張立娟，王康鋒，楊傳華

·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·

電針督脈穴對(duì)高血壓復(fù)合阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及血清一氧化氮和內(nèi)皮素水平的影響

張立娟，王康鋒，楊傳華

目的 探討電針督脈穴對(duì)高血壓復(fù)合阿爾茨海默?。ˋD）大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及血清一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET）水平的影響。方法 雄性Wistar大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、西藥組和電針組，每組10只，采用“兩腎一夾”法制備腎性高血壓大鼠動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ25-35復(fù)制AD模型，西藥組給予鹽酸多奈哌齊和卡托普利灌胃，電針組選取百會(huì)、大椎進(jìn)行針刺，共治療8周。治療前后檢測(cè)其尾動(dòng)脈血壓，對(duì)各組大鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)治療后血清NO、ET水平。結(jié)果 造模前4組大鼠血壓比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后，模型組、西藥組、電針組大鼠血壓較假手術(shù)組升高（P＜0.05）。治療后，模型組、電針組大鼠血壓較假手術(shù)組升高（P＜0.05）；電針組大鼠血壓較模型組降低、較西藥組升高（P＜0.05）。治療后，模型組、西藥組、電針組大鼠4個(gè)方向逃避潛伏期較假手術(shù)組延長(zhǎng)（P＜0.05）；西藥組、電針組大鼠4個(gè)方向逃避潛伏期較模型組縮短（P＜0.05）；電針組大鼠東向和北向逃避潛伏期較西藥組縮短（P ＜0.05）。造模后，模型組、西藥組、電針組大鼠跨臺(tái)次數(shù)較假手術(shù)組減少（P＜0.05）；治療后，模型組、西藥組大鼠跨臺(tái)次數(shù)較假手術(shù)組和電針組減少（P＜0.05）。治療后，假手術(shù)組、西藥組、電針組大鼠NO水平較模型組升高，ET水平較模型組下降（P＜0.05）；假手術(shù)組、西藥組、電針組大鼠血清NO、ET水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。結(jié)論 電針督脈穴能降低高血壓復(fù)合AD大鼠尾動(dòng)脈血壓，改善AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，提高NO水平，降低ET水平，提示其療效機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮因子有關(guān)。

電針；高血壓；阿爾茨海默病；一氧化氮；內(nèi)皮素

張立娟，王康鋒，楊傳華.電針督脈穴對(duì)高血壓復(fù)合阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及血清一氧化氮和內(nèi)皮素水平的影響［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18（3）：317-321.［www.chinagp.net］

Zhang LJ，Wang KF，Yang CH.Effects of electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel on learning and memory ability，serum levels of nitric oxide and endothelin in rats with hypertension combined with Alzheimer′s disease［J］.Chinese General Practice，2015，18（3）：317-321.

同行評(píng)議：

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓也是阿爾茨海默病的主要危險(xiǎn)因素之一，老年患者的認(rèn)知功能障礙至少部分與高血壓相關(guān)。針刺療法是祖國(guó)醫(yī)學(xué)的瑰寶，因其安全有效，已得到越來(lái)越多醫(yī)生和患者的喜愛(ài)，而督脈作為奇經(jīng)八脈之一，被稱(chēng)為“陽(yáng)脈之?！?，因其走行上的特殊性，與腦的關(guān)系得到中醫(yī)學(xué)者廣泛肯定，被稱(chēng)為“廣義上的腦”。針刺督脈穴位對(duì)阿爾茨海默病的療效已得到大量的臨床驗(yàn)證，但相關(guān)的基礎(chǔ)研究仍很薄弱，雖然有相關(guān)文獻(xiàn)指出一氧化氮和內(nèi)皮素與阿爾茨海默病相關(guān)，亦有相關(guān)文獻(xiàn)證實(shí)針刺降壓的機(jī)制與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮因子有關(guān)，但是對(duì)于針刺治療阿爾茨海默病的機(jī)制與一氧化氮和內(nèi)皮素相關(guān)的研究比較少見(jiàn)。本研究復(fù)制出高血壓復(fù)合阿爾茨海默病動(dòng)物模型，通過(guò)對(duì)大鼠血壓變化、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、血清一氧化氮和內(nèi)皮素水平的分析，驗(yàn)證電針督脈穴對(duì)高血壓復(fù)合阿爾茨海默病模型大鼠的治療作用，并探討電針督脈穴治療高血壓復(fù)合阿爾茨海默病的作用機(jī)制，具有一定的創(chuàng)新性。

