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        高效液相色譜法測定8 個(gè)彩色馬鈴薯品種中花青素種類和含量

        2015-10-18 06:26:21殷麗琴彭云強(qiáng)付紹紅韋獻(xiàn)雅牛應(yīng)澤
        食品科學(xué) 2015年18期
        關(guān)鍵詞:錦葵矮牽牛天竺葵

        殷麗琴,彭云強(qiáng),鐘 成,付紹紅,楊 進(jìn),黃 敏,余 勤,韋獻(xiàn)雅,牛應(yīng)澤,*

        (1.成都市農(nóng)林科學(xué)院作物研究所,四川 成都 611130;2.中化化肥有限公司西南分公司,四川 成都 610100;3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,四川 成都 611130)

        高效液相色譜法測定8 個(gè)彩色馬鈴薯品種中花青素種類和含量

        殷麗琴1,彭云強(qiáng)1,鐘 成2,付紹紅1,楊 進(jìn)1,黃 敏1,余 勤1,韋獻(xiàn)雅3,牛應(yīng)澤3,*

        (1.成都市農(nóng)林科學(xué)院作物研究所,四川 成都 611130;2.中化化肥有限公司西南分公司,四川 成都 610100;3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,四川 成都 611130)

        采用高效液相色譜法,以表皮和薯肉為研究對(duì)象,定量分析8 個(gè)彩色馬鈴薯品種塊莖中花青素的種類和含量。研究發(fā)現(xiàn),彩色馬鈴薯塊莖中最多含有6 種花青素,即飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥色素和錦葵色素。紫色馬鈴薯塊莖中主要花青素為矮牽牛色素、芍藥色素和錦葵色素,紅色馬鈴薯塊莖中主要花青素是天竺葵色素和芍藥色素。飛燕草色素和芍藥色素廣泛存在于彩色馬鈴薯(紫色和紅色)塊莖的表皮中,而紅色馬鈴薯塊莖中未檢測到錦葵色素。品種之間差異顯著(P<0.05),其中紫云1號(hào)的總花青素含量最高。塊莖表皮的花青素含量約是薯肉的6~176 倍,且大部分品種的表皮花青素種類比薯肉多。彩色馬鈴薯塊莖的表皮富含豐富的花青素,是天然色素和抗氧化劑的重要來源。

        彩色馬鈴薯;高效液相色譜法;花青素;表皮;薯肉

        2015年初馬鈴薯主糧化發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)提出讓馬鈴薯逐漸成為水稻、小麥、玉米之后的我國第4大主糧作物[1]。馬鈴薯產(chǎn)量高、栽培范圍廣、生產(chǎn)成本低、生育期短、營養(yǎng)豐富[2],其中彩色馬鈴薯含有大量的花色苷,是重要的天然色素和抗氧化劑的來源[3-5],越來越受到人們的喜愛。馬鈴薯表皮含有較高的花色苷等酚類物質(zhì),一般是加工過程中的廢料,目前生產(chǎn)上可用于生產(chǎn)天然色素和抗氧化劑,提高馬鈴薯的利用率[3]。

        花色苷是一種廣泛存在于植物中的水溶性色素,屬于類黃酮多酚類化合物,是由花青素在自然條件下與多種糖形成的糖苷[6]。目前已知的花青素有20多種,食品中主要有6 種即天竺葵色素、矢車菊色素、飛燕草色素、芍藥色素、矮牽牛色素和錦葵色素[7]。研究[8-9]發(fā)現(xiàn)天竺葵色素呈現(xiàn)磚紅色,矢車菊素及芍藥花色素表現(xiàn)為紫紅色,而飛燕草素、矮牽牛色素及錦葵色素表現(xiàn)為藍(lán)紫色系。

