王奕璇， 馬紅燕*， 張向亮， 王 杰， 高春燕

(延安大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院,分析化學(xué)研究所，陜西延安 716000)

多潘立酮是一種合成的苯丙咪唑類衍生物，為外周多巴胺受體阻滯劑，臨床主要用于治療功能性消化不良[1]。目前，用于測定多潘立酮含量的主要有：分光光度法[2]、高效液相色譜法[3]、陽極微分脈沖伏安法[4]和熒光光度法[5]等方法?；瘜W(xué)發(fā)光分析法用于多潘立酮含量測定也有研究[6]，而利用納米粒子催化化學(xué)發(fā)光法測定其含量的研究尚未見報道。

納米銀(Silver Nanoparticles，AgNPs)具有獨(dú)特的物理和化學(xué)性能，從而使其在許多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。在納米粒子參與的化學(xué)發(fā)光體系中，由于銀的氧化還原電勢要比金和鉑低，因此銀具有更好的化學(xué)反應(yīng)活性[7]，一些體系中AgNPs對化學(xué)發(fā)光體系的催化能力強(qiáng)于AuNPs與PtNPs。AgNPs催化的Luminol-H2O2體系[7]、Ce(Ⅳ)-Na2SO3體系[8]、Luminol-K3Fe(CN)6體系[9]、MnO4-Br-體系[10]均已見文獻(xiàn)報道。本實(shí)驗(yàn)研究了AgNPs對Luminol-KMnO4體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。研究發(fā)現(xiàn)，適量AgNPs的存在能增強(qiáng)Luminol-KMnO4體系化學(xué)發(fā)光信號，而多潘立酮對該增敏體系的發(fā)光信號具有明顯的抑制作用，抑制化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度信號比值(I0/I)與多潘立酮的加入量在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。因此，結(jié)合流動注射技術(shù)，建立了靈敏、快速、準(zhǔn)確測定多潘立酮的化學(xué)發(fā)光分析新方法。方法用于片劑中多潘立酮含量的測定，結(jié)果滿意。該方法的建立拓展了銀納米粒子在化學(xué)發(fā)光分析中的應(yīng)用范圍。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

BPCL超微弱發(fā)光分析儀(中科院生物物理研究所)；IFIS -D型智能流動注射進(jìn)樣器(西安瑞邁分析儀器有限公司)；Agilent-8453型紫外-可見分光光度計(Agilen公司)；F-4500熒光分光光度計(日本,日立公司)。

多潘立酮標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.0500 g多潘立酮標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所)，加入乙醇使之溶解，并定容至100 mL容量瓶中，濃度為5.0×10-4g/mL，使用時逐級稀釋。Luminol溶液：稱取0.4430 g魯米諾(陜西師范大學(xué)分析科學(xué)研究所)，用0.01 mol/L NaOH溶液溶解并定容至250 mL棕色容量瓶中，濃度為1.0×10-2mol/L，用時逐級稀釋。KMnO4溶液：準(zhǔn)確稱取0.3951 g KMnO4用水溶解并定容至250 mL棕色容量瓶中，濃度為1.0×10-2mol/L，用時逐級稀釋。所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為UP超純水(18.25 MΩ·cm)。

藥物片劑1(西安楊森制藥有限公司，批號：131011285，規(guī)格：10 mg/tablet);藥物片劑2(哈藥集團(tuán)三精制藥諾捷有限責(zé)任公司，批號：1307021，規(guī)格：10 mg/tablet)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

圖1 流動注射化學(xué)發(fā)光分析法測定多潘立酮流路圖Fig.1 Schematic diagram of the flow injection chemiluminescence determination of domperidoneP1,P2.peristaltic pump;V.injection valve;C.flow cell;PMT.photomultiplier tube;NHV.negative high voltage;PC.personal computer;W.waste water;a.KMnO4 solution b.H2O or sample solution;c.AgNPs;d.mixed solution of Luminol and NaOH.

