肖 望廖秀清劉燕君謝曉玲

1.廣東省東莞市太平人民醫(yī)院，廣東東莞 523905；2.廣東省第二人民醫(yī)院，廣東深圳 518001；3.廣州市番禺區(qū)靈山人民醫(yī)院，廣東廣州 511473

銀杏達(dá)莫注射液對(duì)急性肺損傷的實(shí)驗(yàn)及分析

肖 望1廖秀清2劉燕君2謝曉玲3

1.廣東省東莞市太平人民醫(yī)院，廣東東莞 523905；2.廣東省第二人民醫(yī)院，廣東深圳 518001；3.廣州市番禺區(qū)靈山人民醫(yī)院，廣東廣州 511473

目的 探討銀杏達(dá)莫注射液對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用。方法 健康家兔24只，采用完全隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，每組8只。觀察三組的MDA、SOD、肺干濕比、IL-10及TNF-a變化。結(jié)果 三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組SOD比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。三組肺干濕比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。三組IL-10比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 銀杏達(dá)莫注射液對(duì)急性肺損傷具有明顯的保護(hù)作用。

銀杏達(dá)莫注射液；急性肺損傷；保護(hù)作用

急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等打擊后常見(jiàn)的外科危急并發(fā)癥，死亡率極高，目前仍無(wú)十分有效的治療方法和藥物［1-2］。本項(xiàng)目通過(guò)建立急性肺損傷動(dòng)物模型，觀察銀杏達(dá)莫對(duì)組織形態(tài)學(xué)和生物學(xué)的影響，同時(shí)研究心率、呼吸、頻率、血?dú)夥治龊拖嚓P(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化［3］，探討銀杏達(dá)莫注射液對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用和可能機(jī)制，以期為ALI/ARDS的臨床治療提供一個(gè)可能的新途徑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

健康家兔24只，體重2.5～3.5kg，雌雄各半。采用完全隨機(jī)分3組：對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，每組8只。動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK2006007。三組動(dòng)物的體重、性別比等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 動(dòng)物造模

乙醚吸入麻醉至家兔軀體變軟，四肢活動(dòng)減少，家兔頭頸部后仰并以血管鉗向外輕拉家兔舌頭使口咽部充分暴露，以耳鏡快速置入家兔口腔并暴露其聲門，當(dāng)聲門打開(kāi)時(shí)迅速以注射軟管滴入LPS溶液（2mg/kg），豎立并左右晃動(dòng)家兔身體以使藥物在兩肺內(nèi)分布均勻每天1次，連續(xù)2d。

1.3 方法

術(shù)前禁食12h，所有動(dòng)物經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg），麻醉成功后，行頸動(dòng)脈置管，連接多導(dǎo)生理監(jiān)測(cè)儀，連續(xù)記錄心率、呼吸頻率等變化。實(shí)驗(yàn)組與模型組：耳緣靜脈緩慢推注油酸（0.1mL/kg），10min后靜脈注射生理鹽水30mL。對(duì)照組：耳緣靜脈注射生理鹽水30mL。

1.4 觀察指標(biāo)

記錄各組動(dòng)物在傷前和傷后1、2、3、4h的心率、呼吸頻率，并通過(guò)動(dòng)脈插管抽取血標(biāo)本，測(cè)定各時(shí)點(diǎn)血?dú)夥治鲋岛脱錞NF-a、IL-10。4h后處死動(dòng)物，取左肺下葉背段1cm×1cm×1cm大小肺組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。按Naokiis介紹的方法肺損傷進(jìn)行評(píng)分：把肺損傷程度分為5分：0=無(wú)損傷，1=輕度損傷，2=中度損傷，3=重度損傷，4=極重度損傷。在左下肺相同的部位取1g大小的肺組織做出勻漿液，用硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛含量和超氧化物歧化酶的活性；剩余肺組織稱重后置80℃烤箱，烘烤72h至恒重，計(jì)算肺濕/干（W/D）比。肺干濕比（W/D）=濕重/干重；肺系數(shù)=100×肺濕重/體重［4］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，方差齊時(shí)兩兩比較采用LSD聯(lián)合SNK法；計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 三組上清液中MDA檢測(cè)及SOD活性結(jié)果比較

三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組SOD比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 三組上清液中MDA檢測(cè)及SOD活性結(jié)果比較（± s）

表1 三組上清液中MDA檢測(cè)及SOD活性結(jié)果比較（± s）

組別　n　MDA（nmol/mL）　SOD（U/mL）對(duì)照組模型組實(shí)驗(yàn)組32.49±5.16 20.15±3.56 33.59±5.27 9.357＜0.05 8 8 8 F P 10.59±1.26 15.67±1.01 12.16±0.88 17.896＜0.05

