繆曉素，宋國(guó)虎，劉容秀，李小麗，徐亮，王文全，張學(xué)文*，魏勝利*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102；2.國(guó)藥集團(tuán)承德藥材有限公司，河北 承德 067000)

·中藥農(nóng)業(yè)·

不同栽培年限及采收期對(duì)黃芩藥材有效成分含量的影響研究△

繆曉素1，宋國(guó)虎2，劉容秀1，李小麗2，徐亮2，王文全1，張學(xué)文2*，魏勝利1*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102；2.國(guó)藥集團(tuán)承德藥材有限公司，河北 承德 067000)

目的：研究不同栽培年限及采收月份對(duì)黃芩藥材有效成分含量的影響，確定最佳采收時(shí)間，為規(guī)范化種植和合理開(kāi)發(fā)利用黃芩提供理論依據(jù)。方法：采用裂區(qū)試驗(yàn)布置田間試驗(yàn)，以采收年限為主因素，采收月份為副因素；采用HPLC測(cè)定黃芩中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素及千層紙素A的含量。結(jié)果：無(wú)論是二年生還是三年生黃芩，其黃芩苷和漢黃芩苷含量最高均出現(xiàn)在春季(5月中旬至6月中旬)，而黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A含量最高峰出現(xiàn)稍晚(6月中旬至7月中旬)。結(jié)論：黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A 5種成分含量最高均出現(xiàn)在5月到7月間，而且二年生和三年生黃芩中成分含量變化規(guī)律相近。此外，三年生黃芩藥材中各個(gè)成分含量在一定程度上均有所提高，但并不明顯。因此，如果以這些成分作為黃芩藥材質(zhì)量的考核指標(biāo)，春季是適宜的采收期。

黃芩；栽培年限；采收期

黃芩為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根，具有清熱燥濕，瀉火解毒，涼血止血，除熱安胎等功效[1]，是臨床最常用的中藥材之一。黃芩含有的活性成分主要是黃酮類(lèi)化合物，例如黃芩苷，黃芩素，漢黃芩苷，漢黃芩素等[2-4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芩具有抗菌抗病毒[5]﹑抗氧化[6]﹑抗腫瘤[7]及對(duì)消化﹑神經(jīng)等系統(tǒng)的保護(hù)作用等活性[8-9]。近年來(lái)，人工栽培黃芩已成為我國(guó)黃芩藥材的主要來(lái)源，在黃芩栽培過(guò)程中，栽培年限和采收期是影響藥材質(zhì)量的重要因素。明確不同栽培年限(目前一般栽培2～3年)和采收時(shí)間對(duì)黃芩藥材質(zhì)量影響對(duì)于確定優(yōu)質(zhì)黃芩的合理采收期具有重要的指導(dǎo)意義[10]。

截至目前，對(duì)于不同采收時(shí)間對(duì)黃芩藥用成分含量影響已有報(bào)道。然而，從研究栽培年限和采收時(shí)間間隔看，還不夠系統(tǒng)，且不同試驗(yàn)報(bào)道的黃芩最佳采收期存在差異[11-14]。此外，對(duì)于考察的藥用成分種類(lèi)也數(shù)量偏少，僅針對(duì)黃芩苷及總黃酮等成分研究[15-17]。因此，本試驗(yàn)針對(duì)二年生和三年生的黃芩藥材，從春季到秋季，每隔15日定期取樣黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A 5種主要活性成分含量的差異，旨在確定黃芩最佳栽培年限和采收期，為今后黃芩規(guī)范化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在黃芩道地產(chǎn)區(qū)承德，采用裂區(qū)設(shè)計(jì)試驗(yàn)，利用1年生苗布置試驗(yàn)，株行距為15 cm×25 cm。以采收年限為主因素，設(shè)置二年生和三年生兩水平，以采收月份為副因素，以采收時(shí)間為因素。在2012年和2013年，分別自4月至10月，設(shè)置14個(gè)水平，取樣時(shí)間分別為4月1日、4月15日、5月1日、5月15日、6月1日、6月15日、7月1日、7月15日、8月1日、8月15日、9月1日、9月15日、10月1日和10月15日。試驗(yàn)期間，各小區(qū)采用一致的田間管理措施，且無(wú)大旱或長(zhǎng)期降雨等極端天氣。

1.2 HPLC含量測(cè)定

1.2.1 儀器與試劑 采用Agilent 1100型高效液相色譜儀系統(tǒng)(G1311A四元泵，G1314A紫外檢測(cè)器，G132813手動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent 1100色譜工作站，G1379A在線脫氣器)；黃芩苷(baicalin)對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所)；漢黃芩苷(wogonoside)、黃芩素(baicalein)、漢黃芩素(wogonin)和千層紙素A(oroxylin A)對(duì)照品購(gòu)自上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司(HPLC>98%)。

1.2.2 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相甲醇(A)-0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫0～10 min，45%A，10～55 min，45%～70%A，55～60 min，70%～45%A；流速1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量10 μL，黃芩對(duì)照品及樣品見(jiàn)圖1。

1.2.3 供試品溶液制備 取黃芩藥材粉末(過(guò)40目篩)0.2 g，精密稱(chēng)定，置于50 mL量瓶中，量取45 mL 70%丙酮加入，60 ℃水浴超聲60 min，冷卻，加70%丙酮定容至刻度，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液5 mL于圓底燒瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑，殘?jiān)眉状既芙獾?0 mL量瓶，定容至刻度。經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得。

