黎波　龔向京　何虹材　況珊　楚瑞閣#

（1江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院南昌330006；2江西中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)碩士研究生南昌330004；3江西中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)碩士研究生南昌330004）

·論著·

右歸飲對(duì)去卵巢血管鈣化大鼠NMDAR1蛋白表達(dá)的影響*

黎波1龔向京1何虹材2況珊3楚瑞閣1#

（1江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院南昌330006；2江西中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)碩士研究生南昌330004；3江西中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)碩士研究生南昌330004）

目的：觀(guān)察右歸飲對(duì)去卵巢血管鈣化中谷氨酸受體變化的影響。方法：將40只遠(yuǎn)交群雌性大鼠（sprague dawley，SD）隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、低劑量組、高劑量組和辛伐他汀組，采用皮下注射華法令加維生素D3制備血管鈣化模型，造模后，低劑量組、高劑量組分別給予右歸飲濃縮液5.35 g/（kg·d）和16.05 g/（kg·d）灌胃，辛伐他汀組給予辛伐他汀混懸水溶液5.25 mg/（kg·d）灌胃，假手術(shù)組和模型組給予等量生理鹽水，共12周；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)采集血漿標(biāo)本測(cè)定雌二醇及血脂四項(xiàng)，采用蘇木精-伊紅染色法（HE染色）觀(guān)察動(dòng)脈鈣化的情況，并采用免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸受體（NMDAR，NR）1蛋白的表達(dá)。結(jié)果：模型組大鼠雌二醇、甘油三酯含量和NR1蛋白表達(dá)降低，P＜0.05，低密度脂蛋白升高，P＜0.05；高劑量組和低劑量組雌二醇、甘油三酯含量升高，NR1蛋白表達(dá)增加，P＜0.05；高劑量組、低劑量組和辛伐他汀組低密度脂蛋白的含量降低，P＜0.05；辛伐他汀組雌二醇無(wú)變化，P＞0.05。結(jié)論：右歸飲可抑制大鼠去卵巢血管鈣化的形成，可能與提高雌激素水平和NR1蛋白的表達(dá)有關(guān)。

血管鈣化；去卵巢；右歸飲；NMDAR1；蛋白表達(dá)

血管鈣化是指鈣磷在血管壁的異常沉積，常發(fā)生在血管內(nèi)膜和中膜層，是動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其發(fā)生機(jī)理與血管平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以及造血干細(xì)胞相互作用，激活內(nèi)皮損傷修復(fù)過(guò)程中相關(guān)骨形成相關(guān)信號(hào)有關(guān)，導(dǎo)致血管鈣化的發(fā)生，目前認(rèn)為血管鈣化是一個(gè)類(lèi)似于骨形成的主動(dòng)、可逆轉(zhuǎn)且可被調(diào)節(jié)的生物學(xué)過(guò)程［1～3］。在骨形成過(guò)程中，骨細(xì)胞通過(guò)谷氨酸信號(hào)介導(dǎo)類(lèi)似中樞神經(jīng)內(nèi)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)或抑制作用，在分子水平表現(xiàn)為“N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸受體”（N-methyl-D -aspartate Receptor，NMDAR，NR）的激活和鈣內(nèi)流，并介導(dǎo)增加和/或激活“突觸”后膜上或者相關(guān)聯(lián)系細(xì)胞的“α-氨基-3羥基-5甲基-4異惡唑受體”（Alpha-Amino-3-Hydroxy-5-Methyl-4-Isoxazolepropionic Acid Receptor，AMPAR），隨之增加受體的活性和谷氨酸介導(dǎo)的生理活性［4］。為了明確血管鈣化過(guò)程中谷氨酸信號(hào)中NR1的作用以及右歸飲對(duì)其的作用，本研究建立了去卵巢血管鈣化大鼠模型并以右歸飲干預(yù)，以明確NR1蛋白的表達(dá)情況以及相關(guān)指標(biāo)的變化?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無(wú)特定病原體（Specific pathogen Free，SPF）SD雌性大鼠40只，體重200～250 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003。

