盧燕平， 崔 旭， 聞?dòng)裉铮?吳加倫*， 劉凱麗， 王 萍

(1.農(nóng)業(yè)部植物病原及昆蟲分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所， 浙江杭州 310058； 2.桐鄉(xiāng)市鳳鳴街道農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)服務(wù)中心，浙江嘉興 314505)

中國是中醫(yī)藥的發(fā)源地，也是中藥的生產(chǎn)和使用大國[1]。白術(shù)是一種菊科草本植物白術(shù)(AtractylodesmacrocephalaKoidz.)的干燥根莖，為我國常用中藥材之一，在《神農(nóng)本草》中被列為上品，藥用價(jià)值頗高，臨床應(yīng)用普遍，具有補(bǔ)氣健脾、燥濕利水、止汗、安胎等功效[2,3]。但在白術(shù)的種植過程中，經(jīng)常受到小地老虎、金針蟲等地下害蟲的危害，造成產(chǎn)量下降影響收成。

二嗪磷(Diazinon)又名二嗪農(nóng)、地亞農(nóng)，由瑞士汽巴-嘉基公司于1956年開發(fā)成功[4]，它難溶于水，能溶于石油醚、乙醇、丙酮。二嗪磷為廣譜低毒的有機(jī)磷殺蟲劑，可以防治多種地下害蟲及蟲卵，具有觸殺、胃毒、熏蒸、內(nèi)吸作用及殺螨活性，對(duì)作物安全[5]。在全球環(huán)境保護(hù)要求日益嚴(yán)格的情況下，市場對(duì)二嗪磷的使用需求逐步增長[4 - 6]。國內(nèi)外關(guān)于二嗪磷在中藥材及其他作物中的殘留檢測已有報(bào)道[7 - 10]，但主要集中在煙草、茶葉、蔬菜等樣本上，而對(duì)中藥材則存在適用范圍窄、成本高等問題，已開發(fā)的方法難以適用于成分較復(fù)雜的白術(shù)、當(dāng)歸等中藥材。我國尚未制定白術(shù)中二嗪磷的最大殘留限量(MRL)值，國家標(biāo)準(zhǔn)(GB2763-2012)對(duì)食品中二嗪磷MRL值[11]規(guī)定如下：二嗪磷在稻谷和小麥中為0.1 mg/kg；在棉籽和普通白菜中為0.2 mg/kg；在花生仁中為0.5 mg/kg。本文建立了白術(shù)及其土壤中二嗪磷殘留的分析方法，為快速高效檢測成分復(fù)雜中藥材中的二嗪磷提供參考。該方法的精密度和準(zhǔn)確度均符合殘留分析的要求。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

FULI-9790氣相色譜儀(浙江福立分析儀器有限公司)，配火焰光度檢測器(FPD)；UITRA-TURRAX勻漿機(jī)(德國，IKA公司)；Heidolph Laborota 4010 digital 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國，Heidolph集團(tuán))；KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

二嗪磷標(biāo)準(zhǔn)品(純度99.0%，德國 Dr.Ehrenstorfer公司)。助濾劑Celite545；丙酮(色譜純)；乙酸乙酯、二氯甲烷(分析純)經(jīng)全玻璃蒸餾裝置重蒸；無水Na2SO4(分析純，經(jīng)600 ℃灼燒4 h)；活性炭(濃HCl中加熱煮沸1 h，用蒸餾水洗至中性，烘干后在600 ℃灼燒2 h)。

1.2 樣品制備

白術(shù)及土壤樣品采自浙江省金華市磐安市尚湖鎮(zhèn)試驗(yàn)基地(未施用過二嗪磷)。白術(shù)曬干后先切片再用中藥粉碎機(jī)粉碎，土壤取試驗(yàn)基地0～20 cm深土層，磨碎后過20目篩。

土壤樣品制備:稱取土壤樣品10.00 g(精確至0.01 g)，置于250 mL帶螺紋蓋樣品瓶中，加入50 mL丙酮后超聲提取30 min，抽濾，30 mL丙酮分2次清洗殘?jiān)喜V液，過無水Na2SO4，60 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮吹至近干，以丙酮定容至2 mL，待測。

白術(shù)樣品制備:稱取白術(shù)樣品10.00 g(精確至0.01 g)，置于250 mL帶螺紋蓋樣品瓶中，加入60 mL二氯甲烷，勻漿后超聲提取30 min，抽濾，30 mL二氯甲烷分2次清洗殘?jiān)?，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮約至5 mL，過柱(層析柱從下往上依次填裝2 cm無水Na2SO4、6 g活性炭-助濾劑Celite545(質(zhì)量比為5∶1)、2 cm無水Na2SO4)。先用30 mL乙酸乙酯預(yù)淋洗，棄去淋出液，上樣，再用100 mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液于平底燒瓶中，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，氮吹至近干，以丙酮定容至2 mL，待測。