阿爾茨海默病 （Alzheimer′s disease，AD）是一種發(fā)生于中老年的原發(fā)性退行性腦變性疾病。本病致殘率高、死亡率高，隨著人口老齡化的加劇，AD引起的社會(huì)問(wèn)題和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題日益突出。但是，本病發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓也是AD的主要危險(xiǎn)因素之一，老年患者的認(rèn)知功能障礙至少部分與高血壓相關(guān)［1-3］。針灸作為一種非藥物療法對(duì)高血壓及AD的治療效果已得到廣泛肯定，但目前文獻(xiàn)報(bào)道大多僅停留于臨床觀察階段，基礎(chǔ)研究尤其是療效機(jī)制研究仍然十分薄弱，本研究復(fù)制出高血壓復(fù)合AD動(dòng)物模型，觀察電針督脈穴對(duì)高血壓復(fù)合AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及血清一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET）水平的影響，探討針灸療效機(jī)制，以期為臨床應(yīng)用針灸治療AD提供客觀依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物 雄性Wistar大鼠60只，清潔級(jí)，鼠齡8～12周，體質(zhì)量200～250 g，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供 （許可證號(hào)：SCXK魯20130001）。

1.2藥品與試劑 鹽酸多奈哌齊片〔安理申，衛(wèi)材（中國(guó)）藥業(yè)有限公司，批號(hào)：130536A〕，卡托普利片（開(kāi)博通，中美上海施貴寶制藥有限公司，批號(hào)：1308032），Aβ25-35 （A4559，規(guī)格：1 mg，Sigma公司），NO、ET試劑盒（EM-1360、ER-1595，北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。

1.3儀器 大鼠血壓心率測(cè)定儀 （RBP-1B型，中日友好臨床醫(yī)學(xué)研究所），多功能生理記錄儀（BL-420E型，成都泰盟軟件有限公司），腦立體定向儀（江灣1號(hào)C型，上海川沙花木農(nóng)機(jī)廠），佳健牌電子針灸治療儀（CMNS6-1型），華佗牌針灸針（直徑0.30 mm×25 mm），Morris水迷宮（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司），洗板機(jī)（AC8型，芬蘭ThermoLabsystems），酶標(biāo)儀 （352型，芬蘭Labsystems MultiskanMS），微量高速離心機(jī) （TG16W，長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司），隔水式恒溫培養(yǎng)箱（GNP-9080型，青島正恒試驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.4分組及造模方法 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字表法抽取10只作為假手術(shù)組，在相應(yīng)造模階段給予與造模大鼠一致的手術(shù)創(chuàng)傷，但不結(jié)扎左腎動(dòng)脈，于海馬區(qū)注射等量0.9%氯化鈉溶液。其余50只大鼠采用“兩腎一夾”法制備腎性高血壓大鼠動(dòng)物模型［4］，具體方法為：2%戊巴比妥鈉（0.25 ml/100 g）腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，四肢和牙齒用橡皮筋固定。用理發(fā)器在大鼠腹部脫毛，5%碘伏消毒腹部，75%乙醇脫碘，蓋上孔巾沿腹正中線作手術(shù)切口打開(kāi)腹腔，按無(wú)菌操作，小心、鈍性分離出左腎動(dòng)脈，然后穿入無(wú)菌絲線，把直徑為0.25 mm的針灸針與腎動(dòng)脈血管長(zhǎng)軸緊貼平行放置，用無(wú)菌絲線扎緊腎動(dòng)脈和針灸針然后抽出針灸針，造成單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄。對(duì)側(cè)腎臟和動(dòng)脈不觸及。術(shù)后3 d內(nèi)青霉素 （3×104U/d）腹腔注射預(yù)防感染，并于7 d后開(kāi)始用尾套法測(cè)量大鼠血壓和心率，重復(fù)3次取其均值，術(shù)后14 d尾動(dòng)脈收縮壓在140 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）以上者［5］為成功的高血壓模型。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)外源性Aβ25-35右側(cè)海馬區(qū)注射復(fù)制AD模型，具體方法為［6］：將麻醉后動(dòng)物頭部固定在立體定向儀上，參照《大鼠腦立體定位圖譜》，選右側(cè)海馬為注射區(qū)，定位坐標(biāo)：前囟后3.0 mm、中線右側(cè)2.0 mm、硬膜下2.6 mm。在坐標(biāo)點(diǎn)周?chē)醚揽沏@環(huán)行鉆開(kāi)顱骨，并分離暴露硬腦膜，緩慢垂直進(jìn)針至靶點(diǎn)，然后將1 μl Aβ25 -35（10 μg/μl）緩慢注入，注射時(shí)間5 min，留針5 min，以保證溶液充分彌散，再緩慢撤針。Morris水迷宮測(cè)試評(píng)價(jià)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，篩選AD模型。選取成功模型，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、西藥組和電針組。

