郭強

(河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 450003)

·中藥工業(yè)·

心安寧片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

郭強*

(河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 450003)

目的：建立心安寧片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層鑒別方法進行定性鑒別，運用高效液相色譜法測定葛根素的含量。結(jié)果：確立了制劑中葛根、制何首烏的鑒別方法。通過方法學(xué)系統(tǒng)考察，建立了葛根素的含量測定方法，其葛根素的線性范圍為0.212～3.392 μg，回歸方程：Y=4 528 774X-79 624(r=0.999 9)，平均加樣回收率為98.9%，RSD=2.64%(n=6)。結(jié)論：建立的鑒別和含量測定方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于心安寧片的質(zhì)量控制。

心安寧片；葛根；制何首烏；二苯乙烯苷；葛根素；高效液相色譜

心安寧片收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》(第四冊)，由葛根、山楂、制何首烏、珍珠粉4味中藥組成，具有養(yǎng)陰寧心、化瘀通絡(luò)、降血脂的功能，用于血脂過高、心絞痛以及高血壓引起的頭痛、頭暈、耳鳴、心悸等癥[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只收載了其性狀和檢查項，并無定性鑒別和含量測定項，為了有效地控制心安寧片的質(zhì)量，本文采用TLC對葛根、制何首烏進行鑒別，采用HPLC測定葛根中葛根素的含量，將其作為控制本制劑內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)。

1 儀器與材料

Waters2695高效液相色譜儀(配四元泵、自動進樣器、Waters2487紫外檢測器)；安捷倫1100高效液相色譜儀(配四元泵、自動進樣器、VWD紫外檢測器)。

心安寧片(實驗室自制)；葛根對照藥材、制何首烏對照藥材、二苯乙烯苷、葛根素(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為121551-200601，121454-200703，110844-200606，110752-200511)；甲醇為(德國Merck公司)色譜醇；水為超純水；其他溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 葛根的薄層色譜鑒別 取心安寧片4片，除去糖衣，研細(xì)，加入三氯甲烷50 mL，超聲10 min，放冷，濾過，殘渣加甲醇10 mL，放置2 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL,使其溶解，作為供試品溶液[2]。另取葛根對照藥材0.8 g，同法制成對照藥材溶液。再取葛根素對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。按其處方比例制備不含葛根的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國人民共和國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述4種溶液各10 μL，分別點于同一用羧甲基纖維素鈉制備的硅膠G薄層板上，使其成條狀，以三氯甲烷-甲醇-水(7∶>2.5∶>0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑，陰性對照無干擾。

2.1.2 制何首烏的薄層色譜鑒別 取心安寧片4片，除去糖衣，研細(xì)，加乙醚50 mL，超聲處理20 min，濾過，殘渣用水飽和的正丁醇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL，使其溶解，作為供試品溶液[2]。另取制何首烏對照藥材0.25 g，加乙醇20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至3 mL，作為對照藥材溶液。再取二苯乙烯苷對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.5 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。按其處方比例制備不含制何首烏的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國人民共和國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述4種溶液各3 μL，分別點于同一用羧甲基纖維素鈉制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(6∶>2∶>1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸硫酸溶液，稍加熱。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。

2.2 葛根素的含量測定

2.2.1 色譜條件 填充劑為用十八烷基硅烷基鍵合硅膠；流動相為甲醇-水(25∶>75)；檢測波長為250 nm；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為35 ℃；進樣量為10 μL；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于4000。

2.2.2 供試品溶液的制備 取心安寧片20片，除去糖衣，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[2-6]。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品適量，加30%乙醇制成質(zhì)量濃度為80 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.4 陰性對照品溶液的制備 按處方取不含葛根的其他藥材，照本制劑的制備工藝制成陰性對照制劑，再按2.2.2項下方法制成陰性對照溶液。

2.2.5 陰性干擾試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果表明，供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上有色譜峰，而陰性對照色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上則未出現(xiàn)明顯色譜峰，表明在該HPLC測定條件下，葛根素的測定無明顯干擾。見圖1。

A.葛根素對照品；B.供試品；C.缺葛根的陰性對照品；1.葛根素圖1 心安寧片對照品、供試品及陰性對照溶液HPLC圖

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密取葛根素對照品，分別制成質(zhì)量濃度為21.2、42.4、84.8、169.6、339.2 μg·mL-1的樣品，進樣量10 μL，測定峰面積，將樣品質(zhì)量濃度與峰面積進行線性回歸，回歸方程為Y=4 528 774X-79 624(r=0.999 9)，葛根素在0.212～3.392 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7 精密度 精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣5次，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD=0.78%，表明精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液(批號：110101)10 μL，分別在0、2、4、6、8、10 h內(nèi)注入液相色譜儀中，測定葛根素峰面積，結(jié)果表明本品在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.8%。