1.2試驗(yàn)藥物及制備右歸飲：熟地黃9 g，炒山藥6 g，山茱萸3 g，枸杞6 g，炙甘草6 g，杜仲6 g，肉桂6 g，制附子9 g，按要求制備成生藥濃度為1.594 g/ml的溶液，4℃保存?zhèn)溆茫?0%的華法令注射液：華法令（sigma，BJ121010351A，CAS號(hào)129-06-6），精密稱(chēng)取6 g華法令，加生理鹽水200 ml，混勻至清澈透明，密閉，4℃避光保存?zhèn)溆?；維生素K1注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字H41021051）；維生素D3注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字H31021259）；辛伐他汀片（國(guó)藥準(zhǔn)字H20083839）；辛伐他汀水溶液混懸劑的制備（濃度0.8 mg/ml）：稱(chēng)取羧甲基纖維素鈉2.5 g，另取注射用水250 ml置于500 ml燒杯中，逐步加入羧甲基纖維素鈉粉劑，放入磁力攪拌器攪拌90 min，若液體中有少許絮狀物，超聲處理10 min，使成透明溶液，另外將辛伐他汀片20片研細(xì)，置小燒杯中，加入注射用水20 ml，搖勻，將該容易加入羧甲基纖維素鈉溶液中，超聲處理10 min，使成白色均勻的混懸液，補(bǔ)足注射用水至500 ml，搖勻，密閉，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3試劑與儀器

1.3.1試劑NR1兔抗多克隆抗體（博士德生物，批號(hào)BA0612）100 KD；抗β-Actin鼠單克隆抗體（博士德生物）；SDS-PAGE凝膠配置試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)P0012A）。

1.3.2儀器均漿器，離心機(jī)，凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)UVP公司），全自動(dòng)顯微鏡系統(tǒng)（德國(guó)Leica公司）。

1.4模型制備將SD雌性大鼠雙側(cè)去卵巢，飼養(yǎng)1周后，參考文獻(xiàn)［5］制作血管鈣化模型，均給予維生素K115 mg/（kg·d），皮下注射至第6天；第3天開(kāi)始，血管鈣化模型組另給予皮下注射維生素D330× 105U/（kg·d）至試驗(yàn)第5天和背部皮下注射華法令注射液150 mg/kg，q12 h至第6天，試驗(yàn)第7天造模完成。

1.5動(dòng)物分組及處理將40只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、低劑量組、高劑量組和辛伐他汀組，每組8只。給藥劑量參照文獻(xiàn)［6］，造模結(jié)束后給予藥物干預(yù)，共12周，其中假手術(shù)組和模型組給予相同體積生理鹽水灌胃，1次/d；低劑量組和高劑量組給予右歸飲溶液，按低劑量5.35 g/（kg·d），高劑量組16.05 g/（kg·d）給予灌胃。辛伐他汀組給予辛伐他汀水溶液混懸劑5.25 mg/（kg·d）灌胃［7］。均于第12周后，給予2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉（40 mg/kg）后開(kāi)胸，心臟采血并獲取主動(dòng)脈到髂動(dòng)脈組織。

1.6觀(guān)察指標(biāo)及方法

1.6.1血清和血漿標(biāo)本的采集檢測(cè)雌二醇（E2）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL），由江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢測(cè)中心檢測(cè)。

1.6.2病理切片沿胸主動(dòng)脈上段同一部位取材約10 mm，置于10%多聚甲醛溶液中固定；石蠟包埋制成經(jīng)主動(dòng)脈橫徑的石蠟切片，連續(xù)切片4 μm厚，HE染色觀(guān)察主動(dòng)脈病變情況。

1.6.3免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)NR1蛋白的表達(dá)另取余下胸主動(dòng)脈髂動(dòng)脈組織，用PBS沖掉殘留在動(dòng)脈腔和表面的血液，迅速置于經(jīng)DEPC處理過(guò)的1.5 ml離心管中，凍存于-80℃的冰箱中，用于免疫印跡試驗(yàn)的檢測(cè)。按試劑盒要求提取蛋白并測(cè)定蛋白濃度之后，取相同份量的蛋白用7.5%SDS-PAGE凝膠電泳分離后，用電轉(zhuǎn)移法將蛋白質(zhì)從SDS-PAGE凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，再用5%的脫脂奶粉在冰箱中封閉2 h后，依次加兔抗鼠一抗及抗兔二抗，孵育洗滌后采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)相關(guān)蛋白。凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度值掃描分析，灰度比（GSR）=（測(cè)得NR1強(qiáng)度×面積）/（內(nèi)參蛋白β-Actin強(qiáng)度×面積），即NR1/actin灰度比值。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以（±s）表示，各組數(shù)據(jù)間的比較采用單因素方差分析。

