魯志平，楊曉玲，申曉莉，黃園媛，朱　波，葉　春，譚春青

（1.遂寧市動物疫病預防控制中心，四川 遂寧　629000；2.四川省大竹縣動物疫病預防控制中心）

S2株、M5株布氏桿菌減毒活疫苗對山羊免疫效果比較試驗

魯志平1，楊曉玲2，申曉莉2，黃園媛2，朱波2，葉春2，譚春青1

（1.遂寧市動物疫病預防控制中心，四川 遂寧629000；2.四川省大竹縣動物疫病預防控制中心）

通過對36只不同日齡、不同性別的健康山羊（含妊娠母羊6只）隨機平均分組，分別口服S2株、M5株布氏桿菌減毒活疫苗后，在7 d、14 d、21 d、42 d、90 d對血液中布氏桿菌抗體進行檢測，對S2、M5誘導的抗體消長動態(tài)進行分析及疫苗安全性評價，最終研究確定出S2可適用于不同日齡、不同性別山羊廣泛使用，也適用于妊娠期間山羊的免疫，能有效預防布病的發(fā)生，減少由此導致的經濟損失；M5可引起妊娠母羊免疫副反應及嚴重的流產癥狀。

S2株布氏桿菌減毒活疫苗；M5株布氏桿菌減毒活疫苗；免疫效果

布魯氏菌是一種細胞內寄生的病原菌，主要侵害動物的淋巴系統和生殖系統，是一種重要的人畜共患病，OIE將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。病畜主要通過流產物、精液和乳汁排菌，污染環(huán)境。該病以引起雌性動物流產、不孕及雄性動物出現睪丸炎等為主要特征。人感染該病后，表現為長期發(fā)熱、多汗、關節(jié)痛、神經痛及肝、脾腫大等癥狀。該病嚴重威脅著人和多種動物的生命健康［1］。

目前該病控制主要是以“檢疫凈化”為主的綜合防控措施，其中也包括對重點疫區(qū)的易感動物接種疫苗，為了篩選確定針對不同年齡段山羊及妊娠母羊可以同時使用的布氏桿菌安全疫苗，該研究通過對2月齡至6月齡、10月齡至12月齡試驗山羊按照試驗要求分組后分別口服免疫S2株布氏桿菌減毒活疫苗、M5布氏桿菌株減毒活疫苗，測定免疫后不同時期各組試驗山羊接種免疫后血清中抗布氏桿菌特異性抗體的消長規(guī)律及安全性，為科研以及基層獸醫(yī)工作者提供參考。

1　材料與方法

1.1試驗動物

選2月齡至6月齡雌雄各半、體質量相當的同一品種健康山羊18只，隨機分成3組，每組6只，分別為第1組、第2組、第3組，其中第1組為免疫S2株布氏桿菌減毒活疫苗（S2）組，第2組為免疫M5布氏桿菌株減毒活疫苗（M5）組，第3組為空白對照組；選10～12月齡體質量相當的同一品種健康母山羊18只，其中妊娠期母羊9只，隨機分成3組，每組6只（含妊娠母羊3只），分別為第4組、第5組、第6組，其中第4組為免疫S2組，第5組為免疫M5組，第6組為空白對照組。以上試驗山羊每組均單獨隔離飼養(yǎng)，墊草墊料、糞便及廢棄物無害化處理。

1.2試劑及疫苗

布病虎紅平板凝集試驗（RBPT）抗原和布氏桿菌病試管凝集試驗（SAT）抗原、陽性對照、陰性對照均由中國疾病預防控制中心傳染病和流行病研究所生產；S2株布氏桿菌活疫苗購自金宇保靈生物藥品有限公司，每頭份含布氏桿菌弱毒活菌100億CFU；M5株布氏桿菌活疫苗購自新疆天康畜牧生物技術股份有限公司，均在有效期內使用。

1.3疫苗免疫劑量及方法

按照每年接種1次疫苗的程序進行免疫，采取口服方式進行免疫，即用滅菌生理鹽水按使用說明稀釋疫苗后以投藥器噴注到山羊舌根及咽喉部。第1組試驗山羊口服S2量為100億CFU/只，第2組試驗山羊口服M5量為25頭份/只，第3組試驗山羊不免疫，第4組試驗山羊口服S2量為100億CFU/只，第5組試驗山羊口服M5量為25頭份/只，第6組試驗山羊不免疫。

