汪芳芳 咼亮 康翠欣 彭玲玲 柴文娟

摘 要：建立了氨水甲醇溶液直接萃取-高效液相色譜法測(cè)定摻假玉米饅頭中檸檬黃含量的方法。檸檬黃的線性范圍為0.5-1000mg/kg，線性方程的相關(guān)系數(shù)大于0.99，加標(biāo)回收率在93%-110%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于9.1%。檸檬黃的檢測(cè)限為0.02mg/kg。該方法簡(jiǎn)單、可靠、提取效果好，測(cè)定結(jié)果滿意，適用于摻假玉米饅頭中衡量檸檬黃的定量分析。

關(guān)鍵詞：直接萃取；摻假玉米饅頭；檸檬黃；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：TB

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：16723198（2015）20022702

1 引言

玉米被稱為是抗癌、防衰的粗糧佳品。玉米富含VE和VA，玉米中的VB1、VB2、煙酸和鐵質(zhì)等高出大米4倍。玉米所含的脂肪為米面的4～5倍，而且富含不飽和脂肪酸，其中50%為亞油酸，還含有谷固醇、卵磷脂等，能降低膽固醇，防止高血壓、冠心病、心肌梗塞的發(fā)生，并具有延緩腦功能退化的作用。饅頭是我國(guó)的傳統(tǒng)主食，玉米饅頭及其他玉米制品的開(kāi)發(fā)對(duì)改善廣大人民群眾的膳食結(jié)構(gòu)、增強(qiáng)人民體質(zhì)、增加農(nóng)業(yè)附加值具有重要意義。

檸檬黃是一種食品常用的食品添加劑，添加適量檸檬黃的食品顏色飽滿鮮亮，常用于飲料、蜜餞、醬腌菜等食品中。據(jù)報(bào)道，目前有不法商販將檸檬黃添加到饅頭制品中，制作出顏色鮮亮的摻假“玉米饅頭”檸檬黃是一種水溶性的偶氮染料，長(zhǎng)期食用將對(duì)大眾的身體健康產(chǎn)生負(fù)面影響。

目前，檢測(cè)固體食品中的檸檬黃，大都采用酸性水溶液浸泡提取后，以聚酰胺粉吸附提取液中的檸檬黃，再經(jīng)氨水甲醇洗脫濃縮的方法。但存在酸性水溶液的提取能力差，聚酰胺粉吸附不完全，檸檬黃損失大的缺點(diǎn)。測(cè)定玉米饅頭中檸檬黃含量的方法國(guó)內(nèi)外均尚未見(jiàn)報(bào)道。

本文建立了氨化甲醇直接萃取-高效液相色譜法測(cè)定摻假玉米饅頭中檸檬黃含量的方法。樣品經(jīng)5%氨水甲醇溶液直接萃取后，過(guò)濾，經(jīng)冰乙酸調(diào)至中性，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮近干，甲醇/水（50/50）溶液溶解并定容。以乙酸銨/甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，經(jīng)C18色譜柱分離，采用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)。本方法簡(jiǎn)單、可靠、提取效果好，測(cè)定結(jié)果滿意，適用于摻假玉米饅頭中衡量檸檬黃的定量分析。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 996 PAD 二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)waters公司）；渦旋混和儀；（上海滬西分析儀器廠，WH-3）超聲清洗器（上海KUDOS超聲儀器有限公司，SK7200LH）。

檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于99%，百靈威公司）用1∶1甲醇水配制成10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-4℃下避光保存，根據(jù)需要稀釋成適當(dāng)濃度的工作液。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 樣品制備及預(yù)處理

空白樣品制備：玉米粉量為30%、加水量為45%、發(fā)酵時(shí)間為3h、醒發(fā)時(shí)間為30min，蒸熟。

加標(biāo)樣品制備：玉米粉添加量為30%、加入不同濃度水平的檸檬黃水溶液的量為45%、發(fā)酵時(shí)間為3h、醒發(fā)時(shí)間為30min，蒸熟。制得檸檬黃添加水平分別為0.5、5.0、10.0、50.0、100.0、150.0、200.0、300.0、5000、1000.0、1200.0、1500.0mg/kg的玉米饅頭。