1.5治療方法 電針組從模型成功的第2天起，給予電針治療，方法為：將大鼠固定在固定器內(nèi)，保持清醒狀態(tài)，參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［7］選取百會(huì)（頂骨正中）、大椎 （第7頸椎與第1胸椎間背部正中），用華佗牌30號(hào)1寸毫針，于百會(huì)穴斜刺0.5寸、大椎穴正刺0.5寸，連接電針治療儀，施以疏密波，頻率16 Hz，強(qiáng)度以局部肌肉輕微收縮為度，留針30 min，1 次/d，均在下午進(jìn)行。西藥組給予鹽酸多奈哌齊（0.45 mg/ kg）和卡托普利（2.25 mg/kg）灌胃，1次/d。假手術(shù)組、模型組和西藥組進(jìn)行與電針組相同時(shí)間、相同程度的捉抓刺激。假手術(shù)組、模型組和電針組給予與西藥組等量0.9%氯化鈉溶液灌胃。以上均連續(xù)治療8周。

1.6檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.6.1血壓測(cè)試 采用大鼠尾動(dòng)脈脈搏間接測(cè)壓法，檢測(cè)造模前、造模后、治療后所有大鼠的尾動(dòng)脈血壓，取收縮壓為觀察指標(biāo)，以mm Hg表示，取連續(xù)3次血壓值的平均值為測(cè)量結(jié)果。

1.6.2學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試 大鼠治療前及治療結(jié)束后3 d分別行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)［8］。Morris水迷宮為一恒溫圓形水池，水溫 （25±2）℃，直徑150 cm，高60 cm，水深35 cm，池壁上緣等距離標(biāo)有東、南、西、北4個(gè)入水點(diǎn)，以這4個(gè)入水點(diǎn)將水池等分成4個(gè)象限，水中加墨汁使其不透明，在東北象限的中央放置一直徑為9 cm，高33 cm的平臺(tái)，沒(méi)入水下2 cm，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間其位置保持不變，水池周?chē)鷧⒄瘴?、燈光?qiáng)度也保持不變。（1）定向航行實(shí)驗(yàn)：每天將大鼠依次從東、南、西、北4個(gè)入水點(diǎn)面向池壁放入水池中。記錄90 s內(nèi)動(dòng)物自入水到找到平臺(tái)后四肢爬上平臺(tái)時(shí)所需要的時(shí)間，作為逃避潛伏期。如果大鼠90 s內(nèi)找到平臺(tái)，記錄90 s內(nèi)實(shí)際逃避潛伏期；如果90 s內(nèi)未找到平臺(tái)，由實(shí)驗(yàn)者將其引上平臺(tái)并停留10 s，逃避潛伏期記錄為90 s。每天訓(xùn)練1次，共5 d，第6天進(jìn)行測(cè)試。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：第7天撤走平臺(tái)進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，任選1個(gè)入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入，記錄90 s內(nèi)大鼠跨越原平臺(tái)的次數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束后用ImagePro-Plus系統(tǒng)對(duì)大鼠游泳軌跡錄像進(jìn)行處理。