實(shí)驗(yàn)裝置如圖1所示。流路a、b、c、d分別用來輸送KMnO4溶液、載液水或試樣溶液、AgNPs膠體溶液、Luminol與NaOH的混合溶液。啟動IFIS-D型智能流動注射進(jìn)樣器輸入各溶液，待基線穩(wěn)定后，通過進(jìn)樣閥向Luminol溶液、AgNPs和載液水的混合液中注入KMnO4溶液，混合溶液進(jìn)入流通池中產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，記錄化學(xué)發(fā)光信號為I0。然后，以試樣溶液代替水，記錄化學(xué)發(fā)光信號為I，用抑制化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度信號比值(I0/I)作為分析信號，對多潘立酮進(jìn)行定量分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的采集和處理均由Windows XP系統(tǒng)下BPCL軟件完成。

2 結(jié)果與討論

2.1 AgNPs的制備與表征

AgNPs的制備[8,12]：將25 mL 1.0×10-3mol/L AgNO3溶液逐滴加到高速攪拌的75 mL 2.0×10-3mol/L NaBH4溶液中。10 min后，再加入5 mL 1%檸檬酸鈉溶液作為穩(wěn)定試劑，繼續(xù)攪拌20 min后，將得到的AgNPs溶膠，放在4 ℃冰箱中保存，熟化2 d后使用。

AgNPs的透射電子顯微鏡(TEM)照片如圖2所示。從圖中可以看出，制備的AgNPs形狀接近球形，粒徑大約在10～20 nm，分散性較好且沒有明顯的團(tuán)聚現(xiàn)象。

2.2 流動注射條件的優(yōu)化

2.2.1流路的選擇對選定體系的多種流路進(jìn)行了比較，結(jié)果表明圖1所示流路分析信號穩(wěn)定，I0/I值大，所以選擇該流路進(jìn)行分析。流路參數(shù)設(shè)置如下：閥池距40 cm；采樣環(huán)體積100 μL；采樣時間30 s，進(jìn)樣時間20 s。所有管路均為聚四氟乙烯管(0.8 mm)。

體系的流動注射化學(xué)發(fā)光信號如圖3所示。由圖3可以看出，AgNPs對Luminol-KMnO4體系有強(qiáng)烈的增敏作用，而多潘立酮的加入會使該增敏信號顯著降低。

圖2 納米銀的透射電鏡(TEM)圖Fig.2 TEM image of the prepared AgNPs

圖3 流動注射化學(xué)發(fā)光信號圖Fig.3 Flow injection signals of the chemiluminescence1.Luminol-KMnO4；2.Luminol-KMnO4-AgNPs；3.Luminol-KMnO4-AgNPs-domperidone.

2.2.2流速的選擇在0.9～3.4 mL/min范圍內(nèi)試驗(yàn)了流速對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。實(shí)驗(yàn)表明，隨著流速的增加，發(fā)光信號比值I0/I增大，當(dāng)流速為2.4 mL/min時，I0/I達(dá)到最大；隨后隨流速增大，I0/I減小。實(shí)驗(yàn)選擇各管路流速均為2.4 mL/min。

2.3 化學(xué)發(fā)光條件的選擇

2.3.1NaOH濃度的影響NaOH溶液為該反應(yīng)提供堿性環(huán)境。在實(shí)驗(yàn)中，介質(zhì)的堿度，通過調(diào)節(jié)Luminol溶液中的NaOH的濃度來實(shí)現(xiàn)。在0.1～0.6 mol/L濃度范圍內(nèi)進(jìn)行了試驗(yàn)，隨著NaOH濃度的增大，I0/I增大，但當(dāng)濃度大于0.3 mol/L時，I0/I逐漸減小。因此選擇NaOH溶液濃度為0.3 mol/L。