        大量研究表明彩色馬鈴薯花色苷是一類含單一?;痯-香豆酸或阿魏酸或咖啡酸的3-鼠李糖-葡萄糖苷-5-葡萄糖苷衍生物[10-12]。Jansen等[13]發(fā)現(xiàn)表皮花色苷含量顯著高于薯肉花色苷含量,且塊莖貯藏135 d后花色苷含量無明顯變化。關(guān)于彩色馬鈴薯花青素的研究中國外較多而國內(nèi)較少,且絕大部分是以馬鈴薯肉為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,很少有探究表皮花青素組分。Lewis等[14]發(fā)現(xiàn)紫色馬鈴薯富含矮牽牛色素和錦葵色素,而紅色馬鈴薯富含天竺葵色素和少量芍藥色素。Rodriguez-Saona等[15]發(fā)現(xiàn)紅色馬鈴薯材料主要花青素為天竺葵色素。Brown等[16]研究發(fā)現(xiàn)紅色馬鈴薯主要花青素為天竺葵色素,紫色馬鈴薯主要花青素為錦葵色素、矮牽牛色素、芍藥色素和飛燕草色素。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法,以8 個(gè)彩色馬鈴薯品種為材料,同時(shí)以表皮和薯肉為研究對(duì)象,分析其花青素的組成譜,為評(píng)價(jià)彩色馬鈴薯色素含量、探究花青素積累模式和提高馬鈴薯利用率等提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1材料與試劑

        供試的彩色馬鈴薯分為紫云1號(hào)、云薯303、S03-2685、S06-1693、S05-603、紅云1號(hào)、云薯603和S06-277,其中紫云1號(hào)、云薯303、S03-2685、S06-1693和S05-603塊莖的顏色呈紫色系,紅云1號(hào)、云薯603和S06-277塊莖的顏色呈紅色系,均由云南省農(nóng)科院惠贈(zèng)。材料于2012年9月中旬種植在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)基地,待完全成熟后收獲,隨即進(jìn)行色素提取。

        鹽酸、乙醇、氯化鉀、醋酸鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、氯化鈉 四川瑞進(jìn)特化工公司;乙腈(色譜純)美國Fisher Scientific公司;甲酸(色譜純) 比利時(shí)Acros Organics公司;錦葵色素、矢車菊色素、天竺葵色素、飛燕草色素、芍藥色素和矮牽牛色素標(biāo)準(zhǔn)品 德國PhytoLab公司。

        1.2儀器與設(shè)備

        Bs201s電子天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司;KQ-100 TDE型高頻率數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲波儀器有限公司;SORVALL Stratos冷凍型高速臺(tái)式離心機(jī)美國Thermo Fisher公司;1200 Series HPLC儀(包括可變波長檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱) 美國Agilent公司。

        1.3方法

        1.3.1花色苷的提取

        從每個(gè)品種中選擇具有代表性的馬鈴薯塊莖各5 個(gè),用自來水清洗干凈,在空氣中自然晾干,用水果刀分離表皮(1~2 mm)和薯肉。分別混合表皮和薯肉至均勻,采用四分法各取0.5 g表皮和0.5 g薯肉。花色苷的提取參照殷麗琴等[17]的方法,按料液比1∶30(g/mL)加15 mL 95%乙醇-1.5 mol/L鹽酸(85∶15,V/V)提取液,放入研缽中加液氮后搗碎,45 ℃、100 W超聲波處理30 min,5 000 r/min離心5 min,吸取上清液;利用濾渣重復(fù)提取1 次,將2 次的提取液合并。

        1.3.2花色苷水解

        花色苷的水解參考郭靈安等[18]方法,略做修改。取3 份花色苷提取液,加入1 份濃鹽酸,在90 ℃條件下水浴40 min后放在冰盒上冷卻,使花色苷在強(qiáng)酸環(huán)境中充分水解成花青素。水解后的溶液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后用于HPLC分析。

        1.3.3HPLC分析

        分別精確稱取花青素標(biāo)準(zhǔn)品1 mg溶解于10 mL溶劑(提取液-濃鹽酸,3∶1,V/V)中,配制成100 μg/mL的儲(chǔ)備液,再分別稀釋成1、5、10、15、20、25 μg/mL的工作液。

        HPLC分析條件:ZorbaxEclipes XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);柱溫30 ℃;流速0.8 mL/min;進(jìn)樣量20 μL;檢測波長520 nm;流動(dòng)相A為0.5%甲酸,流動(dòng)相B為乙腈,采用梯度洗脫方式,0~3 min內(nèi),流動(dòng)相B的比例由12%上升到15%;3~25 min,流動(dòng)相B的比例由15%上升到25%。

