陳　君

（湖北省襄陽市食品藥品檢驗所，湖北 襄陽 441021）

復方麝香注射液內毒素的方法研究

陳君

（湖北省襄陽市食品藥品檢驗所，湖北 襄陽 441021）

目的 建立復方麝香注射液細菌內毒素檢查法。方法 按中國藥典2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法進行試驗。結果 該注射液經(jīng)過30倍稀釋后，對鱟試劑測定細菌內毒素無干擾。結論 復方麝香注射液可以采用細菌內毒素檢查法（凝膠法）進行細菌內毒素的限量檢查。

復方麝香注射液；細菌內毒素檢查；干擾試驗

復方麝香注射液是由6味中草藥制成，有豁痰開竅，醒腦安神的功效，臨床上用于痰熱內閉所致的腦卒中昏迷。目前該藥仍沿用家兔法檢測熱原，家兔法操作繁瑣、費時、成本高、靈敏度低，很多人都在研究該藥的內毒素方法，我們根據(jù)2010年版藥典二部附錄細菌內毒素檢查法和熱原家兔法的要求［1］，對該藥檢測進行了研究對比，結果表明，該藥是可以用細菌內毒素檢查法代替家兔法檢測熱原的。

1　儀器與材料

1.1儀器：旋渦式混懸器（天津藥典標準儀器廠，ZH-2型）；電熱恒溫水浴箱（江蘇金壇市中大儀器廠，420型）；無熱源移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司）。

1.2材料：鱟試劑2批（湛江安度斯生物有限公司，靈敏度0.5 EU，批號1301241，批號1211241），細菌內毒素檢測用水（湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格2.0，批號1404030，規(guī)格5.0，批號1404240），細菌內毒素工作標準品（湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格10 EU/支，批號1301050）。熱源用家兔，經(jīng)預測全部合格，復方麝香注射液（安徽金太陽生化藥業(yè)有限公司，批號131201。）

2　方法與結果

2.1內毒素限值的確定：藥品細菌內毒素限值（L）一般按以下公式確定：L=K/M，注射劑K=5EU/（kg?h），復方麝香注射液的用法用量中一次最大注射量為20mL，人均體質量按60 kg計算，L=15.15 EU/mL，以此計算出復方麝香注射液內毒素的限值應為15 EU/mL。

這里我們要提一下，以前有很多人在確立M的時候，帶入了家兔法的注射劑量，這個應該是不對的，2010年版藥典明確規(guī)定了M為人用每千克體質量每小時的最大供試品劑量，且指出人均體質量按60 kg計算，注射時間不足1 h按1 h計算。復方麝香注射液說明書上的用法用量，靜脈滴注，一次10～20mL，人均體質量按60 kg計算的話，M=0.33mL/（kg?h），而該藥現(xiàn)行標準中規(guī)定熱原檢查法劑量按家兔體質量每1 kg注射0.5mL，很多人直接將這里的0.5mL當做M帶入計算，會導致計算出的細菌內毒素限值相差1.5倍。

2.2確定最大有效稀釋倍數(shù)：L能準確確定后，MVD就很好計算了，我們此次試驗用哦鱟試劑的標示靈敏度為0.25 EU/mL，計算出MVD=cl/λ=30。

2.3鱟試劑靈敏度復核試驗：2010年版藥典規(guī)定，當使用了新批號的鱟試劑或實驗條件發(fā)生了任何可能影響檢驗結果的改變時，應進行鱟試劑靈敏度復核試驗。將120 EU/支的細菌內毒素國家標準品用細菌內毒素檢測用水溶解后，依法制成2、1、0.5、0.25 λ 4個濃度的內毒素標準溶液，經(jīng)復核，本次試驗所用的0.5 EU/mL的鱟試劑標示靈敏度為0.5 EU/mL。

2.4干擾試驗

2.4.1預實驗：將供試品溶液按梯度稀釋至不超過最大有效稀釋倍數(shù)的溶液，按鱟試劑靈敏度復核試驗項下操作［1］，每個濃度平行做4支管。2批鱟試劑結果一致。見表1。

表1　凝膠法預試驗

從表1可知，復方麝香注射液對鱟試劑有干擾，稀釋30倍以上可去除干擾。

2.4.2干擾試驗［2］：按照中國藥典2010年版二部附錄XIE細菌內毒素檢查法項下干擾試驗表1制備溶液A、B、C、D，按鱟試劑靈敏度復核試驗項下操作。其中供試品溶液為稀釋30倍的溶液。結果見表2。

表2　凝膠法干擾試驗

當復方麝香注射液稀釋30倍時，干擾試驗通過。

2.5供試品用細菌內毒素檢查法與家兔法檢測結果比較：供試品稀釋30倍，參照2010年版藥典二部附錄XIE細菌內毒素檢查法，用0.5 EU/支的鱟試劑檢驗，結果為陰性。按照2010年版藥典二部附錄XID家兔法檢測，結果也為陰性，兩種方法結果完全一致。

3　討 論

復方麝香注射液為中成藥制劑，為臨床常用藥品，但是目前仍采用家兔法檢測熱原，費時費力，成本高。本次試驗，采用供試品30倍稀釋液，0.5 EU/mL的鱟試劑對樣品進行細菌內毒素檢測，結果與家兔法一致且無干擾。經(jīng)論證，復方麝香注射液可以用細菌內毒素檢查法代替家兔熱原檢查法。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典二部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄71-73.

［2］ 黃清泉，夏鎮(zhèn)明.藥品細菌內毒素檢查的試驗設計［J］.中國藥學雜志，1997，32（2）：72.

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