2　結(jié)果

2.1各組動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變假手術(shù)組血管內(nèi)皮細(xì)胞連接緊密、完整，內(nèi)膜無(wú)增厚，中膜平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則，分布均勻，未見(jiàn)泡沫細(xì)胞、鈣化組織和軟骨樣組織；模型組血管大體可見(jiàn)整個(gè)主動(dòng)脈節(jié)段性分布鈣化灶，呈環(huán)形，質(zhì)地較脆硬，HE染色可見(jiàn)血管內(nèi)膜完整性消失，內(nèi)膜下可見(jiàn)多核細(xì)胞以及軟骨樣細(xì)胞呈現(xiàn)鋪路石樣或線(xiàn)狀排列，血管壁內(nèi)膜下組織變性多向管腔隆起，沿著血管壁散在分布數(shù)個(gè)成簇樣骨樣堆積，病灶部位中膜結(jié)構(gòu)消失，間有壞死物沉積，偶見(jiàn)病灶部位增殖性血管。右歸飲干預(yù)高、低劑量組均可見(jiàn)內(nèi)膜下少量多核細(xì)胞以及軟骨樣細(xì)胞呈現(xiàn)鋪路石樣或線(xiàn)狀排列，血管壁內(nèi)膜下組織變性明顯減少，可見(jiàn)少許成簇樣骨樣堆積物（1～2個(gè)），病灶部位中膜結(jié)構(gòu)扭曲或者擠壓，管腔隆起較少。而辛伐他汀組血管鈣化與模型組形態(tài)大體一致。

2.2各組大鼠血清雌二醇含量比較模型組雌二醇含量下降明顯，差異明顯，P＜0.05；高劑量組和低劑量組雌二醇的含量升高，糾正去卵巢后體內(nèi)雌二醇的含量，與模型組比較，差異明顯，P＜0.05；辛伐他汀組雌二醇含量并未升高，與模型組比較，無(wú)顯著性差異，P＞0.05。見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠血清雌二醇含量比較（pg/ml，±s）

表1　各組大鼠血清雌二醇含量比較（pg/ml，±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別n雌二醇假手術(shù)組模型組低劑量組高劑量組辛伐他汀組88888 762.29±283.35 235.04±89.32*430.91±87.08#*477.10±87.04#252.71±65.98*

2.3各組大鼠血清血脂含量比較模型組TG下降、LDL升高，與假手術(shù)組比較，具顯著差異，P＜0.05；高劑量組TG升高，P＜0.05；高劑量組、低劑量組以及辛伐他汀組LDL含量下降，P＜0.05；TC和HDL在各組含量比較無(wú)明顯差異，P＞0.05。見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠血清血脂含量比較（mmol/ml，±s）

表2　各組大鼠血清血脂含量比較（mmol/ml，±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別nTCTGLDLHDL假手術(shù)組模型組低劑量組高劑量組辛伐他汀組88888 2.36±0.59 2.15±0.28 1.90±0.31 1.97±0.47 1.88±0.26 2.06±0.85 1.19±0.35*1.25±0.66 1.96±0.26#1.53±0.80 1.41±0.41 1.97±0.59*1.09±0.37#1.25±0.37#0.93±0.29#*0.96±0.48 0.84±0.37 0.55±0.18 0.72±0.17 0.65±0.18

2.4各組大鼠動(dòng)脈硬化NR1蛋白表達(dá)比較模型組灰度明顯下降，提示NR1蛋白表達(dá)減低，有顯著差異，P＜0.01；高劑量組和低劑量組NR1蛋白表達(dá)升高，有顯著差異，P＜0.01。見(jiàn)表3。

表3　各組大鼠血管組織NR1蛋白GSR的比較（±s）

表3　各組大鼠血管組織NR1蛋白GSR的比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01。

組別nGSR假手術(shù)組模型組低劑量組高劑量組辛伐他汀組88888 0.235 2±0.024 6 0.060 8±0.003 8*0.112 2±0.007 6#*0.211 5±0.016 6#*0.057 0±0.004 6*