        1.4數(shù)據(jù)分析

        采用Microsoft Excel 2007軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行常規(guī)整理,運(yùn)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行多重比較和相關(guān)分析,采用峰面積歸一化法計(jì)算花青素含量[19],以鮮質(zhì)量計(jì)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線

        表1 花青素標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線Table 1 Standard curves of anthocyanin standards

        分別以6 個(gè)花青素標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,各標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均達(dá)到了0.999,說明花青素質(zhì)量濃度與峰面積的線性相關(guān)性較好。4 min之前出的峰為溶劑峰?;ㄇ嗨貥?biāo)準(zhǔn)品的名稱、出峰時(shí)間、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍見表1,液相色譜圖見圖1。

        圖1 6 種花青素標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of mixture of six anthocyanin standards

        2.2表皮花青素種類和含量

        從表2可知,彩色馬鈴薯塊莖的表皮中存在4~6 種花青素,品種之間存在差異。紫云1號(hào)(圖2A)、云薯303和S03-2685的表皮中檢測到6 種花青素,分別是飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥色素和錦葵色素。紅云1號(hào)(圖2B)和云薯603的表皮中有5 種花青素,二者均不含有錦葵色素;S06-1693的表皮也有5 種花青素,但沒有天竺葵色素。另外,S05-603和S06-277的表皮中檢測到4 種花青素,前者不含矢車菊色素和天竺葵色素,后者則不含矮牽牛色素和錦葵色素。

        從花青素含量上看,紫云1號(hào)、云薯303和S03-2685表皮的矮牽牛色素含量最高,分別占了各自總花青素含量的66.05%、65.99%和65.78%,其次是芍藥色素,分別占了21.20%、20.28%和19.00%,第3是錦葵色素,其他3 種色素含量很少。雖然這3 個(gè)品種的總花青素含量差異加大,但它們的花青素組成卻很相似,主要花青素均為矮牽牛色素、芍藥色素和錦葵色素,分別占了各自總花青素含量的95.33%、97.29%和95.58%。S06-1693和S05-603的表皮中含量最高花青素的也是矮牽牛色素,分別占各自總花青素含量的85.76%和88.94%;其次是錦葵色素;飛燕草色素和芍藥色素所占比例較小,均在1%左右;S06-1693的總花青素含量約是S05-603的5 倍。紅云1號(hào)、云薯603和S06-277的表皮中占優(yōu)勢地位的花青素是天竺葵色素,分別占總花青素含量的88.10%、92.30%和91.51%;3 個(gè)品種中含量第2高的均為芍藥色素,分別占9.45%、5.90%和6.15%;天竺葵色素和芍藥色素是紅云1號(hào)、云薯603和S06-277表皮的主要花青素,共占各自總花青素含量的97.55%、98.20%和97.66%。

        8 個(gè)彩色馬鈴薯品種的塊莖表皮中均含有飛燕草色素和芍藥色素,但飛燕草色素含量非常低,品種間變化范圍為0.49~2.48 mg/100 g,僅占總花青素含量的0.43%~1.28%,S06-1693表皮中飛燕草色素含量最高。芍藥色素含量相對(duì)高些,品種間變化范圍為0.56~56.97 mg/100 g,占總花青素含量的1.01%~21.20%,紫云1號(hào)表皮的芍藥色素含量最高。彩色馬鈴薯塊莖表皮的矢車菊色素含量也較低,品種間變化范圍為0~2.87 mg/100 g,所占比例為0~2.68%,紫云1號(hào)表皮的矢車菊色素含量最高。矮牽牛色素是紫云1號(hào)、云薯303、S03-2685、S06-1693和S05-603塊莖表皮中占有優(yōu)勢地位的花青素;其變化幅度較大,含量變化范圍為0~177.50 mg/100 g,所占比例變化范圍為0~88.94%。天竺葵色素是紅云1號(hào)、云薯603和S06-277的優(yōu)勢花青素;品種間含量變化范圍為0~143.05 mg/100 g,所占比例變化范圍為0%~92.30%。錦葵色素品種間的變化范圍為0~28.61 mg/100 g,其中顏色呈現(xiàn)紅色色系的紅云1號(hào)、云薯603和S06-277中未檢測到任何錦葵色素。從總花青素含量看,品種間差異達(dá)顯著水平(P<0.05),紫云1號(hào)的表皮花色苷含量最高(268.76 mg/100 g),其次是S06-1693,最低的是S05-603(45.59 mg/100 g)。

