鄒修文，楊啟源，盛家榮

(廣西師范學院化學與材料科學學院，廣西 南寧 530001)

八角是我國珍貴經(jīng)濟樹種，在我國南方地區(qū)具有悠久的栽培和應用歷史，廣西是中國乃至全球最大的八角主產(chǎn)區(qū)，其品質優(yōu)良，被稱為“世界八角之鄉(xiāng)”[1]。八角又稱“八角茴香”，含豐富的天然活性成分八角茴香油﹑有機酸﹑八角茴香油樹脂﹑黃酮﹑倍半萜內酯﹑多糖﹑木脂素類等[2]。八角的研究已成為近年來的研究熱點[3-10]，八角果﹑莖﹑葉中均含有多糖[11-13]，但關于八角葉多糖的最佳提取工藝研究尚未見報道。做好八角的研究開發(fā)，增加八角的高附加值，對廣西經(jīng)濟發(fā)展具有重要意義。本文以粗多糖提取率為考察指標，采用水提醇沉法提取八角葉多糖，通過正交設計實驗優(yōu)化影響粗多糖產(chǎn)率的主要因素，為八角葉多糖的深入研究與開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 原料、試劑及儀器

原料：八角葉采自廣西壯族自治區(qū)北流市西埌鎮(zhèn)大車村；試劑：D-葡萄糖（化學純），無水乙醇﹑丙酮﹑苯酚﹑硫酸（均為分析純）。

儀器：DHG-9070A 型電熱恒溫鼓風干燥箱，ME203E 型電子天平，HH-4 型數(shù)顯恒溫水浴鍋，RV 10 basic 型旋轉蒸發(fā)儀，SHB-B95 型循環(huán)水式多用真空泵，DT5-2 型低速臺式離心機，722S 型可見分光光度計。

1.2 實驗方法

1.2.1 正交實驗設計

設計L9(34)正交表[14]，選擇提取時間﹑料液比﹑提取溫度和提取次數(shù)4 個因素設計正交實驗，因素水平表見表1。

表1 八角葉多糖提取因素水平

1.2.2 八角葉多糖的提取

將八角葉清洗干凈﹑烘干﹑粉碎 ，準確稱取9 份八角葉干粉，每份12.000g，按正交實驗表下的因素水平條件進行實驗。水煮至規(guī)定時間后，放冷，離心（4000r·min-1×3min），取上清液，減壓濃縮至20mL，加4 倍體積無水乙醇沉淀多糖，置于冰箱中靜置過夜，抽濾，分別用無水乙醇﹑丙酮洗滌2～3 次，60℃下烘干，得固體粉末，稱重，計算粗多糖提取率。1.2.3 苯酚-硫酸法測定多糖[13]

1）標準溶液的配制：準確量取苯酚5.000g，用適量蒸餾水溶解，轉移至100mL 棕色容量瓶，稀釋至刻度，即得5.0%苯酚溶液。準確稱取干燥恒重的葡萄糖0.025g，加適量蒸餾水溶解，轉移至250mL容量瓶，稀釋至刻度，即得100μg·mL-1葡萄糖標準溶液。準確量取100μg·mL-1葡萄糖標準溶液5.0﹑10.0﹑15.0﹑20.0﹑25.0﹑30.0﹑35.0mL 于7 個50mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得10﹑20﹑30﹑40﹑50﹑60﹑70μg·mL-17 個不同濃度對照品系列溶液。

2）標準曲線的繪制：準確移取7 個不同濃度對照品系列溶液1.0mL 于20mL 干燥具塞試管，分別加入1.0mL 5%苯酚溶液，冰水浴條件下再分別加入5.0mL 濃硫酸，搖勻，沸水浴加熱25min，稍冷卻，冰水浴條件下再加入10mL 蒸餾水，待冷卻至室溫，用722S 型可見分光光度計在484nm 處測定其吸光度A。以對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，并建立回歸分析方程。

3）多糖含量的測定：準確稱取八角葉粗多糖0.011g 于50mL 燒杯，加入1mol·L-1H2SO42 mL，加熱水解2h，冷卻至室溫，轉移至100mL 容量瓶，稀釋至刻度，即得樣品液。準確量取1.0mL 樣品液3 份置于20mL 干凈具塞試管，分別加入1.0mL 5.0%苯酚溶液，冰水浴條件下再分別加入5.0mL 濃硫酸，搖勻，沸水浴加熱25min，稍冷卻，冰水浴條件下再加入10mL 蒸餾水，待冷卻至室溫，用722S 型可見分光光度計在490nm 處測定其吸光度A。根據(jù)測定結果和回歸分析方程，計算八角葉中多糖的含量。

2 結果與分析

2.1 正交實驗

以L9(34)正交表進行實驗，選擇提取時間﹑料液比﹑提取溫度和提取次數(shù)等4 個主要影響因素設計正交實驗，實驗結果見表2。從表2 極值R 可以看出4 個因素對粗多糖提取率影響的主次順序是D＞A ＞B ＞C，即主要影響因素是提取次數(shù)，其次是提取溫度﹑料液比﹑提取時間，并得出該正交實驗的最佳組合為D2A3B3C2，即提取次數(shù)為2 次，提取溫度為75℃，料液比為1∶50，提取時間為3h。

2.2 驗證實驗

按照最佳工藝條件進行3 批驗證實驗，粗多糖提取率分別為13.08%，12.63%，12.89%，其平均值為12.87%，驗證結果比較穩(wěn)定，與正交設計實驗最優(yōu)實驗結果接近。

2.3 標準曲線的建立

根據(jù)1.2.3 所測得的葡萄糖對照品系列濃度的吸光度（表3），對表3 的數(shù)據(jù)用計算機進行線性回歸分析，得到回歸方程：A=0.06229+0.00864C，R=0.99837，標準曲線見圖1。

表2 正交實驗結果

表3 葡萄糖對照品系列濃度的吸光度結果

圖1 葡萄糖對照品系列濃度的吸光度數(shù)據(jù)線性回歸分析

2.4 多糖含量的測定

最佳工藝條件下，八角葉粗多糖提取率為12.87%，根據(jù)1.2.3 所測得的八角葉粗多糖樣品的吸光度結果見表4。根據(jù)2.3 建立的標準曲線的回歸方程及以下公式計算八角葉粗多糖中多糖的含量[15]：

其中：W樣為八角葉粗多糖中多糖的含量，%；100 為所配成樣品溶液的體積；C樣為由回歸方程計算得到的樣品濃度，μg·mL-1；0.91 為多糖的校正系數(shù)[16]；106為單位轉換因子；m樣為配成樣品溶液稱取的粗多糖樣品質量。

根據(jù)所測得樣品吸光度，代入回歸方程計算得出樣品濃度，進而代入以上公式，計算得出八角葉干粉中多糖的含量，結果列于表4。

表4 樣品的吸光度及多糖含量結果

3 結論

采用正交設計實驗優(yōu)化了水提醇沉法提取八角葉粗多糖的工藝條件，提取八角葉粗多糖的最佳工藝條件為：提取次數(shù)為2 次，提取溫度為75℃，料液比為1∶50，提取時間為3h。在最佳工藝條件下，八角葉粗多糖提取率為12.87%，其多糖含量采用苯酚-硫酸法測定，粗多糖中多糖含量為28.22%。八角葉多糖中還含有蛋白質﹑小分子雜質等物質，需要進一步進行脫蛋白﹑除小分子雜質及過柱等才能得到較純的單一組分，這些還有待于進一步深入研究。

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