包同力嘎， 魏成喜

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古　通遼　028007）

給喜古納三味湯散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

包同力嘎， 魏成喜

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古通遼028007）

目的 建立蒙藥給喜古納三味湯散（大黃、堿面、訶子）的定性鑒別與成分定量測(cè)定項(xiàng)目。方法 采用薄層色譜法（TLC）對(duì)大黃、訶子進(jìn)行鑒別；顯微鑒別法對(duì)大黃、面堿、訶子進(jìn)行鑒別研究；高效液相色譜法（HPLC）對(duì)大黃所含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚進(jìn)行定量測(cè)定研究。結(jié)果 薄層色譜中各味藥的特征斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)；顯微鑒別中大黃、面堿、訶子的顯微特征典型，重復(fù)性好；定量測(cè)定方法中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的平均回收率依次為97.4%（RSD=0.5%）、98.8%（RSD=0.8%）、98.0%（RSD=1.0%）、99.2%（RSD=0.4%）、98.2%（RSD=1.5%）。結(jié)論 上述方法重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

給喜古納三味湯散；TLC；顯微鑒別法；蘆薈大黃素；大黃酸；大黃素；大黃酚；大黃素甲醚；HPLC

給喜古納三味湯散是蒙醫(yī)臨床常用煮散劑，由大黃、堿面、訶子三味藥組成。具有清熱，緩瀉功能；主要用于大便干燥，胃脹，腹痛，閉經(jīng)等癥。臨床療效良好［1］。記載于《內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)》（1984年版），尚無(wú)鑒別及成分定量測(cè)定項(xiàng)目，故本實(shí)驗(yàn)采用TLC法及顯微鑒別法對(duì)處方中的大黃等藥味進(jìn)行鑒別，同時(shí)應(yīng)用HPLC法對(duì)其君藥大黃所含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚進(jìn)行了測(cè)定，為有效控制該藥的質(zhì)量提供準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)方法。

1　儀器與材料

GoodLooK-1000型全自動(dòng)薄層色譜成像系統(tǒng)；MODEL ECLIPSE E200顯微圖像成像系統(tǒng)（日本尼康公司）；LC-10AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；SPD-10AVP檢測(cè)器（日本島津公司）；N3000色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息研究所），KQ-100超聲波清洗器；ADW220D型電子分析天平（日本島津公司）；Dimaonsil-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm，迪馬公司）；定量毛細(xì)管（美國(guó)Drummond）。

蒙藥給喜古納三味湯散分別由烏蘭浩特中蒙制藥有限公司（批號(hào)130122）、內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室（批號(hào)121126）、內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司（批號(hào)121219）提供。蘆薈大黃素（批號(hào)110795-200504）、大黃酸（批號(hào)0757-200206）、大黃素（批號(hào)110756-200110）、大黃酚（批號(hào)110796-2003309）、大黃素甲醚（批號(hào)110758-200509），均為供含量測(cè)定用；大黃對(duì)照藥材（批號(hào)121249-200402），訶子對(duì)照藥材（批號(hào)121015-200503）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。硅膠G（薄層色譜用）購(gòu)自青島海洋化工有限公司；甲醇為色譜純；水為高純水；所用試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別［2］

2.1.1大黃的鑒別 取本品0.3 g，缺大黃陰性樣品0.2 g，分別加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?%鹽酸和三氯甲烷10 mL，超聲處理30 min，濾液用三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，正己烷-乙酸乙酯-甲酸（24∶4∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，缺大黃陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.2訶子的鑒別 取本品1.5 g，缺訶子陰性樣品1.0 g，分別加無(wú)水乙醇30 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液和缺訶子陰性樣品溶液。另取訶子對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，甲苯-冰醋酸-水（12∶10∶0.4）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴3%三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與訶子對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺訶子陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1　大黃的TLC色譜圖Fig.1 TLC chrom atogram of Rhei Radix et Rhizoma

圖2　訶子的TLC色譜圖Fig.2 TLC chrom atogram of Chebulae Fructus

2.2顯微鑒別［3-4］本品為淺黃色粉末，置顯微鏡下觀察。草酸鈣簇晶較多，大小不一，一般較大，直徑20～108μm，棱角大多寬而尖小，長(zhǎng)短參差不齊，有的邊緣棱角不清晰，有的簇晶呈不規(guī)則矩圓形或長(zhǎng)方形，也有一邊較平截（大黃）；石細(xì)胞，較多，成片，淡黃色，呈類長(zhǎng)方形、類多角形、類三角形、長(zhǎng)方形或不規(guī)則形，有的略分支或一端稍尖突，直徑15～60μm，壁厚2～6μm，孔溝細(xì)密而清晰（訶子）；淺黃色或無(wú)色顆粒狀透明、半透明聚合體或透明結(jié)晶塊狀物，有順直紋理（面堿）。結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3　給喜古納三味湯散的顯微特征Fig.3 Geixiguna Powder m icroscopic characteristic figures

2.3蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的測(cè)定

2.3.1色譜條件 Dimaonsil-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.3%磷酸溶液（80∶20）；體積流量1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL［5-10］。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚適量，分別置量瓶中，加甲醇溶解、搖勻，分別制成468、814、422、512、252μg/mL的對(duì)照品貯備液。再分別精密吸取上述對(duì)照品溶液適量置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得每1mL中含蘆薈大黃素46.8μg、大黃酸40.7μg、大黃素42.2μg、大黃酚102.4μg、大黃素甲醚25.2μg的混合對(duì)照品溶液。