3　討論

在血管鈣化過(guò)程中，炎癥反應(yīng)、雌激素及血脂代謝等均影響其進(jìn)程，而谷氨酸信號(hào)又介導(dǎo)類(lèi)似中樞神經(jīng)內(nèi)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)或抑制作用，促使局部鈣磷沉積的擴(kuò)大化。谷氨酸受體（glutamate receptors，GluRs）可分為離子型谷氨酸受體和代謝性受體兩類(lèi)，其中NR屬于配體門(mén)控離子通道復(fù)合物，包括NR1、NR2A-2D和NR3三種亞型，均以異源性蛋白的多聚體形式存在［8］；NR激活可致Na+和Ca2+內(nèi)流，K+外流。NR屬于配體門(mén)控離子通道，是由不同的亞單位組成的四聚體或五聚體，編碼這些亞單位的基因?qū)?個(gè)家族：NR1、NR2（包括NR2A-D）和NR3（包括NR3A-B）。局部細(xì)胞NR是以NR1與一個(gè)或一個(gè)以上NR2和/或NR3亞基聚合的復(fù)合體。多受體亞基的復(fù)合體連同多種受體復(fù)合物成分并存的事實(shí)可以產(chǎn)生巨大谷氨酸受體功能多樣性，并允許單一激動(dòng)劑谷氨酸分別激活不同信號(hào)通路［9～11］，其中NR1是功能單位，NR2是調(diào)節(jié)單位。單獨(dú)的NR2或NR3不形成功能性受體，只能和NR1聚合形成功能性聚合物，由不同亞單位組成的受體往往表現(xiàn)出不同的生理和藥理學(xué)特性。NR主要是由NRl和NR2亞基構(gòu)成的四聚體復(fù)合物。NRl是NR受體的基本亞基，是實(shí)現(xiàn)通道的功能所必須的，NR2起輔助NR形成多元化結(jié)構(gòu)的作用。構(gòu)成NR的亞基組織成2個(gè)雙體（dimerofdimers），而受體的裝配主要由亞基的N-端決定。NR1、NR2a和NR2b可以組成同源二聚體，這種同源二聚體也存在于由NR1和NR2構(gòu)成的雜合NR中［12～13］。

對(duì)于血管鈣化過(guò)程中谷氨酸信號(hào)的研究極少，最初的工作只是表明腦血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞表達(dá)有代謝型谷氨酸受體的表達(dá)［14～15］，進(jìn)一步研究證明腦血管內(nèi)皮細(xì)胞不但表達(dá)有Ⅰ型mGluR，而且具有抑制損傷引起的凋亡，通過(guò)mGluR維持膜不對(duì)稱(chēng)性抑制微血栓的形成［16～18］。另外，在腦膜微血管中存在mGluR1、mGluR2/3、mGluR4a、mGluR5和mGluR7［19］。本研究發(fā)現(xiàn)大鼠血管組織存在NR1的蛋白表達(dá)，在血管鈣化組織中其含量明顯降低，補(bǔ)腎中藥右歸飲可以提高血管鈣化模型大鼠NR1蛋白表達(dá)水平并同時(shí)提高血清雌二醇含量，而且提高甘油三酯水平接近正常（與模型組比較差異明顯），而辛伐他汀組既不能升高血清雌二醇含量，也不能改善NR1水平，但對(duì)低密度脂蛋白在低于正常水平時(shí)還進(jìn)一步降低其含量，說(shuō)明他汀類(lèi)藥物降脂具有單一方向性。這可能與右歸飲多重調(diào)節(jié)功能有關(guān)，而辛伐他汀只能單一降低血脂組份。