樣品預(yù)處理：取20.0g玉米饅頭樣品置于2500mL具塞三角瓶中，然后加入150.0mL新鮮配制的5%氨水甲醇溶液，振蕩混勻，靜置12h后，過(guò)濾，將濾液用冰乙酸調(diào)至中性，70℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，用甲醇/水（50/50）溶液溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?.00mL，過(guò)045μm濾膜，濾液供上機(jī)測(cè)定。

2.2.2 色譜條件

色譜柱：Acclaim 120 C18（4.6×250mm，5μm，美國(guó)戴安公司）；流動(dòng)相：A相為20mmol乙酸銨溶液，B相為甲醇，等度洗脫（A∶B=16∶84）；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5.0μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：420nm。

3 結(jié)果與討論

3.1 萃取條件的優(yōu)化

3.1.1 萃取方法及萃取液的選擇

本文分別用5種不同提取液進(jìn)行預(yù)處理，在上述色譜條件下進(jìn)行分離檢測(cè)，結(jié)果如表1所示。

由表1可見(jiàn)，單獨(dú)使用甲醇回收率很低；使用乙腈做提取液回收率提高到43.5%，但仍不能滿足分析的要求；1∶1甲醇與水的混合溶劑進(jìn)行提取時(shí)發(fā)生渾濁，需進(jìn)行12000r高速離心才能夠分層。單獨(dú)用5%氨水溶液提取，由于不能進(jìn)行濃縮，仍無(wú)法滿足分析要求。含有5%氨水的甲醇溶液進(jìn)行提取，回收率在97%以上，效果最佳。另外，氨水與無(wú)水乙醇無(wú)法互溶，故無(wú)法使用。因此本研究確定提取液為5%氨水甲醇溶液。

3.1.2 提取液體積的優(yōu)化

萃取液體積對(duì)回收率有重要影響。為了確保檸檬黃能夠全部提取出來(lái)，本研究提高了樣品中的添加水平（500mg/kg），先按照3.1.1確定的方法分別加入5000mL，100.00mL，150.00mL，20000mL，250mL5%氨水甲醇溶液，振蕩混和，浸泡提取12h，進(jìn)行分離檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明，提取液體積在大于150.00mL后，提取出的檸檬黃的總量不增加反降低。故本文提取液用量定為150.00mL。

3.1.3 萃取時(shí)間的優(yōu)化

萃取時(shí)間可影響檸檬黃的回收率。分別稱取5份加標(biāo)樣品（添加檸檬黃水平為100mg/kg），按照3.1.1和3.1.2節(jié)所述方法，分別加入150.00mL5%氨水甲醇溶液，渦旋混和后，分別超聲提取1h，5h，10h，12h，15h，20h，30h，60h然后進(jìn)行分離檢測(cè)，結(jié)果如圖2所示。結(jié)果表明，在萃取時(shí)間大于15h之后，檸檬黃的回收率基本不再增加。故本文萃取時(shí)間定為15h。

3.2 方法的線性范圍，檢出限，回收率和精密度

采用外標(biāo)法定量，檸檬黃在樣品中的線性范圍為0.5～1000mg/kg，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。以加標(biāo)樣品為測(cè)試樣品，添加不同濃度水平的檸檬黃，每個(gè)水平做6個(gè)平行樣，計(jì)算回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見(jiàn)表2。通過(guò)低濃度（0.5mg/kg）添加樣品，以3倍信噪比為檢出限（LOD），計(jì)算得出檸檬黃的檢出限為002mg/kg，同樣條件下，以10倍信噪比為定量下限（LOQ），計(jì)算出檸檬黃的定量下限為0.5mg/kg。

3.3 實(shí)際樣品中檸檬黃的測(cè)定

測(cè)定了5份樣品，均為武漢質(zhì)檢所日常檢測(cè)所采集的樣品。樣品按照本文確定的前處理方法進(jìn)行預(yù)處理后，以10μL直接進(jìn)樣分析，所得結(jié)果如表3所示。檸檬黃在5份樣品中的回收率為94.6%～100.2%。

*ND：未檢出（not detected）

采用氨水甲醇溶液直接萃取-高效液相色譜法測(cè)定摻假玉米饅頭中檸檬黃含量的方法，具有檢出限低，雜質(zhì)干擾少，樣品前處理步驟簡(jiǎn)單，回收率穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，可用于實(shí)際玉米饅頭制品中檸檬黃的檢測(cè)。

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