陳曉萌* 樊鵬利 秦玉花 趙紅衛(wèi)

（河南省人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

分子靶向藥物索拉菲尼對胃癌細(xì)胞株SNU-1增殖的影響

陳曉萌* 樊鵬利 秦玉花 趙紅衛(wèi)

（河南省人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

目的 研究分子靶向藥物索拉菲尼對胃癌SNU-1細(xì)胞株的抑制作用。方法 分別以不同濃度索拉菲尼作用于胃癌SNU-1細(xì)胞株，采用MTT法分別檢測不用濃度藥物組對胃癌細(xì)胞SNU-1的抑制作用。結(jié)果 在相同的藥物濃度下，隨著作用時間（24 h、48 h、72 h）的延長，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細(xì)胞的生長抑制作用逐漸增強(qiáng)（P＜0.05），在相同的干預(yù)時間，隨著藥物濃度的增加，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細(xì)胞的生長抑制作用也逐漸增強(qiáng)（P＜0.05）。結(jié)論 索拉菲尼可抑制體外胃癌SNU-1細(xì)胞株的增殖，為在臨床治療胃癌提供基礎(chǔ)依據(jù)。

靶向藥物；索拉菲尼；胃癌；抑制作用

胃癌是我國最常見惡性腫瘤之一，其病死率僅次于肺癌排第二位，我國的胃癌病例人數(shù)約占世界的1/3［1-2］。目前，胃癌的治療手段主要有3種，外科手術(shù)、放化療及生物學(xué)治療。但對于大多數(shù)臨床Ⅱ、Ⅲ期胃癌患者的5年生存率低于40%，而Ⅳ期胃癌患者的平均生存時間僅為10個月［3］。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷提高，與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死、血管形成和侵襲轉(zhuǎn)移等特征不斷被人們所揭示，專家學(xué)者們通過細(xì)胞信號傳導(dǎo)發(fā)現(xiàn)了新的細(xì)胞靶向治療藥物。目前，臨床上經(jīng)常應(yīng)用靶向治療藥物主要有EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）、抗血管生成藥、細(xì)胞周期抑制劑和促凋亡劑等。本實驗觀察索拉菲尼對體外人胃癌細(xì)胞株SNU-1的抑制作用，以期為臨床分子靶向藥物治療胃癌提供實驗依據(jù)。

1　材料與方法

1.1 試驗材料：人胃癌SNU-1細(xì)胞株購于上海拜力生物科技有限公司。RPMI1640培養(yǎng)基（北京索來寶生物科技有限公司），HyClone胎牛血清（北京賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司），MTT美國（Sigma公司），磷酸鹽緩沖液PBS（參照《細(xì)胞培養(yǎng)》配制），碘化丙啶PI染色液（美國Sigma公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)：將胃癌細(xì)胞系SNU-1復(fù)蘇后，加入含10%新生小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液（含青霉素100 U/mL，鏈霉素100 U/mL），于5% CO2培養(yǎng)箱中37 ℃靜置培養(yǎng)，傳代時采用0.25%胰酶消化，每5 d傳代1次，長至對數(shù)生長期。

1.2.2 試驗分組：實驗分為3組，索拉菲尼藥物組，藥物濃度分別為1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L；空白對照組，不加細(xì)胞，只加等量的培養(yǎng)基；陰性對照組，加細(xì)胞，再加相應(yīng)等量的培養(yǎng)基，不加干預(yù)藥物。各組設(shè)5個復(fù)孔。

1.2.3 MTT法測定人胃癌SNU-1細(xì)胞的增殖情況：取對數(shù)生長期的人胃癌SNU-1細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整密度為2×105個/毫升將細(xì)胞懸液接種于96孔板內(nèi)，按照1.2.2的分組進(jìn)行加藥，每種濃度都設(shè)置5個復(fù)孔；同時陰性對照孔（只含細(xì)胞和培養(yǎng)液），空白對照孔（只含培養(yǎng)液），于37 ℃、5%CO2及飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后，每孔加入新鮮配制的2 mg/mL的MTS 15 μL，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，終止培養(yǎng)。在酶聯(lián)免疫吸附儀上檢測492 nm波長處的各孔的吸光度（A）值（每組獨(dú)立重復(fù)3次），實驗取平均值，按下列公式計算腫瘤細(xì)胞生長抑制率：細(xì)胞生長抑制率（%）=（1-實驗組A值/對照組A值）×100%。

1.3 統(tǒng)計方法：所有實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)以±s）表示，多組比較時，方差齊者，采用單因素的方差分析，P＜0.05表示有顯著性差異。

2　結(jié)　果

根據(jù)實驗和統(tǒng)計結(jié)果顯示，在相同的藥物濃度下，隨著作用時間（24 h、48 h、72 h）的延長，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細(xì)胞的生長抑制作用逐漸增強(qiáng)（P＜0.05），在相同的干預(yù)時間，隨著藥物濃度（1.5 μmol/Lsorafenib，3.0 μmol/Lsorafenib，6.0 μmol/Lsorafenib，12 μmol/Lsorafenib）的增加，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細(xì)胞的生長抑制作用也逐漸增強(qiáng)（P＜0.05）。見表1。