1.4疫苗的安全性及免疫效果比較

第1組、第4組與第2組、第5組試驗山羊分別口服免疫活疫苗S2、M5后，分別在免疫前1 d、免疫后7 d、14 d、21 d、42 d、90 d對所有試驗山羊采集血液分離血清，定性（RBPT）和定量（SAT）檢測血清中的布氏桿菌抗體水平，按GB/T18646-2002規(guī)定的程序操作，了解兩種活疫苗分別誘導山羊機體的抗體消長動態(tài)，并記錄各組試驗山羊的免疫反應情況及妊娠母山羊流產情況。

2　結果

2.1疫苗的安全性比較

第1組試驗山羊免疫S2后，未觀察到任何免疫副反應，包括發(fā)熱、呼吸困難、食欲下降等癥狀；第2組試驗山羊免疫M5后，有1只試驗山羊出現了食欲下降等輕微免疫副反應癥狀；第3組空白對照組山羊均未出現任何癥狀。結果表明S2株布氏桿菌減毒活疫苗對于2～6月齡山羊口服接種是安全的，M5會引起個別山羊出現免疫副反應。

第4組試驗山羊免疫S2后，未觀察到任何免疫副反應，包括發(fā)熱、呼吸困難、食欲下降、流產等癥狀；第5組試驗山羊免疫M5后，所有的試驗妊娠母山羊均出現了流產癥狀；空白對照組羊均未出現任何癥狀。結果表明S2株布氏桿菌減毒活疫苗對于10～12月齡山羊口服接種是安全的，并能有效減少羊群流產、死胎，減少能繁母羊因流產、死胎導致的經濟損失，M5會引起妊娠母山羊出現流產癥狀。

2.2疫苗的免疫效果比較

2.2.1第1組、第2組試驗山羊分別免疫S2與M5后抗體消長情況

圖1　第1組、第2組試驗羊分別免疫S2、M5后各時期血清的SAT幾何平均效價

第1組、第2組試驗山羊經S2、M5免疫后，通過采血應用RBPT、SAT兩種檢測方法測定抗體消長動態(tài)，結果基本一致?？瞻讓φ战M均沒有免疫應答產生；通過SAT定量檢測，見圖1，1組、2組試驗山羊免疫前后血清抗體滴度出現了明顯變化，第7 d幾何平均效價均達到最高，并達到峰值，隨后1組試驗山羊抗體效價逐漸下降，90 d后接近1∶50臨界值。2組試驗山羊抗體效價峰值從7 d持續(xù)至14 d后逐漸下降，90 d后個別試驗山羊抗體效價滴度＜1∶50。

2.2.24組、5組試驗山羊分別免疫S2與M5后抗體消長情況4組、5組試驗山羊經S2、M5免疫后，通過采血應用

RBPT、SAT兩種檢測方法測定抗體消長動態(tài)，結果基本一致?？瞻讓φ战M均沒有免疫應答產生；通過SAT定量檢測，見圖2，4組、5組試驗山羊免疫前后血清抗體滴度出現了明顯變化，第7天幾何平均效價均達到最高，并達到峰值，隨后4組試驗山羊抗體效價逐漸下降，90 d后個別試驗羊抗體效價滴度＜1∶50。5組試驗羊抗體效價峰值從7 d持續(xù)至14 d后逐漸下降，90 d后接近1∶50臨界值。

圖2　4組、5組試驗羊分別免疫S2、M5后各時期血清的SAT幾何平均效價

2.2.31組、4組試驗山羊分別免疫S2后抗體消長情況（見表1）

SAT方法測定的1組、4組山羊免疫S2后抗體消長動態(tài)與RBPT結果基本一致?？瞻讓φ战M沒有相應的免疫應答產生；由表1可知，兩組試驗羊免疫S2后7 d抗體水平達到峰值，83.3%的血清樣本抗體效價為1∶400以上，90 d時，91.67%～100%的血清樣本抗體效價達到1∶50以上。

表1　1組、4組試驗山羊免疫S2后抗體消長動態(tài)

