dá)到6.10；適宜生根的培養(yǎng)基為NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS，生根率達(dá)到96.13%。

關(guān)鍵詞：散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]；組織培養(yǎng)；快速繁殖體系

中圖分類號(hào)：Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）16-4070-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.062

Establishment of Rapid Propagation System for Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause by Tissue Culture

JIANG Tian-Yi1，TANG Min1，YANG Shu1，WANG Bo2，SHI Da-xing3

（1.Department of Agriculture and Horticulture，Chengdu Vocational College of Agricultural Science and Technology，Chengdu 611130， China； 2.Construction Engineering Department of Sichuan Engineering Technical College，Deyang 618000，Sichuan， China；

3.College of Forest Science， Sichuan Agricultural University，Yaan 625014， Sichuan， China）

Abstract： Tissue culture and rapid propagation system of Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause were studied by using the tender stem as explants.The results showed that after 75% alcohol disinfection for 20 s ，with another 0.1% HgCL2 for 6 min was the best disinfection method， the survival rate was 78.40% and the contamination rate was only 23.75%. The optimum initial medium was MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 g/L+IAA 1.0 mg/L； MS+ 6-BA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 1.0 mg/L was the suitable medium for buds multiplication，tufted bud proliferation coefficient reached 6.10. The suitable rooting culture medium was NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS，which gave a rooting rate as high as 96.13%.

Key words： Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause；tissue culture；rapid propagarion system

散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]是百合科竹根七屬植物，為多年生草本[1]，其葉厚紙質(zhì)，花黃綠色，具紫色斑點(diǎn)，花被鐘狀[2]，春季開花，花朵俯垂，枝形優(yōu)美。該種原產(chǎn)于林下、陰蔽山谷或溪邊，是一種耐陰性很好的植物，可應(yīng)用于風(fēng)景林地下或建筑邊緣物作地被植物，也可盆栽觀賞[3]。地被植物在園林中的應(yīng)用量一般很大，快速繁殖是滿足園林應(yīng)用的一個(gè)方面，而工廠化生產(chǎn)是保證苗木整齊的另一個(gè)方面。目前，工廠化生產(chǎn)種苗的公司并不多，專業(yè)生產(chǎn)地被植物的更少[4，5]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

散斑竹根七植株采自四川省雅安市的周邊山上，采回后種植于苗圃，選在5月取材，剪取3～4 cm的帶芽莖段作為外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體表面滅菌 將外植體在加有洗衣粉的洗滌液中浸泡10 min，接著用自來水沖洗2～3次，然后放入75%乙醇中處理20 s后用無菌水沖洗3次，再用0.1% HgCl2溶液分別處理3、6和9 min，期間不停地振蕩，最后使用無菌水沖洗5次。每處理接種20個(gè)外植體，重復(fù)3次，滅菌后的外植體接入啟動(dòng)培養(yǎng)基先暗培養(yǎng)7 d，再進(jìn)行光照培養(yǎng)（12 h/d），35 d后統(tǒng)計(jì)啟動(dòng)率和污染率。

1.2.2 初代培養(yǎng) 將處理好的帶芽嫩莖段作為外植體進(jìn)行接種，基本培養(yǎng)基為MS。設(shè)置基本培養(yǎng)基MS，加入6-BA（0、0.5、1.0、2.0 mg/L）、2，4-D（0.01、0.05、0.1、0.5 mg/L）、NAA（0、0.05、0.1、0.5 mg/L）和IAA（ 0、0.1、0.5、1.0 mg/L），共16個(gè)處理。每處理接種10株外植體，重復(fù)3次，培養(yǎng)30 d觀察統(tǒng)計(jì)芽啟動(dòng)率。endprint

1.2.3 繼代增殖培養(yǎng) 將初代培養(yǎng)獲得的莖段叢生芽切割為帶1個(gè)芽的小塊，轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基上，以MS為基本培養(yǎng)基，加入6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）、KT（0.5、1.0、1.5 mg/L）、NAA（0.01、0.1、0.2 mg/L）和IBA（0.1、0.5、1.0 mg/L），共12個(gè)處理。每個(gè)處理接種20株外植體，重復(fù)3次，40 d后統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)及有效苗數(shù)。

1.2.4 生根培養(yǎng) 在增殖培養(yǎng)中選取高約3 cm的健壯叢生芽，切割成單苗，接種于生根培養(yǎng)基中，基本培養(yǎng)基為MS，加入NAA（0.1、0.5、1.0 mg/L）、IBA（0.05、0.1、0.5 mg/L）和MS培養(yǎng)基（MS、1/2MS、1/4MS），共9個(gè)處理。每個(gè)處理接種20株外植體，重復(fù)3次，40 d后觀察統(tǒng)計(jì)生根率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同表面滅菌方式對(duì)滅菌效果的影響