1.6.3血清NO、ET水平測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，腹主動(dòng)脈取血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)血清NO、ET水平，具體方法參考試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量分析 假手術(shù)組大鼠均全部存活。其余50只大鼠在“雙腎一夾”手術(shù)過(guò)程中死亡6只，術(shù)后7 d存活大鼠40只，血壓從術(shù)后7 d開(kāi)始升高，至術(shù)后14 d收縮壓升高至140 mm Hg以上33只，雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ25-35過(guò)程中死亡2只，最后存活31只，采用隨機(jī)數(shù)字表法選取30只成功模型，分為模型組、西藥組和電針組，最終納入結(jié)果分析的大鼠40只，每組10只。

2.24組大鼠治療前后血壓比較 造模前4組大鼠血壓比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后4組大鼠血壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中，模型組、西藥組、電針組大鼠血壓較假手術(shù)組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后4組大鼠血壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；其中，模型組、電針組大鼠血壓較假手術(shù)組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；電針組大鼠血壓較模型組降低、較西藥組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表1）。

2.34組大鼠治療后學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試結(jié)果 4組大鼠治療后Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)4個(gè)方向逃避潛伏期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中，模型組、西藥組、電針組大鼠4個(gè)方向逃避潛伏期較假手術(shù)組延長(zhǎng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥組、電針組大鼠4個(gè)方向逃避潛伏期較模型組縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；電針組大鼠東向和北向逃避潛伏期較西藥組縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表2）。

4組大鼠造模后及治療后跨臺(tái)次數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；其中，造模后模型組、西藥組、電針組大鼠跨臺(tái)次數(shù)較假手術(shù)組減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后模型組、西藥組大鼠跨臺(tái)次數(shù)較假手術(shù)組和電針組減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表3）。

2.44組大鼠治療后血清NO、ET水平比較 4組大鼠治療后血清NO、ET水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中，假手術(shù)組、西藥組、電針組大鼠NO水平較模型組升高，ET水平較模型組下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；假手術(shù)組、西藥組、電針組大鼠血清NO、ET水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見(jiàn)表4）。

表1　4組大鼠治療前后血壓比較（±s，mm Hg）Table 1 Comparison of levels of BP among 4 groups of rats before and after treatment

表1　4組大鼠治療前后血壓比較（±s，mm Hg）Table 1 Comparison of levels of BP among 4 groups of rats before and after treatment

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與電針組比較，△P＜0.05

組別　只數(shù)　造模前　造模后　治療后假手術(shù)組　10　108±12　115±13　124±20模型組　10　111±11　156±11*　164±24*△西藥組　10　111±14　157±13*　125±22△電針組　10　109±16　157±10*　136±22*F值0.960?。?.001　0.001 0.099　32.244　6.766 P值

表2　4組大鼠治療后　Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)各方向逃避潛伏期比較（±s，s）Table 2 Comparison of Morris water maze test escape latent period in eachdirection among 4 groups of rats after treatment

表2　4組大鼠治療后　Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)各方向逃避潛伏期比較（±s，s）Table 2 Comparison of Morris water maze test escape latent period in eachdirection among 4 groups of rats after treatment

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與西藥組比較，▲P＜0.05

組別只數(shù)　東　南　西　北假手術(shù)組10　14.6±3.4　17.8±6.3　15.7±3.7　13.5±3.4模型組　10　37.8±9.1*　40.3±10.2*　34.7±10.3*　40.3±8.3*西藥組　10　27.8±7.1*△　29.1±10.2*△27.2±6.7*△　31.8±7.3*△電針組　10　21.3±6.0*△▲24.9±6.4*△24.7±7.6*△　24.7±8.8*△▲F值＜0.001　＜0.001?。?.001?。?.001 21.630　12.260　11.010　24.410 P值

表3　4組大鼠造模后及治療后跨臺(tái)次數(shù)比較（±s，次）Table 3 Comparison of frequency of crossing the platform among 4 groups of rats after modeling and treatment

表3　4組大鼠造模后及治療后跨臺(tái)次數(shù)比較（±s，次）Table 3 Comparison of frequency of crossing the platform among 4 groups of rats after modeling and treatment