2.3.2KMnO4濃度的影響考察了KMnO4在1.0×10-4～7.0×10-3mol/L濃度范圍內(nèi)對體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)其濃度為2.0×10-3mol/L時I0/I達(dá)到最大。實(shí)驗(yàn)選擇2.0×10-3mol/L KMnO4溶液用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.3.3Luminol濃度的影響試驗(yàn)了Luminol濃度在5.0×10-4～6.0×10-3mol/L范圍內(nèi)時對體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。實(shí)驗(yàn)表明，Luminol濃度為2.0×10-3mol/L時，I0/I達(dá)到最大。

2.3.4增敏劑的選擇分別試驗(yàn)了不同的增敏劑，如表面活性劑聚乙烯醇(PVA)、十二烷基磺酸鈉(SLS)、氯化十六烷基吡啶(CPC)、乳化劑(OP)、十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)、十二烷基硫酸鈉(SDS)，β-環(huán)糊精(β-CD)，AgNPs、Ag+、AuNPs、PtNPs等對體系發(fā)光信號比值I0/I的影響。結(jié)果表明，除AgNPs外，其他增敏劑的加入I0/I值變化不大。

2.3.5AgNPs濃度的選擇根據(jù)AgNPs的紫外-可見吸收峰的強(qiáng)度計算AgNPs的濃度[13]。在2.4×10-10～1.2×10-8mol/L濃度范圍內(nèi)試驗(yàn)了AgNPs濃度對體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，濃度低于1.2×10-9mol/L時，體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度隨著AgNPs濃度的增大而增加，但其濃度超過1.2×10-9mol/L后，I0/I逐漸降低。因此實(shí)驗(yàn)選擇AgNPs濃度為1.2×10-9mol/L。

2.4 線性范圍、精密度與檢出限

在選定的實(shí)驗(yàn)條件下，多潘立酮濃度在1.0×10-8～5.0×10-6g/mL范圍內(nèi)與抑制化學(xué)發(fā)光信號強(qiáng)度比值呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為：I0/I=1.02×107c+1.17，相關(guān)系數(shù)為0.9944。根據(jù)IUPAC建議，計算得方法檢出限為1.05×10-9g/mL。對1.0×10-6g/mL的多潘立酮溶液平行測定11次，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.7%。

2.5 干擾試驗(yàn)

2.6 樣品測定

分別隨機(jī)抽取同一批號多潘立酮片劑10粒，準(zhǔn)確稱取并記錄其質(zhì)量。研磨，精確稱取研細(xì)后的粉末適量(相當(dāng)于多潘立酮50 mg)，加入乙醇攪拌溶解，定容至100 mL的容量瓶中，搖勻。干過濾，棄去初濾液，移取續(xù)濾液適量，按實(shí)驗(yàn)方法測定，同時進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 樣品及回收率測定(n=5)

2.7 化學(xué)發(fā)光機(jī)理初探

用F-4500型熒光分光光度計，關(guān)閉光源，分別測得Luminol-KMnO4化學(xué)發(fā)光體系、Luminol-KMnO4-AgNPs-Domperidone化學(xué)發(fā)光體系和Luminol-KMnO4-AgNPs化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光光譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以上三個發(fā)光體系的最大發(fā)射波長均為425 nm，這與Luminol發(fā)光體的最大發(fā)射波長一致，說明三個化學(xué)發(fā)光體系具有相同的發(fā)光體，均為激發(fā)態(tài)的3-氨基鄰苯二甲酸根陰離子[14]。AgNPs的存在起到了增敏作用。

3 結(jié)論

在堿性介質(zhì)中，基于多潘立酮對AgNPs增敏Luminol-KMnO4化學(xué)發(fā)光體系的抑制作用，結(jié)合流動注射技術(shù)，建立了KMnO4-Luminol-AgNPs流動注射化學(xué)發(fā)光體系測定多潘立酮的新方法。該方法用于藥物片劑中多潘立酮的測定，結(jié)果滿意。