2.2.9 重復(fù)性試驗 取同一批號(批號：110101)樣品6份，按2.2.2項下方法，制備6份供試品溶液，分別測定葛根素含量，結(jié)果平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22.7 mg·g-1，RSD=1.5%，表明樣品的重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(批號：110101，葛根素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22.7 mg·g-1)6份，每份約0.1 g，精密加入對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.045 4 mg·mL-1，配制方法：精密量取葛根素對照品22.70 mg，加入30%乙醇溶解并定容至500 mL)50 mL，按上述含量測定方法進行測定，結(jié)果見表1。

表1 心安寧片中葛根素回收率測定(n=6)

2.2.11 樣品測定 取10批樣品按2.2.2項下方法制成供試品溶液，注入液相色譜儀，按2.2.1的色譜條件進樣，并按外標(biāo)一點法測定葛根素的含量，結(jié)果見表2。

由表2可知，10批樣品中葛根素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21.7 mg·g-1，按含量平均值的80%折算成每片的含量作為含量測定的指標(biāo)，暫定心安寧片每片含葛根以葛根素(C21H20O9)計，不得少于5.2 mg。

表2 心安寧片中葛根素含量測定

注：樣品規(guī)格為片芯重0.3 g。

3 討論

3.1指標(biāo)選定依據(jù) 葛根為方中主藥，具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)的功能，可用于治療發(fā)熱頭痛，眩暈頭痛，中風(fēng)偏癱，胸痹心痛。葛根素是葛根的主要藥理活性成分，因此將葛根對照藥材、葛根素對照品和葛根素的定量列入心安寧片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方中制何首烏具有補肝腎、益精血、烏須發(fā)、強筋骨、化濁降脂的功能。二苯乙烯苷是制何首烏中主要藥理活性成分，據(jù)文獻報道[7]，二苯乙烯苷已在降血脂等方面顯示出藥理活性，因此將制何首烏對照藥材及二苯乙烯苷作為定性鑒別的指標(biāo)。薄層色譜研究中，曾選定對山楂中熊果酸進行鑒別研究，結(jié)果陰性對照有干擾，故山楂暫不定入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.2含量測定提取方法選擇 含量測定中，供試品溶液提取溶劑選用了甲醇、95%乙醇、30%乙醇3種，但甲醇提取容易使葛根素不易分離，而95%乙醇測得的葛根素含量偏低，參照《中國人民共和國藥典》2010版一部葛根含量測定項下方法，選定30%乙醇作為提取溶劑。提取方法比較了超聲提取和回流提取，結(jié)果同在30 min超聲時間條件下，回流提取所得含量相對更高，故選用回流提取。分別加入30%乙醇25、50、100 mL，結(jié)果在其他條件相同的情況下，加入30%乙醇25 mL所得含量偏小，而50 mL與100 mL的結(jié)果接近，故選用加入30%乙醇50 mL，回流提取30 min作為心安寧片的提取方法。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑：第四冊[S].北京，1991：51.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：312-313，715-716.

[3] 閆春風(fēng)，徐曉偉，李君，等.HPLC測定柴芩軟膠囊中葛根素的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18(18)：98-99.

[4] 黃平，陶秀華，邾枝花.HPLC測定丹葛膠囊劑中葛根素的含量[J].安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報，2012，11(5)：83-84.

[5] 任曉明，趙輝，夏洪穎.HPLC法測定降壓平片中葛根素的含量[J].中國藥師，2012，15(10)：1510-1511.

[6] 劉利敏，胡譯方.HPLC法同時測定葛根芩連片黃芩苷和葛根素的含量[J].安徽醫(yī)藥，2012，16(11)：1598-1599.

[7] 魯堅，侯雙菊，千梅，等.二苯乙烯苷的研究進展[J].安徽化工，2006，141(3)：10-13.

StudiesonQualityStandardofXin’anningTablets

GUOQiang*

(HenanInstituteforFoodandDrugControl，Zhengzhou450003，China)

Objective：To establish the quality standards for Xin’anning Tablets.Methods：TLC was adopted for qualitative identification.The content of puerarin was detected by HPLC.Results：The identifying method of kudzu root and Radix Polygonum Multiflorum was established.The determination method for the content of puerarin was established.The calibration curve of puerarin was liner in the range of 0.212-3.392 μg.The regression equation wasY=4 528 774X-79 624(r=0.999 9).The average recovery was 98.9% and RSD was 2.64%(n=6).Conclusion：The method is simple，accurate and reproducible.It can be used for the quality control.

Xin’anning Tablets；kudzu root；Radix Polygonum Multiflorum；stilene glucoside；puerarin；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.016

2014-07-04)

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郭強，主管藥師，研究方向：藥品檢驗及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；Tel：(0371)63388128，E-mail：35451981@qq.com