寧曄，劉小婷，寧艷，單志群，許志芃

深圳市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518033

補(bǔ)腎益沖丸延緩大鼠卵巢早衰實(shí)驗(yàn)研究

寧曄，劉小婷，寧艷，單志群，許志芃

深圳市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518033

目的：研究補(bǔ)腎益沖丸對(duì)卵巢早衰大鼠動(dòng)物的干預(yù)作用。方法：建立卵巢早衰大鼠動(dòng)物模型，在上述模型基礎(chǔ)上，相應(yīng)給藥，監(jiān)測(cè)空白對(duì)照組、中藥組、倍美力組、造模對(duì)照組大鼠的情況及檢測(cè)血清激素［促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）］、抗卵巢抗體水平。結(jié)果：造模第10天開(kāi)始，中藥組、倍美力組、造模對(duì)照組3組大鼠均不同程度出現(xiàn)容易激惹、大便干結(jié)，毛無(wú)光澤，體毛蓬松，脫毛的癥狀，動(dòng)情周期紊亂等，有的陰道涂片僅有動(dòng)情間期的白細(xì)胞。灌胃后30天，中藥組、倍美力組FSH、LH降低，E2升高，與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。灌胃后30天，中藥組血清抗卵巢抗體下降，與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：補(bǔ)腎益沖丸對(duì)卵巢早衰模型大鼠的FSH、LH、E2有改善作用，亦可調(diào)節(jié)免疫功能，改善機(jī)體免疫狀態(tài)，恢復(fù)卵巢功能，而達(dá)到治療卵巢早衰的功效。

卵巢早衰；補(bǔ)腎益沖丸；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；大鼠

卵巢早衰（POF）是指婦女在40歲以前由于卵巢功能衰退而引起月經(jīng)失調(diào)、不孕、性功能降低、更年期綜合征等一系列癥狀的疾病。因此，探討POF的有效治療方法十分必要。中醫(yī)藥具有整體調(diào)控和多靶點(diǎn)、多方式調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，特別是能提高卵巢對(duì)促性腺激素的反應(yīng)性和卵巢中性激素受體的含量，促使卵巢功能恢復(fù)和改善，且與西藥相比無(wú)任何毒副反應(yīng)，安全而有效，因而對(duì)女性卵巢功能失調(diào)類疾病的防治顯示出優(yōu)勢(shì)［1］。

補(bǔ)腎益沖丸是取得廣東省藥監(jiān)局批準(zhǔn)文號(hào)的科研制劑，研究表明，該藥可提高排卵和妊娠率，對(duì)接受試管嬰兒助孕技術(shù)患者胚胎著床、成功妊娠的療效肯定［2］。在本院臨床上長(zhǎng)期用于治療月經(jīng)失調(diào)，不孕癥等病癥。近年來(lái)隨著POF患者的日益增多，本藥被用于此病腎虛型患者的治療，臨床療效明顯?，F(xiàn)擬通過(guò)POF動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究，揭示補(bǔ)腎益沖丸對(duì)POF的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雌性成熟未交配過(guò)的SD大鼠40只，12周齡，體重250～270 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物 中藥制備：補(bǔ)腎益沖丸由廣東省藥監(jiān)局批準(zhǔn)、深圳市中醫(yī)院制劑室提供（2000年深衛(wèi)制劑第3P-036號(hào)，2003年廣東省藥監(jiān)局批準(zhǔn)文號(hào)：粵藥制字ZO3O3OO12），每10 g含生藥21.9 g，組成：熟地黃，當(dāng)歸、白芍、山茱萸、黃精、紫河車粉，鹿角膠、續(xù)斷、菟絲子、巴戟天、淫羊藿、香附。用法：實(shí)驗(yàn)時(shí)按所需分量將藥丸配置成混懸液備用。倍美力溶液制備：每片0.625m g［由美國(guó)惠氏艾爾斯特制藥公司艾爾斯特藥廠制造，惠氏制藥有限公司分裝，生產(chǎn)批號(hào)0502090，國(guó)藥準(zhǔn)字（2001）J-51（2）號(hào)］，生理鹽水溶解定容。

1.3 造模方法 所有雌性大鼠每天進(jìn)行陰道細(xì)胞涂片檢查，選擇動(dòng)情周期4～5天的大鼠，隨機(jī)分為中藥組、倍美力組、造模對(duì)照組、空白對(duì)照組。中藥組、倍美力組、造模對(duì)照組以雷公藤多甙片50m g/kg灌胃造模，每天1次，連續(xù)灌胃14天［3］。空白對(duì)照組：連續(xù)生理鹽水2m L/kg灌胃14天。中藥組：造模結(jié)束后24 h用補(bǔ)腎益沖丸混懸液（按成人等效劑量8倍于成人劑量）24 g/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天。倍美力組：造模結(jié)束后24 h用倍美力0.075m g/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天。造模對(duì)照組：造模結(jié)束后24 h用生理鹽水2 m L/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天?？瞻讓?duì)照組：繼續(xù)生理鹽水灌胃2m L/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天。

1.4 一般情況觀察 活動(dòng)：有無(wú)活動(dòng)抑制、嗜睡、厭食、旋轉(zhuǎn)、輕癱等行為異常。糞便、尿液或身體其他排出物有無(wú)帶血。有無(wú)立毛、體毛篷松、脫發(fā)，腫脹、腫塊、損傷等情況。若有動(dòng)物死亡，記錄死亡數(shù)量及原因，考慮中途因灌藥/喂養(yǎng)不當(dāng)?shù)人劳鲈颉?/p>