對(duì)散斑竹根七在不同滅菌時(shí)間處理中的啟動(dòng)率和污染率進(jìn)行顯著性差異SSR檢驗(yàn)，結(jié)果見表1。從表1中可以看出，隨著0.1% HgCl2處理時(shí)間的增加，污染率逐漸降低，啟動(dòng)率則表現(xiàn)為先上升后下降。處理3 min時(shí)，外植體啟動(dòng)率較高，為76.39%，但污染率也高（48.61%）；處理6 min時(shí)啟動(dòng)率最高，達(dá)到78.40%，污染率較低，為23.75%。而隨著滅菌處理的時(shí)間延長(zhǎng)，污染率降至最低（14.29%），但啟動(dòng)率僅有51.26%，為各處理中最低。綜合來看，采用0.1% HgCl2滅菌6 min是較為適宜的外植體表面滅菌時(shí)間。

2.2 不同激素組合對(duì)初代培養(yǎng)的影響

接種1周后，接種的莖段腋芽開始萌動(dòng)，大約3～5 mm，30 d絕大部分的芽苗長(zhǎng)至2 cm。從表2中可以看出，處理9（MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 1.0 mg/L）對(duì)散斑竹根七芽的誘導(dǎo)效果最好，啟動(dòng)率達(dá)到85.20%，與其他處理差異極顯著。隨著6-BA濃度的升高，芽啟動(dòng)率逐漸升高，當(dāng)6-BA達(dá)到1.0 mg/L的時(shí)候，處理9、10、11、12的芽啟動(dòng)率均達(dá)到70%以上。但當(dāng)6-BA達(dá)到2.0 mg/L的時(shí)候，啟動(dòng)率又開始下降。同時(shí)，經(jīng)過方差分析發(fā)現(xiàn)，2，4-D對(duì)啟動(dòng)誘導(dǎo)影響不顯著。

2.3 不同激素組合對(duì)繼代增殖培養(yǎng)的影響

從表3可以看出，對(duì)于叢生芽的誘導(dǎo)，3號(hào)處理效果最好，增殖系數(shù)達(dá)到6.10。各處理多數(shù)增殖系數(shù)都在4.0～5.0之間。經(jīng)過方差分析發(fā)現(xiàn)，6-BA對(duì)繼代增殖的影響呈極顯著差異，NAA呈顯著差異。當(dāng)6-BA濃度為最低水平，而NAA的水平為最高值時(shí)，增殖系數(shù)最大。

2.4 不同激素組合對(duì)生根培養(yǎng)的影響

從表4中可以看出，在生根培養(yǎng)中，7號(hào)處理（NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS）的效果極顯著高于其他處理，生根率達(dá)到96.13%，其次是9號(hào)處理，生根率為91.8%，與其他處理的差異也達(dá)極顯著水平，經(jīng)過方差分析發(fā)現(xiàn)，NAA對(duì)生根的影響極顯著。隨著NAA的濃度升高，生根率逐漸升高，而在NAA處于最高值水平時(shí)，1/2MS培養(yǎng)基的生根率最高，說明適當(dāng)降低無機(jī)鹽的濃度有利于散斑竹根七瓶苗的生根培養(yǎng)。

3 小結(jié)與討論

帶芽莖段的初代誘導(dǎo)時(shí)，6-BA、NAA以及二者的配合使用促進(jìn)了莖段芽的啟動(dòng)。在一定范圍內(nèi)，隨著6-BA濃度的升高，啟動(dòng)率也升高，說明6-BA濃度過高對(duì)芽的誘導(dǎo)起抑制作用，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)2，4-D與IBA對(duì)散斑竹根七芽的啟動(dòng)誘導(dǎo)影響不顯著。本試驗(yàn)中NAA對(duì)生根培養(yǎng)影響極顯著，且隨著NAA用量的減少生根率也呈下降的趨勢(shì)。這與許多研究中低濃度的NAA促進(jìn)生根、使生根時(shí)間縮短的結(jié)論相反[4]。這說明不同植物對(duì)激素濃度反應(yīng)不同，與植株本身體內(nèi)激素種類和水平相關(guān)。在組織培養(yǎng)生根階段，一般認(rèn)為低濃度的無機(jī)鹽對(duì)壯苗生根有利，而生根狀況的好壞直接影響著組培成功的最后一步。本試驗(yàn)的生根培養(yǎng)中，采用了MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，其中1/2MS生根效果最好，生根率達(dá)96%。在之前的培養(yǎng)中，經(jīng)過外源激素的使用和轉(zhuǎn)瓶繼代的培養(yǎng)，培養(yǎng)物本身積累了許多生長(zhǎng)激素，低鹽的培養(yǎng)基有利于過多激素的釋放，防止植株徒長(zhǎng)、黃化等。因此，在散斑竹根七的生根培養(yǎng)中1/2MS的培養(yǎng)基生根效果最佳。

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