        表2 不同彩色馬鈴薯品種的表皮花青素種類、含量和比例Table 2 Anthocyanin composition of the skin of pigmented potato tubers from different cultivars

        表3 不同彩色馬鈴薯品種的薯肉花青素種類、含量和比例Table 3 Anthocyanin composition of the fl esh of pigmented potato tubers from different cultivars

        圖2 紫云1號(hào)(A)和紅云1號(hào)(B)塊莖表皮的花青素HPLCC圖譜Fig.2 HPLC chromatograms of the tuber skin of cultivar Ziyun No.1 (A)and Hongyun No.1 (B)

        2.3薯肉花青素種類和含量

        從表3可知,彩色馬鈴薯塊莖的薯肉中也檢測到6 種花青素,分別是飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥色素和錦葵色素,不過花青素的含量和種類卻較表皮少。紫云1號(hào)的薯肉同樣含有6 種花青素。紅云1號(hào)的薯肉中有4 種花青素,不含飛燕草色素和錦葵色素。S06-1693的薯肉含有3 種花青素,分別是飛燕草色素、矮牽牛色素和錦葵色素。S03-2685的薯肉中檢測到矮牽牛色素和芍藥色素2 種花青素。云薯303和S05-603的薯肉中只檢測到矮牽牛色素;云薯603和S06-277的薯肉只檢測到天竺葵色素。

        從花青素含量上看,薯肉中每種花青素均比表皮的低。紫云1號(hào)薯肉中矮牽牛色素含量最高,占63.04%;其次是芍藥色素,占20.87%;再次是錦葵色素;3 種花青素共占總花青素含量的90.99%。紫云1號(hào)表皮和薯肉的花青素組成很相似。紅云1號(hào)薯肉的天竺葵色素占82.00%,芍藥色素占8.58%,矢車菊色素和矮牽牛色素各占4%左右,其主要花青素為天竺葵色素和芍藥色素。S06-1693薯肉中含量最高的是矮牽牛色素,占89.49%,其次是錦葵色素。

        不同品種間的薯肉總花青素含量也達(dá)到差異顯著水平(P<0.05),變化范圍為0.72~43.38 mg/100 g,其中紫云1號(hào)(43.38 mg/100 g)的最高,紅云1號(hào)次之,云薯303(0.72 mg/100 g)最低。雖然薯肉中的總花青素含量比表皮低,但就同一品種而言,表皮和薯肉中的主要花青素相同。

        2.4表皮和薯肉總花青素含量的比較

        圖3 彩色馬鈴薯塊莖表皮和薯肉總花青素含量的相關(guān)分析Fig.3 Correlation analysis of total anthocyanidin content between the skin and fl esh of pigmented potato

        表4 彩色馬鈴薯塊莖的表皮總花青素含量與薯肉總花青素含量的比值Table 4 The ratios of anthocyanidin content between the skin and fl esh of pigmented potato tuber

        從表4可知,彩色馬鈴薯塊莖表皮的總花青素含量是薯肉的6.20~175.60 倍,變化幅度較大,這可能和花青素在表皮和薯肉上分布不均勻有關(guān)。Mendel[20]發(fā)現(xiàn)多酚類物質(zhì)首先在馬鈴薯塊莖的表皮累積,再慢慢向內(nèi)滲透,因而表皮的花青素要比薯肉中多。前人研究還發(fā)現(xiàn)彩色馬鈴薯塊莖的表皮為彩色時(shí),薯肉不一定是彩色;且表皮著色均勻,薯肉著色常呈現(xiàn)多樣化,有的全部著色、有的部分著色,從而形成了彩色的斑點(diǎn)、弧、環(huán)或輻射狀等[21]。

        對(duì)表皮和薯肉中的總花青素含量進(jìn)行相關(guān)分析(圖3),結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者呈顯著正相關(guān)(P<0.05),相關(guān)系數(shù)為0.795,即表皮花青素含量越高,對(duì)應(yīng)的薯肉花青素含量也越高。

