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        六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究

        2015-10-19 06:01:30彭險(xiǎn)峰黃計(jì)軍葉曉嵐李俊健姜美華區(qū)煜榮
        中國(guó)飼料 2015年16期
        關(guān)鍵詞:血漿檢測(cè)

        彭險(xiǎn)峰,黃計(jì)軍,葉曉嵐,李俊健,任 陽(yáng),姜美華,區(qū)煜榮

        (廣州英賽特生物技術(shù)有限公司,廣東廣州 510663)

        研究發(fā)現(xiàn),六氫β-酸較適合于作為替代飼用抗生素的新型促生長(zhǎng)劑的先導(dǎo)化合物開(kāi)發(fā),并且其分子酯化后,飼料加工過(guò)程中的穩(wěn)定性大大提高。六氫β-酸月桂酸酯是其中的一種酯化物(彭險(xiǎn)峰和覃宗華,2014)。目前該酯的口服藥動(dòng)學(xué)及生物利用度研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)進(jìn)行了六氫β-酸月桂酸酯在健康雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及生物利用度研究,為其進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試藥與試劑 六氫β-酸月桂酸酯,批號(hào):20140910,含量:53.0%,廣州英賽特生物技術(shù)有限公司研制。甲醇、乙酸、乙腈均為色譜級(jí),其他試劑均為分析試劑。六氫β-酸月桂酸酯標(biāo)準(zhǔn)品,溶解于適量乙醇,配制成1000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,置-20℃?zhèn)溆谩?/p>

        1.2 儀器設(shè)備 LC-15C島津高效液相色譜儀(LC-15C二元泵,自動(dòng)進(jìn)樣器,SPD-15C紫外檢測(cè)器,LC solution色譜工作站),日本島津公司;CT14RD臺(tái)式離心機(jī),上海天美科學(xué)儀器有限公司;氮吹儀,YSC-24型,成都雅源科技有限公司;FA2104型電子分析天平,上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司;IKA-MS3旋渦混合儀,德國(guó)IKA公司;色譜柱為Hanbon&Science Benatach-NH2 C18(4.6×250 mm,5 μm)。

        1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 體重為 (2.0±0.1)kg的嶺南快大黃肉雞(12只)、102型肉雞飼料(不含抗生素),均由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所提供。試驗(yàn)期間按常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水和采食。

        1.4 給藥及采樣 試驗(yàn)前16 h禁食,自由飲水,給藥后禁飼4 h。動(dòng)物稱(chēng)重后隨機(jī)分為2組,每組6只雞,分別單劑量灌胃六氫β-酸月桂酸酯(40 mg/kg體重)和靜脈注射六氫β-酸月桂酸酯(1 mg/kg體重)。雞側(cè)臥保定,給藥前采一次空白血樣。分別于給藥后 0.083 (僅靜注)、0.17、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12 h 采血約 2 mL, 立即移入加有抗凝劑的離心管中,4000 r/min離心10 min,分離血漿,置于-20℃冰箱保存,待測(cè)。

        1.5 血漿樣品處理 精密吸取0.75 mL待測(cè)血漿于離心管中,加入80%正己烷0.75 mL,漩渦混勻 30 s,8000 r/min離心 10 min, 取上清液 0.60 mL,氮?dú)獯蹈?,殘?jiān)?60 μL正己烷復(fù)溶,12000 r/min離心10 min后進(jìn)行HPLC分析。

        1.6 檢測(cè)色譜條件 流動(dòng)相為正己烷-異丙醇(60∶40,V/V);檢測(cè)波長(zhǎng)為 315 nm,流速 0.8 mL/min;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。

        1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 分別取一定量的六氫β-酸月桂酸酯儲(chǔ)備液添加到6個(gè)10 mL具塞離心管中,分別加入適量空白血漿,配制成含一定濃度的六氫β-酸月桂酸酯血漿標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL),按 1.5 方法進(jìn)行處理后測(cè)定,記錄色譜圖與峰面積,采用峰面積外標(biāo)法定量。

        1.8 數(shù)據(jù)處理 血液藥時(shí)數(shù)據(jù)采用藥動(dòng)學(xué)軟件WinNonLin 5.2.1的非房室模型統(tǒng)計(jì)矩分析方法處理,藥動(dòng)學(xué)參數(shù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

        2 結(jié)果

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和線(xiàn)性范圍 空白血漿中添加六氫β-酸月桂酸酯后,按本試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè),六氫β-酸月桂酸酯添加量為0.05~2 μg/mL,線(xiàn)性關(guān)系良好(Y=5562X+1008,R2=0.999)。在本試驗(yàn)條件下,最低檢測(cè)量為1 ng,最低檢測(cè)濃度為0.05 μg/mL。

        2.2 精密度與回收率 分別配制含六氫β-酸月桂酸酯0.05、0.2、1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)血樣,各濃度每批5個(gè)重復(fù),連續(xù)3批,分別測(cè)定精密度及回收率。測(cè)得的回收率分別為 (101.25±4.25)%、(99.73±3.16)%、(99.85±3.41)%,測(cè)得各濃度日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差 (RSD)小于5%,日間的RSD小于10%,滿(mǎn)足藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)要求。

        2.3 口服或靜脈注射六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征 健康雞單劑量灌胃或靜脈注射給藥六氫β-酸月桂酸酯后,六氫β-酸月桂酸酯的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線(xiàn)如圖1所示。藥時(shí)數(shù)據(jù)經(jīng)藥動(dòng)學(xué)軟件 WinNonLin 5.2.1的非房室模型統(tǒng)計(jì)矩分析方法處理后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。

        圖1 六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)的藥時(shí)曲線(xiàn)

        由表1可見(jiàn),雞灌胃六氫β-酸月桂酸酯(40 mg/kg體重)后,吸收緩慢,給藥后1.0 h血藥濃度達(dá)峰值,平均Cmax為0.04 μg/mL,說(shuō)明六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)吸收量較少;血漿中平均消除半衰期(T1/2)為 2.35 h,平均滯留時(shí)間(MRT)為3.55 h,提示其在雞體內(nèi)消除較快;曲線(xiàn)下面積(AUC)為 0.13 μg·h/mL,生物利用度為 0.4%,表明其吸收極少。靜脈注射六氫β-酸月桂酸酯(1 mg/kg體重)后,5 min的血藥濃度平均值為0.99 μg/mL,顯著高于灌胃給藥;血漿中平均消除半衰期(T1/2)為 1.10 h,平均滯留時(shí)間(MRT)為 1.27 h,消除較快;曲線(xiàn)下面積(AUC)為 0.82 μg·h/mL。

        表1 雞單劑量給藥后的六氫β-酸月桂酸酯體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(n=6)

        3 結(jié)論

        研究結(jié)果表明,雞口服六氫β-酸月桂酸酯后吸收量極少,生物利用度僅為0.4%;靜脈注射后血藥濃度較高,消除半衰期均較短。因此動(dòng)物腸道內(nèi)能維持很高的活性分子濃度,有利于腸道抗菌。

        本試驗(yàn)建立的血漿中六氫β-酸月桂酸酯檢測(cè)方法,靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,所得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為該產(chǎn)品的應(yīng)用和殘留研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

        [1]彭險(xiǎn)峰,覃宗華.六氫β-酸單酯、內(nèi)絡(luò)鹽或單酯鹽及其作為動(dòng)物飼料添加劑的應(yīng)用[P]. 中國(guó)專(zhuān)利 :103739487,A 30-17,2014-04-23.2013107456773.■

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