邱燕，陳勇，苗筠杰，施葉葉，陳建偉，李祥

(南京中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京 210023)

·基礎(chǔ)研究·

番荔枝子油化學(xué)成分GC-MS分析△

邱燕，陳勇*，苗筠杰，施葉葉，陳建偉，李祥*

(南京中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京 210023)

目的：研究番荔枝子油的化學(xué)組成及相對(duì)含量。方法：采用石油醚提取番荔枝子油，對(duì)番荔枝子油進(jìn)行甲酯化后，應(yīng)用GC-MS分析其主要成分及相對(duì)含量。結(jié)果：番荔枝子的得油率為8.27%，GC-MS分析鑒定出14個(gè)化學(xué)成分，主要成分為棕櫚酸(12.5%)、亞油酸(13.2%)、油酸(24.3%)、硬脂酸(16.3%)和反油酸(12.8%)。結(jié)論：番荔枝子油富含不飽和脂肪酸，相對(duì)含量為58.2%。

番荔枝子油；GC-MS；不飽和脂肪酸

《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》記載番荔枝子為番荔枝科植物番荔枝AnnonasquamosaLinn.的干燥成熟種子，有消積殺蟲之功，臨床主要用于惡瘡腫痛、驅(qū)蟲等[1]。目前對(duì)于番荔枝子的研究主要集中在番荔枝內(nèi)酯類成分，藥效研究表明該類化合物具有較強(qiáng)的體內(nèi)外抗腫瘤作用[2-4]。而番荔枝子中主要成分為脂肪油，前期本課題組對(duì)番荔枝子油進(jìn)行甲酯化后，應(yīng)用GC分析與混合對(duì)照品對(duì)照，分析了其主要成分及含量，由于FID檢測(cè)器靈敏度及混合對(duì)照品種類的限制，只鑒定出番荔枝子脂肪油中4個(gè)主要成分，分別為棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸，其中不飽和脂肪酸含量大于50%[5]。為了更全面地揭示番荔枝子油的化學(xué)成分，本論文采用GC-MS分析法分析了番荔枝子油的主要化學(xué)成分。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 6890 N氣相色譜儀(Palo Alto，CAUSA)，5973型質(zhì)譜聯(lián)用儀，Agilent 7683自動(dòng)進(jìn)樣器，NIST-02質(zhì)譜庫(kù)。分析天平(BT-125D，Sartorius，German)。

1.2 藥材與試劑

番荔枝子購(gòu)自廣東澄海，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳建偉教授鑒定為番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝AnnonasquamosaL.的成熟干燥種子。

石油醚(沸程60～90 ℃，廣東光華科技股份有限公司)。

2 方法

2.1 番荔枝子油的提取

稱取番荔枝子粗粉(20目)3份，每份500 g，分別用10倍量石油醚滲漉，滲漉液減壓回收得番荔枝子油，稱重，計(jì)算出油率。

番荔枝子出油率計(jì)算公式為：出油率(%)=油質(zhì)量(g)/物料質(zhì)量(g)×100%。

2.2 甲酯化處理

[5]，取2.1項(xiàng)下提取的番荔枝子油150 mg，精密稱定，置于10 mL具塞玻璃管中。加入0.5 mol·L-1氫氧化鈉-甲醇溶液5 mL，置60 ℃水浴皂化40 min(至油珠完全消失)，冷卻至室溫，加入14%三氟化硼-甲醇3 mL，繼續(xù)水浴5 min，冷卻至室溫，加入正己烷3 mL，飽和氯化鈉3 mL，振搖，靜置分層，取上清液300 μL，正己烷定容至5 mL，取適量溶液用無水硫酸鈉脫水，12 000 r·min-1離心10 min，過0.45 μm微孔濾膜，得番荔枝子油甲酯化樣品，置于4 ℃冰箱保存，備用。

2.3 GC-MS分析條件

GC條件設(shè)置：HP-5毛細(xì)管色譜柱(30 m×250 mm，0.25 μm)，進(jìn)樣口溫度為230 ℃。升溫程序：初始溫度130 ℃，保持5 min，以3 ℃·min-1的速率升溫至230 ℃。載氣為高純氦氣，流量為1.0 mL·min-1。進(jìn)樣量為1 μL，分流比為10∶1。

MS參數(shù)設(shè)置：電子轟擊(EI)，離子源電離電壓70 eV，離子源溫度230 ℃，加速電壓200 eV，掃描質(zhì)量范圍m/z50～550。