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與電針組比較，△P＜0.05

組別　只數(shù)　造模后　治療后假手術(shù)組10　3.80±0.79　3.90±0.88模型組　10　2.30±0.95*　2.10±0.99*△西藥組　10　2.00±0.82*　2.90±0.99*△電針組　10　2.40±0.96*　3.90±0.99 F值＜0.001?。?.001 8.230　8.140 P值

表4　4組大鼠治療后血清　NO、ET水平比較?。ā纒）Table 4 Comparison of serum levels of NO and ET among 4 groups of rats after treatment

表4　4組大鼠治療后血清　NO、ET水平比較?。ā纒）Table 4 Comparison of serum levels of NO and ET among 4 groups of rats after treatment

注：NO=一氧化氮，ET=內(nèi)皮素；與模型組比較，*P＜0.05

組別　只數(shù)　NO（μmol/L）　ET（pg/ml）假手術(shù)組　10　64±11*　174±15*模型組　10　41±11　208±11西藥組　10　60±12*　174±21*電針組　10　54±13*　183±19*F值＜0.001?。?.001 7.630　8.800 P值

3　討論

目前，AD發(fā)病率逐年升高，高血壓是AD的主要危險(xiǎn)因素之一，本研究模擬臨床AD患者先出現(xiàn)血壓升高，之后發(fā)生腦組織損害、學(xué)習(xí)記憶能力下降的病理過(guò)程，在復(fù)制高血壓模型的基礎(chǔ)上，再?gòu)?fù)制AD模型，建立高血壓復(fù)合AD模型。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，模型組血壓升高，學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退，模型制作成功。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為AD的發(fā)生與腎精虧虛、髓海失充有關(guān)，病位在腦，而督脈循行上“貫脊屬腎”“入絡(luò)腦”，其所屬穴位大部分可以治療腦部疾病，故有“病變?cè)谀X，首取督脈”之說(shuō)。黃琴峰等［9］總結(jié)發(fā)現(xiàn)，AD的針刺治療以體針為主，常取督脈穴，其占各經(jīng)穴次之首，百會(huì)、大椎等多被選作主穴。現(xiàn)代眾多醫(yī)家采用百會(huì)、大椎為主治療AD亦取得了理想的治療效果［10-11］。百會(huì)為“三陽(yáng)五會(huì)”，位居巔頂，有醒腦益智、開(kāi)竅醒神之功，大椎為 “諸陽(yáng)之會(huì)”，為手足三陽(yáng)經(jīng)之脈氣交會(huì)之處，電針此二穴，可疏通氣血、通調(diào)督脈、醒腦開(kāi)竅、益智復(fù)聰［5］。同時(shí)，百會(huì)、大椎穴性屬陽(yáng)，能通達(dá)陰陽(yáng)脈絡(luò)，連貫周身經(jīng)穴，調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽(yáng)平衡，有降壓之效［12-13］。本研究選擇電針百會(huì)、大椎治療高血壓復(fù)合AD，結(jié)果顯示，電針百會(huì)、大椎可以縮短Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期時(shí)間，增加跳臺(tái)次數(shù)，改善AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，療效優(yōu)于西藥組，同時(shí)可以降低血壓，但降壓幅度不如卡托普利。推測(cè)其療效機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮因子有關(guān)。

NO和ET是常見(jiàn)的血管內(nèi)皮因子，NO具有強(qiáng)有力的擴(kuò)張血管、降低血壓、抑制血小板黏附和聚集等作用，是已知的具有抗高血壓作用的保護(hù)性因子［14］；ET有強(qiáng)烈的收縮血管和升高血壓的作用，是迄今為止所知的體內(nèi)最強(qiáng)烈持久的血管收縮因子［15-17］。正常情況下，NO、ET兩者保持動(dòng)態(tài)平衡，共同維持血管張力，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，而在病理狀態(tài)下兩者動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)，導(dǎo)致血壓升高。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮功能障礙與AD的發(fā)生也有關(guān)系［18-19］。NO是神經(jīng)系統(tǒng)重要的信號(hào)分子，與AD發(fā)病的Aβ沉積、tau過(guò)磷酸化等病理過(guò)程密切相關(guān)，其通過(guò)調(diào)節(jié)AD的微血管損傷和氧化應(yīng)激，影響AD的發(fā)生和發(fā)展［20］。有研究證實(shí)，AD患者血清NO水平較健康對(duì)照組降低［21］，ET水平則高于健康對(duì)照組［22］。本研究結(jié)果顯示，電針督脈穴后AD大鼠血清NO水平升高，ET水平下降，提示電針督脈穴治療高血壓和AD的機(jī)制與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮因子有關(guān)，但是電針對(duì)其他調(diào)節(jié)元素的作用仍不清楚，亟待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