2.3.3供試品溶液的制備 取給喜古納三味湯散約1.6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5 mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10 mL，超聲2 min，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4陰性樣品溶液的制備 取缺大黃陰性樣品約1.0 g，照供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.3.5考察線性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。并以蘆薈大黃素（1）、大黃酸（2）、大黃素（3）、大黃酚（4）、大黃素甲醚（5）的峰面積值（y）分別對(duì)其相應(yīng)的進(jìn)樣量（x）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程依次為：y1=1.859× 106x1-1.667×104，r=0.999 8；y2=2.289× 106x2-1.261×104，r=0.999 7；y3=1.352× 106x3-1.367×104，r=0.999 8；y4=2.781× 106x4-6.076×103，r=0.999 8；y5=3.161× 106x5-6.849×103，r=0.999 7。結(jié)果表明，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚分別在0.117 0～0.702 0μg、0.101 8～0.610 5μg、0.105 5～0.633 0μg、0.256 0～1.536 0μg、0.063 0～0.378 0μg范圍內(nèi)，與其相應(yīng)的峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.3.6干擾試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺大黃陰性對(duì)照品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄各色譜圖。供試品溶液色譜圖中與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，分別呈現(xiàn)蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚吸收峰，而缺大黃陰性樣品溶液色譜圖中未見(jiàn)干擾色譜峰，結(jié)果見(jiàn)圖4。

2.3.7精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.3.3”項(xiàng)下的供試品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的RSD依次為0.9%、1.2%、1.0%、0.7%和1.9%，表明精密度良好。

圖4　HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms

2.3.8穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品（批號(hào)121219），按“2.3.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液6份，分別于0、2、4、6、8、10 h注入液相色譜儀，結(jié)果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的RSD依次為1.1%、0.8%、0.7%、1.0%和1.4%，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

2.3.9重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品約1.6 g，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液6份，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，結(jié)果RSD分別為蘆薈大黃素1.1%、大黃酸0.6%、大黃素1.4%、大黃酚0.8%和大黃素甲醚1.5%，表明該測(cè)定方法具有良好的重復(fù)性。

2.3.10回收率試驗(yàn) 取已知含有量的樣品（批號(hào)121219）約0.80 g，共6份，精密稱定，分別加入蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚貯備液2、1、2、3、2 mL，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.11樣品測(cè)定 分別取3批樣品約1.6 g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積值，計(jì)算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3　討論

3.1采用薄層色譜法對(duì)給喜古納三味湯散中大黃、訶子進(jìn)行鑒別研究，檢出大黃的特征斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰、重現(xiàn)性好；應(yīng)用顯微鑒別法對(duì)該處方中大黃、訶子、堿面進(jìn)行鑒別，分別檢出草酸鈣簇晶、石細(xì)胞、透明或半透明聚合體結(jié)晶塊狀物等細(xì)胞，上述顯微特征典型，重復(fù)性好。該方法可用于本制劑的鑒別研究。

表1　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests

表2　樣品測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of sample determ ination

3.2分別取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚甲醇溶液于200～400 nm處進(jìn)行掃描，結(jié)果表明5個(gè)成分分別在254 nm、258 nm、253 nm、256 nm、253 nm處有最大吸收，并且參考《中國(guó)藥典》2010年版一部大黃項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，故選擇254 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3參考《中國(guó)藥典》2010年版一部大黃項(xiàng)下的流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），結(jié)果蘆薈大黃素、大黃酸和大黃素甲醚等3個(gè)成分無(wú)法達(dá)到完全分離，經(jīng)調(diào)整流動(dòng)相為甲醇-0.3%磷酸溶液（80∶20）時(shí)上述成分可達(dá)到基線分離，故最終確定流動(dòng)相為甲醇-0.3%磷酸水溶液（80∶20），5個(gè)成分均達(dá)到完全分離，并且缺大黃陰性對(duì)照品溶液色譜圖“基本”無(wú)干擾色譜峰。

3.4在本實(shí)驗(yàn)所確定的色譜條件下，經(jīng)3批檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果表明，理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算均不低于3 000。準(zhǔn)確度試驗(yàn)（n=6），蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的平均回收率依次為97.4%（RSD=0.5%）、98.8%（RSD= 0.8%）、98.0%（RSD=1.0%）、99.2%（RSD= 0.4%）、98.2%（RSD=1.5%），表明該方法結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于給喜古納三味湯散藥品質(zhì)量的定量控制。

［1］ 內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)［S］.赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1984：260.

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Quality standard for M ongolian Geixiguna Powder

BAO Tong-li-ga， WEICheng-xi
（Inner Monggolia Uniυersity for Nationalities，Tongliao 028007，China）

Geixiguna Powder；TLC；microscopic identification；aloeemodin；rhein；emodin；chrysophanol；physcion；HPLC

R927.2

A

1001-1528（2015）03-0548-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.019

2014-04-10

包同力嘎（1969—），男，碩士，副主任藥師，主要從事蒙藥新藥研發(fā)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel：13947559878，E-mail：tonglaga688@163.com