1.5 采血檢測(cè) 灌胃后第1天及處死當(dāng)天各組大鼠，乙醚吸入麻醉后，眼眶下靜脈叢取血。取血3m L注入干燥管，離心，取血清，儲(chǔ)存于-20℃冰箱備用，用以檢測(cè)血清激素［促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）］水平。采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定。將血清放入測(cè)定管后由Elecsys 2010 Roche全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（瑞士Roche公司）自動(dòng)完成。用間接ELISA方法檢測(cè)抗卵巢抗體，試劑盒由上海玉蘭生物技術(shù)研究所提供，每次實(shí)驗(yàn)均按試劑盒說(shuō)明書操作。血清按1∶20稀釋，結(jié)果以酶標(biāo)儀讀數(shù)判斷。

1.6 卵巢檢測(cè) 處死各組大鼠后，觀察雙側(cè)卵巢大體解剖，并取下雙側(cè)卵巢組織，用10%（體積分?jǐn)?shù)）的甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，待做HE染色及免疫組織化學(xué)分析，光鏡觀察卵巢的組織形態(tài)改變、卵泡的大小發(fā)育情況。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 一般形態(tài) 造模第10天開(kāi)始，中藥組、倍美力組、造模對(duì)照組3組大鼠均不同程度出現(xiàn)容易激惹、大便干結(jié)，毛無(wú)光澤，體毛蓬松，脫毛的癥狀，動(dòng)情周期紊亂等，有的陰道涂片僅有動(dòng)情間期的白細(xì)胞。

2.2 各組大鼠血清激素變化比較 見(jiàn)表1。造模結(jié)束后30天，中藥組、倍美力組FSH、LH降低，E2升高，與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠血清激素變化比較±s）

表1 各組大鼠血清激素變化比較±s）

與空白對(duì)照組比較，①P＜0.05

組別空白對(duì)照組中藥組倍美力組造模對(duì)照組n FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） E2（pg/mL）10 10 10 10造模結(jié)束后第1天11.05±1.36 13.25±1.67①13.83±2.01①13.71±1.62①造模結(jié)束后第30天11.26±1.85 11.20±1.74 12.94±1.15 13.68±2.53①造模結(jié)束后第1天8.16±1.39 8.85±1.26①8.74±1.31①8.95±2.03①造模結(jié)束后第30天8.08±1.92 8.02±0.87 8.26±1.26 8.56±1.73①造模結(jié)束后第1天754.39±80.47 602.75±68.46①608.76±89.43①612.58±76.17①造模結(jié)束后第30天748.41±88.02 725.59±82.48 738.29±65.47 638.59±74.39①

2.3 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較 見(jiàn)表2。造模結(jié)束后30天，中藥組血清抗卵巢抗體下降，與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較±s） OD

表2 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較±s） OD

與空白對(duì)照組比較，①P＜0.05

組別空白對(duì)照組中藥組倍美力組造模對(duì)照組n 10 10 10 10造模結(jié)束后第1天1.49±0.18 1.92±0.25①1.95±0.33①1.93±0.27①造模結(jié)束后第30天1.50±0.25 1.61±0.38 1.91±0.24①1.89±0.19①

3 討論

POF為臨床常見(jiàn)病、疑難病，其發(fā)病率逐年增加，其發(fā)生率約為1%，卵巢狀態(tài)與正常絕經(jīng)后相似，嚴(yán)重影響婦女身心健康。其發(fā)病原因尚不明確，有學(xué)者認(rèn)為可能與自身免疫、遺傳因素，促性腺激素及其受體傳導(dǎo)缺陷，原始卵泡儲(chǔ)備少，以及物理化學(xué)因素等有關(guān)［4］。探討POF的有效治療方法十分必要。本研究探討補(bǔ)腎益沖丸對(duì)POF大鼠動(dòng)物的干預(yù)作用，初步闡明了作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，補(bǔ)腎益沖丸對(duì)POF造模大鼠的FSH、LH、E2有改善作用，亦可調(diào)節(jié)免疫功能，改善機(jī)體免疫狀態(tài)，恢復(fù)卵巢功能，而達(dá)到治療POF的功效。

［1］張蕾，曲季芬.卵巢早衰的中醫(yī)藥治療研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥信息，2009，26（2）：10-12.

［2］許爽君，楊水清，王建萍，等.補(bǔ)腎益沖丸的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2007，16（7）：852-853.

［3］高慧，楊涓，夏天，等.補(bǔ)腎調(diào)沖方對(duì)卵巢早衰大鼠卵巢相關(guān)因子TNF-α、IFN-γ蛋白和基因表達(dá)的影響［J］.國(guó)醫(yī)論壇，2008，23（3）：38-39.

［4］王迪華，梁雪雯，周紅.逍遙助卵煎對(duì)卵巢早衰患者血清性激素水平的影響［J］.中國(guó)婦幼保健，2007，22（33）：4687-4688.

（責(zé)任編輯：駱歡歡）

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0256-7415（2015）06-0268-02

10.13457/j.cnki.jncm.2015.06.126

2014-12-30

深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201102200）

寧曄（1974-），女，主管護(hù)師。