本課題人員貢獻(xiàn)：張立娟負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和論文撰寫(xiě)，王康鋒和張立娟負(fù)責(zé)具體實(shí)驗(yàn)實(shí)施和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，楊傳華負(fù)責(zé)論文的審校及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制。

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（本文編輯：陳素芳）

Effects of Electroacupuncture at Acupoints of the Governor Vessel on Learning and Memory Ability，Serum Levels of Nitric Oxide and Endothelin in Rats with Hypertension Combined with Alzheimer′s Disease

ZHANG Li-juan，WANGKang-feng，YANG Chuan-hua.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong Academy of Traditional Chinese Medicine，Ji′nan 250014，China

Objective To investigate the effects of Electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel on learning and memory ability，serum levels of nitric oxide（NO）and endothelin（ET）in rats with hypertension combined with Alzheimer′s disease（AD）.Methods 40 male Wistar rats were divided into 4 groups equally by random number table method：pseudo operation group，model group，medication group and EA group，10 rats in each group，renal hypertensive rats model was established using the＂two kidney one clip＂method，then bilateral hippocampal region of rats was injected with Aβ25-35，thus rats model of renal hypertension and AD was established.Rats in medication group were intragastric administrated with donepezil hydrochloride and captopril，while rats in EA group underwent electroacupuncture at Baihui（GV 20）and Dazhui（GV 14）for 8 weeks.The tail artery blood pressure was detected before and after treatment，Morris water maze test was performed，serum levels of NO and ET after treatment were measured by ELISA method.Results There was no significant difference in blood pressure among four groups of rats（P＞0.05）.After modeling，the blood pressure of rats in model group，medication group and EA group was significantly higher than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）.After treatment，the blood pressure of rats in model group and in EA group was significantly higher than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）；however，the blood pressure in EA group was significantly lower than in model group，and significantly higher than that in medication group（P＜0.05）.After treatment，the escape latent period in every direction of rats in model group，medication group and EA group was significantly longer than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）；the escape latent period in every direction of rats in medication group and EA group was significantly shorter than that in model group（P＜0.05）；the escape latent period in east and north direction of rats in EA group was significantly shorter than that in medication group（P＜0.05）.After modeling，frequency of crossing the platform of rats in model group，medication group and EA group was significantly decreased than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）；after treatment，frequency of crossing the platform of rats in model group and medication group was significantly decreased than that in pseudo operation group and EA group，respectively（P＜0.05）.After treatment，the NO level in pseudo operation group，medication group and EA group was significantly higher than that in model group，respectively；while ET level in pseudo operation group，medication group and EA group was was significantly lower than that in model group，respectively（P＜0.05）.There was no significant difference in serum levels of NO and ET among pseudo operation group，medication group and EA group（P＞0.05）.Conclusion Electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel can reduce blood pressure of rats with hypertension combined with AD，improve their learning and memory ability，increase NO level and reduce ET level，which suggest that the effect mechanism may be related to regulating the vascular endothelial growth factor.

Electroacupuncture；Hypertension；Alzheimer′s disease；Nitric oxide；Endothelin

R 544.1 R743

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.03.017

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目（81303028）；山東省博士后創(chuàng)新項(xiàng)目（201301006）；山東省科技發(fā)展計(jì)劃（2014GSF119038）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃（2013-044，2013-126）

250014山東省濟(jì)南市，山東中醫(yī)藥大學(xué)2012級(jí)博士研究生，山東省中醫(yī)藥研究院（張立娟）；山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，高血壓國(guó)家臨床研究基地（王康鋒，楊傳華）

楊傳華，250014山東省濟(jì)南市，山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，高血壓國(guó)家臨床研究基地；

E-mail：yangchuanhua1962@126.com

2014-10-03；

2014-12-04）