        3 結(jié) 論

        本實(shí)驗(yàn)采取HPLC法定量分析彩色馬鈴薯塊莖的表皮和薯肉中花青素組成。結(jié)果發(fā)現(xiàn)彩色馬鈴薯塊莖中最多含有6 種花青素,分別是飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥色素和錦葵色素,這與Lachman等[22]的研究結(jié)果相符合。品種間的花青素種類和含量存在一定差異,紫云1號(hào)的表皮和薯肉花青素含量最高。表皮的花青素含量均比薯肉高,且絕大數(shù)品種的表皮花青素種類比薯肉的多。

        HPLC法得到的塊莖總花青素含量與pH值示差法得到的總花色苷含量相關(guān)性極顯著(P<0.01),花青素含量高,則花色苷含量高。彩色馬鈴薯塊莖的表皮含有豐富的花青素,且種類較多,可作為天然色素和抗氧化劑的重要來源。

        研究[23-24]還發(fā)現(xiàn),紫色馬鈴薯塊莖中主要花青素是矮牽牛色素、芍藥色素和錦葵色素,其中矮牽牛色素含量最高;紅色馬鈴薯塊莖中主要花青素是天竺葵色素和芍藥色素,其中天竺葵色素占絕大優(yōu)勢,這和前人的研究結(jié)果類似。本研究還發(fā)現(xiàn)紅色馬鈴薯中不含錦葵色素,可能是缺少相關(guān)色素合成酶或基因。此外,飛燕草色素和芍藥色素廣泛存在于彩色馬鈴薯(紫色和紅色)塊莖的表皮中,但飛燕草色素的含量普遍偏低,這和花青素的合成途徑有關(guān),飛燕草色素在類黃酮3,5-糖苷轉(zhuǎn)移酶和轉(zhuǎn)甲基酶的作用下生成矮牽牛色素,矮牽牛色素在轉(zhuǎn)甲基酶的作用下生成錦葵色素[25],因此可能是大部分的飛燕草色素被轉(zhuǎn)化成矮牽牛色素和/或錦葵色素。

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        Determination of Anthocyanidin Composition of Different Pigmented Potato (Solanum tuberosum L.) Cultivars by HPLC

        YIN Liqin1, PENG Yunqiang1, ZHONG Cheng2, FU Shaohong1, YANG Jin1, HUANG Min1, YU Qin1, WEI Xianya3, NIU Yingze3,*
        (1. Crop Research Institute, Chengdu Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Chengdu 611130, China;2. Sinochem Fertilizer Co. Ltd., Southwest Branch, Chengdu 610100, China;3. College of Agronomy, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China)

        The anthocyanidin composition of the tuber of eight pigmented potato cultivars was analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). Results showed that pigmented potato tubers contained up to six anthocyanidins, namely,delphinidin, cyanidin, petunidin, pelargonidin, peonidin and malvidin. Petunidin, peonidin and malvidin were the dominant anthocyanidins in purple-colored potatoes, while pelargonidin and peonidin were the main anthocyanidins in red-colored potatoes. Delphinidin and peonidin were widely found in the skin of pigmented potato tuber. No malvidin was detected in red-colored potatoes. Signifi cant differences in anthocyanidin content exited among potato cultivars, among which, Ziyun No.1 had the highest content of anthocyanidin. Anthocyanidin contents in the skin were 6 to 176 times higher than in the fl esh. The number of anthocyanidins detected in the skin of most potato cultivars was greater than in the fl esh. In conclusion,pigmented potato skin, an important source of natural pigments and antioxidants, is rich in anthocyanidins.

        pigmented potato; high performance liquid chromatography (HPLC); anthocyanidin; skin; fl esh

        S532

        A

        1002-6630(2015)18-0143-05

        10.7506/spkx1002-6630-201518026

        2015-01-27

        四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目(12CGZHZX0712);四川省教育廳重點(diǎn)科技項(xiàng)目(11LD018)

        殷麗琴(1990—),女,實(shí)習(xí)研究員,碩士,研究方向?yàn)樽魑镞z傳育種。E-mail:yinlq1118@163.com

        牛應(yīng)澤(1955—),男,教授,博士,研究方向?yàn)樽魑镞z傳育種。E-mail:niuyz01@126.com

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