1.3 色譜條件

色譜柱：OV-17毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.5 μm)；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；檢測器溫度：250 ℃；不分流進(jìn)樣。程序升溫：起始溫度150 ℃，保持2 min，以20 ℃/min升溫至180 ℃，保持3 min，再以10 ℃/min升到250 ℃/min，保持6 min。氣體流速：高純氮(純度99.9999%)10 mL/min，氫氣150 mL/min，空氣80 mL/min，尾吹30 mL/min；進(jìn)樣體積：1 μL。采用保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

根據(jù)農(nóng)藥的性質(zhì)，比較了幾種溶劑的提取效果。結(jié)果表明：丙酮、二氯甲烷、乙腈作為提取溶劑時(shí)，二嗪磷的提取率較高，在88.91%～99.52%之間。但是由于白術(shù)的成分復(fù)雜，丙酮提取時(shí)樣品雜質(zhì)較多，后續(xù)的凈化較困難；乙腈毒性強(qiáng)，對(duì)人體以及環(huán)境的影響較大，因此實(shí)驗(yàn)選擇二氯甲烷作為白術(shù)樣品的提取溶劑，而選取丙酮作為土壤樣品的提取溶劑。

2.2 凈化方法的優(yōu)化

本研究分別對(duì)弗羅里硅土、中性Al2O3、活性炭層析柱的凈化效果進(jìn)行比較。弗羅里硅土、Al2O3層析柱的回收率都符合要求，但色素較多,容易污染檢測系統(tǒng)；單純的活性炭柱凈化效果好，但活性炭顆粒小，淋洗速度慢；活性炭-助濾劑層析柱的回收率最高，平均回收率達(dá)92.5%，且淋洗速度快，滿足凈化要求，因此選用活性炭-助濾劑層析柱。用乙酸乙酯作為淋洗劑，分段淋洗，每10 mL收集一次淋洗液，確定淋洗劑用量為100 mL。綜合考慮，采用乙酸乙酯作淋洗液過活性炭-助濾劑Celite545(質(zhì)量比5∶1)柱凈化。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

選取適量白術(shù)及土壤空白樣品，經(jīng)上述方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，以丙酮定容，得到2種丙酮基質(zhì)溶液。準(zhǔn)確稱取二嗪磷標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g，分別用這2種丙酮基質(zhì)溶液配制成質(zhì)量濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再逐級(jí)稀釋為10、5、1、0.5、0.1、0.01 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。按1.3節(jié)分別進(jìn)樣1 μL，重復(fù)3次，以質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程分別為：y=57326x-9846，相關(guān)系數(shù)R2=0.999(白術(shù)空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液)；y=55470x+1813，R2=0.999(土壤空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液)。經(jīng)過回歸分析，二嗪磷在質(zhì)量濃度0.01～10 mg/L之間具有良好的線性關(guān)系。

2.4 方法的回收率和精密度

選取不含二嗪磷的土壤和白術(shù)樣品進(jìn)行添加回收率測定。稱取土壤及白術(shù)樣品各10.00 g(精確到0.01 g)，分別添加0.01、0.05、0.5 mg/kg二嗪磷，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行樣品的前處理和色譜分析。結(jié)果如表1所示。

表1 二嗪磷在土壤和白術(shù)中的添加回收率

(續(xù)表1)

SampleSpiked level(mg/kg)Recovery(%)12345Average recovery(%)RSD(%)0.599.5491.2195.7397.3889.6794.714.16Atractylodes0.0188.3490.0989.5187.2387.4688.531.25macrocephala 0.0588.1393.4298.2294.3591.9093.203.67Koidz.0.595.6193.9494.6895.3697.8895.491.48

標(biāo)樣、白術(shù)及其土壤空白樣品和添加二嗪磷樣品的色譜圖見圖1。

圖1 土壤及白術(shù)樣品色譜圖Fig.1 Chromatogram of soil and Atractylodes macrocephala Koidz.samplesA:Diazinon standard based on check of soil;B:Diazinon standard based on check of atractylodes macrocephala Koidz.;C:Check of soil;D:Soil sample fortified with diazinon;E:Check of Atractylodes macrocephala Koidz;F:Atractylodes macrocephala Koidz sample fortified with diazinon.

3 結(jié)論

本文建立了丙酮/二氯甲烷提取，活性炭-助濾劑柱凈化，GC-FPD檢測白術(shù)及其土壤中二嗪磷殘留，方法操作簡單、快速，定性定量準(zhǔn)確，靈敏度高，成本低，滿足農(nóng)藥殘留分析要求。為制定二嗪磷(有機(jī)磷)在成分更加復(fù)雜的中藥材中的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)提供參考。