本研究觀(guān)察到去卵巢血管鈣化模型大鼠雌激素含量明顯下降，并伴有血清甘油三酯下降，與假手術(shù)組比較，P＜0.05，差異明顯，而膽固醇和低密度脂蛋白變化無(wú)差異。說(shuō)明在此鈣化模型中血脂成分影響不大，而雌激素的下降可能充當(dāng)一定的角色；中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為“天癸”漸絕標(biāo)志著腎虛證形成，而腎陽(yáng)虛證涉及神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫和神經(jīng)-內(nèi)分泌-骨代謝兩大基因調(diào)控路線(xiàn)的紊亂［20］。女性原發(fā)性骨質(zhì)疏松患者雌激素依腎氣虛證、腎陰虛證、腎陽(yáng)虛證逐漸降低［21］，男性冠心病腎陽(yáng)虛證雌二醇明顯降低［22］，表明雌激素缺乏后所表現(xiàn)的骨質(zhì)疏松和冠心病等臨床證候與中醫(yī)的腎虛證密切相關(guān)。而雌激素缺乏可引起骨重建的偶聯(lián)失衡，進(jìn)而影響鈣化進(jìn)程，去卵巢大鼠可以在一定程度模擬雌激素缺乏的腎陽(yáng)虛證。文獻(xiàn)報(bào)道［23］補(bǔ)腎中藥可提高雌激素等性激素水平以及性腺雌激素受體含量［24～25］。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，去卵巢血管鈣化大鼠，雌激素水平下降明顯，而補(bǔ)腎中藥右歸飲可以提高雌二醇并改善NR1蛋白表達(dá)。提示右歸飲對(duì)于腎虛血管病變具有一定的作用，在一定程度上驗(yàn)證了腎主骨生髓的理論。眾所周知，雌激素缺乏會(huì)導(dǎo)致高代謝骨量丟失從而誘發(fā)骨質(zhì)疏松，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)雌激素缺乏大量并存血管鈣化的現(xiàn)象，并與冠心病相關(guān)［26］，這種現(xiàn)象尚不能用“骨生長(zhǎng)漂移學(xué)說(shuō)”合理解釋。因此，本實(shí)驗(yàn)推測(cè)，異位組織骨形成再現(xiàn)的血管鈣化，應(yīng)該存在一個(gè)更加精細(xì)的鈣沉積平衡紊亂的適應(yīng)性調(diào)節(jié)，這也許跟有谷氨酸信號(hào)通路中NR1聚合體的改變有關(guān)，這有待于進(jìn)一步的定位實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。

［1］Demer LL，Tintut Y.The leading edge of vascular calcification［J］. Trends Cardiovasc Med，2015，25（4）:275-277

［2］Abedin M，Tintut Y，Demer LL.Vascular calcification:mechanisms and clinical ramifications［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24（7）:1161-1170

［3］Hjortnaes J，Butcher J，F(xiàn)igueiredo JL，et al.Arterial and aortic valve calcification inversely correlates with osteoporotic bone remodelling: a role for inflammation［J］.Eur Heart J，2010，31（16）:1975-1984

［4］SpencerGJ，McGrathCJ，GeneverPG.Currentperspectiveson NMDA-type glutamate signalling in bone［J］.Int J Biochem Cell Biol，2007，39（6）:1089-1104

［5］李寰，武勝昔，賈國(guó)良，等.維生素D3和華法令誘導(dǎo)的大鼠動(dòng)脈鈣化模型特點(diǎn)［J］.中國(guó)臨床康復(fù)，2005，9（11）:120-122

［6］徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002.203-204

［7］盧維晟，王一塵，方根強(qiáng)，等.高鈣攝入和辛伐他汀對(duì)大鼠主動(dòng)脈和骨組織脂、鈣代謝的影響［J］.心臟雜志，2006，18（1）:43-47

［8］Dingledine R，Borges K，Bowie D，et al.The glutamate receptor ion channels［J］.Pharmacol Rev，1999，51（1）:7-61

［9］Chazot PL，Stephenson FA.Molecular dissection of native mammalian forebrain NMDA receptors containing the NR1 C2 exon:direct demonstration of NMDA receptors comprising NR1，NR2A，and NR2B subunits within the same complex［J］.J Neurochem，1997，69（5）:2138-2144

［10］Washburn MS，Numberger M，Zhang S，et al.Differential dependence on GluR2 expression of three characteristic features of AMPA receptors［J］.J Neurosci，1997，17（24）:9393-9406

［11］Zhang D，Sucher NJ，Lipton SA.Co-expression of AMPA/kainate receptor-operated channels with high and low Ca2+permeability in single rat retinal ganglion cells［J］.Neuroscience，1995，67（1）:177-188

［12］Al-Hallaq RA，Jarabek BR，F(xiàn)u Z，et al.Association of NR3A with the N-methyl-D-aspartate receptor NR1 and NR2 subunits［J］.Mol Pharmacol，2002，62（5）:1119-1127

［13］GascónS1，García-GalloM，RenartJ，etal.Endoplasmic reticulum-associated degradation of the NR1 but not the NR2 subunits of the N-methyl-D-aspartate receptor induced by inhibition of the N-glycosylation in cortical neurons［J］.J Neurosci Res，2007，85（8）:1713-1723

［14］Krizbai IA，Deli MA，Pestenacz A，et al.Expression of glutamate receptors on cultured cerebral endothelial cells［J］.J Neurosci Res，1998，54（6）:814-819

［15］Gill SS，Pulido OM，Mueller RW，et al.Immunochemical localization of the metabotropic glutamate receptors in the rat heart［J］.Brain Res Bull，1999，48（2）:143-146