2.2 三組肺干濕比比較

對(duì)照組肺干濕比為4.35±0.21，模型組為5.26±0.55，實(shí)驗(yàn)組為4.97±0.51，三組肺干濕比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.167，P＜0.05）。

2.3 三組血清TNF-a、IL-10比較

三組IL-10比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三組血清TNF-a、IL-10比較（± s）

表2 三組血清TNF-a、IL-10比較（± s）

組別　n　TNF-a（ng/L）　IL-10（pg/mL）對(duì)照組　8　 42.39±15.23模型組實(shí)驗(yàn)組8 8 F P 113.55±19.31 96.19±16.11 17.896＜0.05 8.31±1.58 10.15±2.07 8.97±1.67 1.597＞0.05

2.4 三組HE染色圖片

對(duì)照組：未見(jiàn)明顯改變，肺泡結(jié)構(gòu)多數(shù)保持完整，肺泡壁無(wú)水腫，肺間質(zhì)少見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組：肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞，肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。實(shí)驗(yàn)組：肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞，肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。與模型組相差不多。見(jiàn)圖1。

圖1 不同組肺組織HE染色圖片（×200）

3　討論

急性肺損傷（ALI）是由多種肺內(nèi)外致病因素引起的，以急性呼吸困難為主要臨床表現(xiàn)的全身炎癥反應(yīng)綜合征，其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，若不能得到及時(shí)有效的治療，往往會(huì)發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），甚至危及患者生命。至今ALI確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為除有些致病因素對(duì)肺泡膜的直接損傷外，更重要的是多種效應(yīng)細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨唾細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等在肺內(nèi)聚集、激活導(dǎo)致氧化應(yīng)激及TNF-a、IL-10等促炎介質(zhì)增加，使肺內(nèi)抗炎介質(zhì)增加，促發(fā)過(guò)度炎癥反應(yīng)，是ALI發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［5-6］。

銀杏達(dá)莫注射液含有雙嘧達(dá)莫和銀杏葉提取制劑，銀杏葉提取制劑有效成分為銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯，是具有多種藥理作用的血管擴(kuò)張劑。具有抑制血小板活化因子，防止血栓形成，擴(kuò)張毛細(xì)血管、增加組織血流量、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，抑制OFR對(duì)組織的損傷，降低血中膽固醇及改善微循環(huán)等作用。而銀杏內(nèi)酯是目前被認(rèn)為最有臨床應(yīng)用前景的天然PAF受體拮抗劑［7］。其可清除氧自由基，防止自由基對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷，抑制自由基誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡；雙嘧達(dá)莫可抑制血小板的第一相聚集和第二相聚集［8］，因而具有抗血栓形成作用，與銀杏內(nèi)酯聯(lián)合應(yīng)用能協(xié)同改善腦組織供血流量。而銀杏黃酮苷是氧自由基的捕捉劑和清除劑，參與清除超氧陰離子，抑制脂質(zhì)氧化反應(yīng)，從而起到保護(hù)腦細(xì)胞的作用［9-10］。

MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，測(cè)定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)受抑［11-12］。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來(lái)衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組SOD比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復(fù)雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下，IL-10含量在各組間并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤(rùn)，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對(duì)ALI起到了有效的保護(hù)作用。

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Experiment and analysis on ginkgo leaf extract and Dipyridamole injection for acute lung injury

XIAO Wang1LIAO Xiuqing2LIU Yanjun2XIE Xiaoling3
1.Taiping People's Hospital of Dongguan City，Dongguan 523905，China；2.Guangdong No.2 People's Hospital， Shenzhen 518001，China；3.Lingshan People's Hospital of Panyu District in Guangzhou City，Guangzhou 511473，China

Objective To explore the protective effect of Ginkgo Leaf Extract and Dipyridamole Injection on acute lung injury. Methods 24 healthy rabbits were randomly divided into 3 groups: control group，model group and experimental group，with 8 rats in each group.The MDA，SOD，lung wet/dry weight ratio，IL-10 and TNF-a changes of three groups were observed. Results There was significant difference in the MDA among the three groups （P＜0.05）；Compared with the other two groups，the SOD had statistically significant difference in model group（P＜ 0.05）.There was not significant difference in the SOD between the experimental group and the control group （P＞0.05）.The difference was statistically significant in the lung wet/dry weight ratio among the three groups （P＜0.05）.The difference was not statistically significant in the IL-10 among the three groups（P＞0.05）；The difference was statistically significant in the TNF-a among the three groups（P＜ 0.05）. Conclusion Ginkgo leaf extract and dipyridamole injection has significant protective effects on acute lung injury.

Ginkgo leaf extract and dipyridamole injection；Acute lung injury；Protective effect

R541.5

A

2095-0616（2014）06-27-03

2014-01-14）

廣東省中醫(yī)藥局科研課題（20112071）。