表1 不同濃度索拉菲尼在不同作用時間對胃癌SNU-1細(xì)胞的影響±s）

表1 不同濃度索拉菲尼在不同作用時間對胃癌SNU-1細(xì)胞的影響±s）

注：a.索拉菲尼不同作用時間各組間比較，P＜0.05；b.不同藥物濃度各組間比較，P＜0.05

藥物濃度（μmol/mL）　　抑制率（%）24 ha　48 ha　72 ha空白對照　1.24±0.36　2.04±0.84　2.57±1.58陰性對照　1.99±0.87　2.11±1.43　2.94±1.09 1.5　17.65±5.89b　23.39±6.84b　29.45±8.61b3 26.25±7.14b　30.91±6.87b　39.84±10.22b6 29.63±10.34b　39.59±8.74b　46.75±16.83b12　38.61±9.78b　49.65±15.71b　61.21±15.96b

3　討　論

索拉菲尼是一種新型的靶向制劑藥物，該藥在上市前臨床研究及上市后臨床應(yīng)用均顯示出了較好的靶向抗腫瘤作用，療效確切。具體作用機(jī)制為抑制Raf激酶和受體酪氨酸激酶的合成，抑制腫瘤細(xì)胞的活化和增殖，抑制腫瘤組織微血管形成［4-5］。通過動物實驗研究顯示，索拉非尼對多種癌細(xì)胞的增殖均具有良好的抑制作用，包括小鼠腎細(xì)胞癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌和卵巢癌模型等。

索拉菲尼通過對兩種受體的酪氨酸激酶活性起到抑制作用，進(jìn)而阻斷了腫瘤新生微血管的形成，并能夠阻斷腫瘤細(xì)胞對營養(yǎng)成分的攝取，從而間接的抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖和生長。有研究表明［6］，索拉菲尼對MAPK信號傳導(dǎo)系統(tǒng)具有較好的抑制作用，尤其是對帶有致癌的K-ras和（或）b-raf突變體的腫瘤細(xì)胞。Liu等［7］亦證明索拉菲尼通過下調(diào)抗凋亡蛋白Mcl-1的表達(dá)水平以及降低ELF4的磷酸化水平，進(jìn)而可有效的阻斷肝癌細(xì)胞株P(guān)LC/PRF/5中Raf/MEK/ERK信號傳導(dǎo)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和壞死。國內(nèi)亦有研究表明［8］，索拉菲尼可通過抑制肝癌細(xì)胞自噬而起到良好的抗腫瘤作用。

多條信號通路的過度活化導(dǎo)致了正常細(xì)胞的病變，進(jìn)而進(jìn)展為惡性腫瘤。由于這些信號通路之間彼此形成的網(wǎng)絡(luò)較為復(fù)雜，因此，多靶點(diǎn)多環(huán)節(jié)調(diào)控與胃癌的病理發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。目前臨床中大部分靶向治療藥物多針對一個靶點(diǎn)進(jìn)行治療和發(fā)揮效應(yīng)，而信號傳導(dǎo)機(jī)構(gòu)又是一個復(fù)雜的、多重的網(wǎng)絡(luò)體系，因此，臨床及研究中應(yīng)注重多靶點(diǎn)分子靶向藥物對于腫瘤的治療，這也勢必是腫瘤分子靶向治療的重要發(fā)展方向。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1.5～12 μmol/L濃度的索拉菲尼對胃癌SNU-1細(xì)胞具有顯著的增殖抑制作用，并呈現(xiàn)明顯的劑量和時間雙效應(yīng)。同時表明索拉菲尼對SNU-1胃癌細(xì)胞具有良好的抑制增殖和促進(jìn)壞死、凋亡的作用。

［1］ Mina S，Bohn BA，Simon R，et al.PTEN deletion is rare but often homogeneous in gastric cancer［J］.Clinical Pathology，2012，65（8）: 693-698.

［2］ Zhu XH，Qin X，F(xiàn)ei MG，et al.Loss and reduced expression of PTEN correlate with advanced stage gastric carcinoma［J］.Experimen Therapeu Med，2013，5（1）: 57-64.

［3］ Roukos DH.Targeting gastric cancer with trastuzumab: new clinical practice and innovative developments to overcome resistance［J］. Ann Surg Oncol，2010，17（1）:14-17.

［4］ Wilhelm SM，Carter C，Tang L，et al.BAY 43-9006 exhibits broad Spectrum oral antitumor activity and targets the RAS/RAF/MEK/ ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis［J］.Cancer Res，2004，64（19）:7099-7109.

［5］ Strumberg D.Preclinical and clinical development of the oral multikinase inhibitor sorafenib in cancer treatment［J］.Drugs Today（Barc），2005，41（12）:773-784.

［6］ Wilhelm SM，Carter C，Tang L，et al.BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAS/RAF/MEK/ ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis［J］.Cancer Res，2004，64（19）:7099-7109.

［7］ Liu L，Cao Y，Chen C，et al.Sorfenib blocks the RAF/MEK/ERK pathway，inhibits tumor angiogenesis and induce tumor cell apoptosis in hepatocellular carcinoma model PLC/PRF/5［J］.Cancer Res，2006，66（24）:l1851-11858.

［8］ 孫廣偉，邱偉華，施敏敏，等.索拉菲尼對肝癌細(xì)胞HepG2自噬的抑制作用［J］.外科理論與實踐，2010，15（1）:51-55.

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1671-8194（2015）15-0057-02