［16］Chong ZZ，Kang JQ，Maiese K.Apaf-1，Bcl-xL，cytochrome c，and caspase-9 form the critical elements for cerebral vascular protection by erythropoietin［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2003，23（3）:320-330

［17］Lin SH，Maiese K.Group I metabotropic glutamate receptors prevent endothelial programmed cell death independent from MAP kinase p38 activation in rat［J］.Neurosci Lett，2001，298（3）:207-211

［18］Lin SH，Maiese K.The metabotropic glutamate receptor system protects against ischemic free radical programmed cell death in rat brain endothelial cells［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2001，21（3）: 262-275

［19］Gillard SE，Tzaferis J，Tsui HC，et al.Expression of metabotropic glutamate receptors in rat meningeal and brain microvasculature and choroid plexus［J］.J Comp Neurol，2003，461（3）:317-332

［20］沈自尹，黃建華，陳偉華.以藥測(cè)證對(duì)腎虛和腎陽(yáng)虛大鼠基因表達(dá)譜的比較研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，27（2）:135-137

［21］何成奇，謝薇，熊素芳，等.女性原發(fā)性骨質(zhì)疏松腎虛三證與性激素變化關(guān)系的臨床研究［J］.華西醫(yī)學(xué)，2003，18（1）:14-15

［22］丘瑞香，吳國(guó)珍.性激素對(duì)腎虛患者陰陽(yáng)平衡的調(diào)節(jié)作用［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1999，5（3）:46-47

［23］沈自尹，黃建華，陳偉華.以藥測(cè)證對(duì)腎虛和腎陽(yáng)虛大鼠基因表達(dá)譜的比較研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，27（2）:135-137

［24］張新民，沈自尹，王文健，等.補(bǔ)益中藥對(duì)老齡雄性大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)—性腺軸機(jī)能作用的研究［J］.上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，18（5）: 373-378

［25］邵敏，劉慶思，莊洪，等.補(bǔ)腎中藥對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠性激素影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，1999，5（4）:23-26

［26］Chen SJ，Lin CS，Lin CL，et al.Osteoporosis Is Associated With High Risk for Coronary Heart Disease:A Population-Based Cohort Study［J］.Medicine（Baltimore），2015，94（27）:e1146

Influence of Youguiyin on Expression of NMDAR1 Protein in the Vascular Calcification of Ovariectomized Rats

LI Bo1，GONG Xiang-jing1，HE Hong-cai2，KUANG Shan3，CHU Rui-ge1#
（1The Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang330006；2 2014 Master's Graduate of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang330004；3 2013 Master's Graduate of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang330004）

Objective:To observe the influence of Youguiyin on the changes of glutamate receptors in the vascular calcification of variectomized rats.Methods:Forty SD rats were allocated into the sham operation group，model group，low-dose group，high-dose group and simvastatin group.After the artery calcification models were established by subcutaneously injecting warfarin and vitamin D3，the low-dose group and high-dose group were gavaged with concentrated solution of Youguiyin by 5.35 g/（kg·d）and 16.05 g/（kg·d），the simvastatin group was gavaged with suspensions of simvastatin by 5.25 mg/（kg·d），and the sham operation group and model group were given equal amount of physiological saline，all for 12 weeks.At the end of the experiment，collected plasma samples for the determination of estradiol and serum lipids in four，observed the arterial calcification by hematoxylin and eosin staining method（HE staining），and used the immune blotting to detect the expression of N methyl D aspartic acid receptor（NMDAR，NR）1 protein.Results:The estradiol，triglyceride content and NR1 protein expression of the model group were decreased，P＜0.05，and the low density lipoprotein was elevated，P＜0.05.The estradiol，triglyceride content and NR1 protein expression of the high dose group and low dose group were decreased，P＜0.05. And in the high dose group，low dose group and simvastatin group，the low density lipoprotein content were decreased，P＜0.05.There was no change in the estradiol of the simvastatin group，P＞0.05.Conclusion:Youguiyin can inhibit the formation of vascular calcification in the ovariectomized rats；it may be related to the increases of the levels of estrogen and the expression of NR1 protein.

Vascular calcification；Ovariectomized；Youguiyin；NMDAR1；Protein expression

R363

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2015.12.001

2015-09-18）

江西省科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：20112BBG70033）；江西省自然科學(xué)基金（編號(hào)：20114BAB205082）

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