1.黃芩苷；2.漢黃芩苷；3.黃芩素；4.漢黃芩素；5.千層紙素A圖1 HPLC色譜圖注：圖中1為黃芩對(duì)照品HPLC圖，2 為黃芩樣品HPLC圖。

2 結(jié)果

2.1 二年生黃芩不同采收月份藥用成分動(dòng)態(tài)變化

圖2a～2b 二年生黃芩不同月份藥用成分含量動(dòng)態(tài)變化

對(duì)二年生黃芩不同月份有效成分含量進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其平均值(因當(dāng)時(shí)樣品混合未做重復(fù))。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(圖2a～2b)，各成分含量變化均呈現(xiàn)雙峰曲線，黃芩苷和漢黃芩苷含量最高出現(xiàn)在春季(5月1日至6月15日)，其中黃芩苷含量在5月15日達(dá)到18.11%，遠(yuǎn)高出《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版一部)規(guī)定的9.0%水平[1]，而同期漢黃芩苷含量達(dá)到了最高為4.86%。黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A的含量最高出現(xiàn)在9月1日，分別為2.13%、0.60%和0.29%。

2.2 三年生黃芩不同采收月份藥用成分動(dòng)態(tài)變化分析

圖3a～3b 三年生黃芩不同月份藥用成分含量動(dòng)態(tài)變化(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

對(duì)三年生黃芩不同月份有效成分含量進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果表明(圖3a～3b)，三年生黃芩在不同月份各種藥用成分的含量呈現(xiàn)顯著差異。對(duì)不同月份成分變化規(guī)律分析發(fā)現(xiàn)，黃芩苷和漢黃芩苷含量最高仍然在春季(5月15日至6月15日)，最高在6月1日，兩種成分含量分別達(dá)到了17.54%±0.90%和4.33%±0.34%。黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A最高峰則出現(xiàn)在了7月1日，三種成分含量分別為2.88%±0.42%、0.67%±0.13%和0.31%±0.04%。

3 結(jié)論與討論

在黃芩生長(zhǎng)旺盛的時(shí)期，不同采收期的黃芩藥材的化學(xué)組成與量的關(guān)系有一定的差異[18]。郭曉艷等[13]表明，采自河北承德的黃芩中黃芩苷含量在6-10月總體呈下降趨勢(shì)。而趙勝男等[17]發(fā)現(xiàn)，赤峰地區(qū)秋季采收的黃芩隨著年份的增長(zhǎng)，其化學(xué)成分含量的比例明顯處于一種動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，從植物學(xué)來(lái)說(shuō)秋季更適宜采收。另外，靳維榮等[14]和張永清等[15]研究發(fā)現(xiàn)，山東地區(qū)的黃芩最佳采收期分別在9月和10月上旬。以上研究顯示出不同地區(qū)栽培的黃芩最佳采收期存在差異。

本試驗(yàn)選取更大時(shí)間跨度(4-10月)和多種成分，試驗(yàn)結(jié)果表明，二年生和三年生的黃芩所含黃芩苷和漢黃芩苷含量最高均出現(xiàn)在春季(5月15日至6月15日)，黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A含量變化略有不同，在夏季和秋季含量較高。分析其原因，主要與春季黃芩地上部分萌發(fā)導(dǎo)致根中儲(chǔ)存的初生代謝產(chǎn)物質(zhì)量減小，從而導(dǎo)致各類(lèi)成分的分布密度(相對(duì)含量)增加有關(guān)，本課題組已經(jīng)從甘草等多種根莖類(lèi)藥材中得到類(lèi)似規(guī)律。綜上所述，如果單從成分含量角度考慮藥材質(zhì)量，其最佳采收期應(yīng)該選取春季，而從藥材產(chǎn)量角度考慮，則秋季比較適宜，總之黃芩的采收期應(yīng)該在確保黃芩藥材質(zhì)量的基礎(chǔ)上，兼顧產(chǎn)量最大化來(lái)綜合選定。

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Effect of different Cultivation Years and Harvesting period ofScutellariabaicalensisonActiveIngredients

MIAO Xiaosu1，SONG Guohu2，LIU Rongxiu1，LI Xiaoli2，XU Liang2，WANG Wenquan1，ZHANG Xuewen2*，WEI Shengli1*

(1.Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China；2.Chengde Pharmaceutical Co.，Ltd.Affiliated to China National phar maceutical gorporation Chengde 067000，China)

Objective：In order to provide a basis for good agriculture practice and exploitation forScutellariabaicalensis，the effect of different cultivation years and havesting period ofS.baicalensison active ingredients was studied.Methods： Split plot was used to design field experiment，the cultivation years was used as a main factor，and harvesting period as factor.The main contents ofS.baicalensiswere determined by HPLC.Results：The highest contents of baicalin and wogonoside of the biennial and three year-oldS.baicalensisappeared in spring (mid-may-mid-June)，and the highest contents of baicalein，wogonin and oroxylin A occurred were later (mid-June-mid-July).Conclusion：The highest content of main compositions appeared from May to July，and the changes between biennial and three year-oldS.baicalensiswere similar.Moreover，the total content of three year-oldS.baicalensisincreased to some extent，but not apparently.Therefore，the suitable time for harvesting was in spring.

ScutellariabaicalensisGeorgi；cultivation period；harvesting period；quality influence

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.8.017

2015-08-05)

國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI07B04)

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魏勝利，副教授、碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源定向培育及中藥資源綜合開(kāi)發(fā)研究，Tel：(010)84738334，E-mail：wsl7491@126.com 張學(xué)文，副研究員，研究方向：中藥材栽培與資源開(kāi)發(fā)研究，Tel：0314-2062209，E-mail：cdyckyb@126.com