3 結(jié)果

3.1 番荔枝子得油率

根據(jù)3.1項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)方案，提取得到的番荔枝子油在常溫下呈淡黃色透明油狀，對(duì)所得番荔枝子油稱重，質(zhì)量分別為40.34、42.17、41.54 g，結(jié)合出油率計(jì)算公式計(jì)算，得油率分別為8.07%、8.43%、8.31%，平均得油率為(8.27±0.18)%。

3.2 番荔枝子油化學(xué)成分分析

將番荔枝子油甲酯化樣品按2.3項(xiàng)下條件進(jìn)行分析，獲得總離子流圖，見圖1。對(duì)總離子流圖中各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，通過Agilent工作站NIST-02標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)進(jìn)行檢索，對(duì)匹配度≥95%的再進(jìn)行人工比對(duì)解析，確認(rèn)各化合物，按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量，共鑒定的14個(gè)化合物及其相對(duì)百分含量結(jié)果見表1。

圖1 番荔枝子油的總離子流色譜圖

表1 番荔枝子油化學(xué)成分分析

由表1可知，GC-MS分析鑒定出的主要化合物為棕櫚酸(12.5%)、亞油酸(13.2%)、油酸(24.3%)、硬脂酸(16.3%)和反油酸(12.8%)，與前期本課題組用GC分析與混合對(duì)照品對(duì)照的方法鑒定的主要成分基本一致[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，番荔枝子富含不飽和脂肪酸，相對(duì)含量為58.2%。另外，還鑒定出一些相對(duì)含量比較低的成分，如2-癸烯醛(0.6%)。

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用MS作為檢測(cè)器，克服了FID檢測(cè)器靈敏度及混合對(duì)照品種類的限制，盡可能多地鑒定出了番荔枝子油中的一些相對(duì)含量比較低的化學(xué)成分。番荔枝子作為一種熱帶果實(shí)，在我國(guó)臺(tái)灣、廣東、海南等地大量食用，而種子丟棄后造成自然資源的浪費(fèi)。同時(shí)番荔枝子油具有一定的體外抑制人腫瘤細(xì)胞增殖的活性，尤其對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2表現(xiàn)出高的選擇活性[5]。癌細(xì)胞和正常組織在脂質(zhì)代謝上有著根本的區(qū)別，利用不飽和脂肪酸可達(dá)到治療腫瘤同時(shí)不傷害正常組織的目的[6]。本研究提示番荔枝子中富含不飽和脂肪酸，具有一定的營(yíng)養(yǎng)及藥用價(jià)值。本課題組前期研究表明其含有一類抗腫瘤活性成分番荔枝內(nèi)酯(Annonaceousacetogenins，ACGs)[7]。根據(jù)該類化合物結(jié)構(gòu)特征[8]，其極性較小，在提取番荔枝子的過程中也會(huì)提取出少量的ACGs，該類成分無法在GC-MS上檢測(cè)到，本課題組后期研究將進(jìn)行番荔枝子油的LC-MS檢測(cè)分析，進(jìn)一步揭示番荔枝子油抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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[5] 邱燕，陳勇，陳建偉，等.番荔枝子脂肪油化學(xué)成分及其抗腫瘤活性[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(21)：109-111.

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GC-MSAnalysisofOilsfromAnnonasquamosaSeed

QIUYan，CHENYong*，MIAOYunjie，SHIYeye，CHENJianwe，LIXiang*

(CollegeofPharmacy，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210046，China)

Objective：To research the components and their relative amount of oil fromAnnonasquamosaseed.Methods：Petroleum ether was used to extract oils fromA.squamosaseed.The components and their relative amount of methyl esterification of the oils was analyzed by GC-MS.Results：The yield of the oil fromA.squamosaseed was 8.27%.The major chemical constituents of the oil were arepalmitic acid(12.5%)，linoleic acid(13.2%)，oleic acid(24.3%)，stearic acid(16.3%) and elaidic acid(12.8%).Conclusion：A.squamosaseed oil was rich in unsaturated fatty acid with the relative content of 58.2%.

Annonasquamosaseed oil；GC-MS；unsaturated fatty acid

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.007

2015-03-13)

國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目(81274057，81403082)；國(guó)家教育部博士點(diǎn)專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(20113237110009)；江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(SBK2012853)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PAPD)；南京中醫(yī)藥大學(xué)青年自然科學(xué)基金項(xiàng)目(13XZR23)；2012年江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(588)

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陳勇，講師，研究方向：中藥化學(xué)與分析；Tel：(025)85811512，E-mail：achenyong@gmail.com； 李祥，教授，研究方向：中藥化學(xué)與分析；Tel：(025)85811512；E-mail：lixiang_8182@163.com