1組試驗山羊免疫S2，免疫前后血清抗體滴度出現了明顯的變化，見圖3。免疫后7 d，抗體水平達到了峰值，隨后逐漸下降，抗體水平到90 d后降低至有效保護下限；4組試驗山羊免疫S2，血清抗體幾何平均效價動態(tài)曲線與Ⅰ組基本一致，免疫后90 d個別試驗羊失去有效保護性，幾何平均效價＜1∶50。說明S2在不同年齡段山羊群體中使用，免疫效果及效價的產生時間、效價高低、消長趨勢等方面無明顯差異。

2.2.42組、5組試驗山羊分別免疫M5后抗體消長情況

SAT方法測定的2組、5組試驗山羊免疫M5后抗體消長動態(tài)與RBPT結果基本一致，空白對照組沒有相應的免疫應答產生；兩組試驗山羊免疫M5后7～14 d抗體水平達到峰值，75.0%的血清樣本抗體效價為1∶400以上，90 d時，91.67%～100%的血清樣本抗體效價達到1∶50以上，在有效保護范圍之內，見表2。

表2　2組、5組試驗山羊免疫M5后抗體消長動態(tài)

圖3　1組、4組試驗羊免疫S2后各時期血清的SAT幾何平均效價

2組試驗羊免疫M5 7 d后抗體效價達到峰值并持續(xù)至14 d后逐漸下降，90 d時個別試驗羊抗體水平下降至有效保護下限外；5組試驗羊免疫M5后，血清抗體幾何平均效價動態(tài)曲線基本與2組山羊組一致，免疫后90 d個別試驗羊失去有效保護性，幾何平均效價＜1∶50。3只妊娠母羊在7～21 d全部出現流產癥狀，流產率達100%。說明M5在不同年齡段山羊群體中使用，免疫效果及效價的產生時間、效價高低、消長趨勢等方面無明顯差異，但M5能引起妊娠期母羊發(fā)生流產，見圖4。

圖4　2組、5組試驗羊免疫M5后各時期血清的SAT幾何平均效價

2.2.5不同性別羊免疫S2、M5后抗體滴度消長情況（見圖5和圖6）

S2、M5在不同性別山羊群體中使用，免疫效果及效價的產生時間、效價高低、消長趨勢等方面無明顯差異，但M5能引起妊娠母羊流產。

3　分析與討論

選擇健康山羊，在試驗接種疫苗前進行相關檢疫，確定健康后方可使用，否則影響疫苗效果及試驗結果。

圖5　不同性別試驗山羊免疫S2后血清的SAT幾何平均效價動態(tài)圖

圖6　不同性別試驗山羊免疫M5后血清的SAT幾何平均效價動態(tài)圖

該試驗研究表明，S2、M5經口服免疫山羊后，免疫前后血清抗體滴度出現了明顯變化，二者均在第7天時幾何平均效價達到峰值，隨后逐漸下降，3個月后個別山羊機體內抗體滴度＜1∶50，在保護范圍之外。以上試驗結果在羊的性別、年齡等方面無明顯差異。根據該試驗結果初步認為，S2、M5對山羊的免疫期約為3個月。下一步將對3個月之后山羊體內抗體的消長情況進一步跟蹤檢測，更加科學掌握山羊體內布病抗體衰減規(guī)律。

從以上免疫情況和免疫效果檢測情況來看，S2、M5經口服免疫山羊后，二者就抗體產生時間、抗體滴度及抗體水平達到峰值時間、抗體衰減時間等方面無太大差異，就免疫效果和安全性而言，S2對羊的免疫效果是絕對可靠的，這與王季秋［2］等研究結果基本一致，可廣泛用于山羊的布病免疫預防。M5可引起妊娠母羊嚴重流產，對除妊娠母羊外的其他山羊也可使用。

該次試驗研究，只進行了S2、M5一次口服免疫后山羊布病抗體的跟蹤檢測，下一步將進行首免后1個月加強免疫一次的抗體跟蹤檢測，并通過口服免疫與其他免疫方式（噴霧、注射等）比較研究，以確定更加科學的免疫程序。因此，該研究為大面積推廣S2預防山羊布病提供了科學依據，為養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展和人群健康提供科學依據。

［1］李金平，張繼紅，符玉娟.布魯氏菌病的預防與控制［J］.新疆畜牧業(yè)，2006，（3）：40.

［2］王季秋，張玉林.S2苗免疫牛、羊安全性及抗體消失規(guī)律的觀察［J］.中國地方病防治雜志，1993，8（5）：313.

S858.27

B

1004-5090（2015）12-0007-03

2015-09-18）