楊新平（宜春市人民醫(yī)院血液科　宜春 333600）

IL-17、IL-23、VEGF在再生障礙性貧血患者血清中的檢測及其臨床意義*

楊新平**
（宜春市人民醫(yī)院血液科宜春 333600）

目的：探討再生障礙性貧血患者血清中的白細(xì)胞介素-17（IL-17）、白細(xì)胞介素-23（IL-23）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的檢測及其臨床意義。方法：選取2010年1月至2015年1月期間我院血液科住院部40例再生障礙性貧血患者作為研究組，同期選取45例健康體檢者作為對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測血清IL-17、IL-23、VEGF水平，并比較兩組間各水平的差異；采用Pearson相關(guān)性分析這些指標(biāo)間的關(guān)系。結(jié)果：研究組患者血清IL-17、IL-23水平明顯高于對照組，而血清VEGF水平明顯低于對照組；重型者血清IL-17、IL-23水平明顯高于非重型者，而血清VEGF水平則明顯低于非重型者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示，再生障礙性貧血患者血清IL-17與血清IL-23呈明顯的正相關(guān)（r=0.501，P＜0.05），血清IL-17、 IL-23與血清VEGF呈明顯的負(fù)相關(guān)（r=-0.541、-0.559，P＜0.05）。結(jié)論：IL-17、IL-23水平在再生障礙性貧血患者血清中顯著增高，VEGF顯著降低，三者共同參與再生障礙性貧血疾病發(fā)生和發(fā)展的過程。

IL-17IL-23VEGF再生障礙性貧血

再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA）是指由多因素導(dǎo)致骨髓造血微環(huán)境、造血干細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)因子異常，最終形成骨髓造血干細(xì)胞減少，造血功能異常的惡性血液系統(tǒng)疾病[1]。同時(shí)，相關(guān)研究表明，細(xì)胞因子是再生障礙性貧血病情發(fā)生和發(fā)展期間的關(guān)鍵因素[2]。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測血清白細(xì)胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）、白細(xì)胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）水平在AA患者中變化，探討上述細(xì)胞因子在再生障礙性貧血疾病發(fā)生中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2010年1月至2015年1月期間我院血液科住院部40例初診再生障礙性貧血患者作為研究組，其中男28例，女12例，年齡11～67歲，平均年齡（34.85±6.24）歲，重型再生障礙性貧血19例，非重型再生障礙性貧血21例，全部患者符合再生障礙性貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，排除合并肝腎功能障礙、合并其他造血系統(tǒng)疾病和精神性疾病患者。同期選取45例健康體檢者作為對照組，其中男30例，女15例，年齡12～65歲，平均年齡（35.01±6.09）歲，排除心肝腎功能障礙和惡性疾病患者。兩組患者在性別、年齡等一般資料間的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2檢測方法

檢測試劑與儀器：IL-17試劑盒和IL-23試劑盒（上海麗臣生物公司），VEGF試劑盒（美國R&B公司），ELX800酶標(biāo)儀、ELX洗板儀（美國BIO-Tek公司），LDZ5-2型離心機(jī)（北京雷動爾公司），-80 ℃低溫冰箱、振蕩器、溫箱（日本三洋公司）。

檢測方法：采集受檢者清晨空腹外周靜脈血液標(biāo)本2 ml放置于普通干燥管，室溫下自然凝固2 h后，經(jīng)250 r/min離心處理10 min分離血清，-80 ℃下保存，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血清IL-17、IL-23、VEGF水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，將IL-17、IL-23、VEGF抗體包被于ELISA板，加入待測血清，陰性對照和倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)樣品，常溫下孵育，磷酸緩沖液（PBS）洗滌后滴加酶標(biāo)抗體，常溫下孵育，PBS洗滌。采用底物顯色劑顯色，終止反應(yīng)后采用酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度OD值，以標(biāo)準(zhǔn)樣品稀釋液濃度作為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品OD值作為縱坐標(biāo)繪制IL-17、IL-23、VEGF標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值和稀釋倍數(shù)計(jì)算對應(yīng)的IL-17、IL-23、VEGF含量。

1.3觀察指標(biāo)

比較兩組間血清IL-17、IL-23、VEGF水平的差異。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩組間的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，兩樣本變量間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析處理，P＜0.05提示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比較

研究組患者血清IL-17、IL-23水平明顯高于對照組，而血清VEGF水平明顯低于對照組，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表1）。

表1　兩組血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比較

2.2不同程度再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比較

重型再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23水平明顯高于、而血清VEGF水平明顯低于非重型再生障礙性貧血患者，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表2）。

表2　不同程度再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比較

2.3血清IL-17、IL-23、VEGF間的相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示，再生障礙性貧血患者血清IL-17與血清IL-23呈明顯的正相關(guān)（r=0.501，P＜0.05，圖1A），血清IL-17與血清VEGF呈明顯的負(fù)相關(guān)（r=-0.541，P＜0.05，圖1B），血清IL-23與血清VEGF呈明顯的負(fù)相關(guān)（r=-0.559，P＜0.05，圖1C）。

圖1　再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23和VEGF水平之間相關(guān)性分析

3　討論

再生障礙性貧血是主要以全血細(xì)胞數(shù)量減少為主的臨床病理綜合征。大量研究證實(shí)，CD4+輔助T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)紊亂與再生障礙性貧血發(fā)病緊密相關(guān)[4]。輔助性T細(xì)胞17（Th17）是一種CD4+輔助T細(xì)胞亞群的常見指標(biāo)之一，其通過產(chǎn)生細(xì)胞因子，后者與免疫細(xì)胞相互作用發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[5]。IL-17、IL-23由輔助性T細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，其中IL-17是輔助性T細(xì)胞分泌調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子之一，IL-23是輔助性T細(xì)胞發(fā)育分化的主要調(diào)控因子[6]。但關(guān)于兩者在再生障礙性貧血患者中的血清水平及其意義研究甚少。VEGF基因位于染色體6P12，全長14 kb，由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成，VEGF表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面。VEGF通過增加血管通透程度，促進(jìn)血管形成，糾正造血細(xì)胞VEGF基因缺乏導(dǎo)致的凋亡和集落生成功能降低。VEGF還可通過與促紅細(xì)胞生成素、粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子相結(jié)合共同促進(jìn)造血細(xì)胞的集落生成[7]。

本研究結(jié)果表明：再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23水平顯著增高，其中IL-17具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IL-6、IL-8和腫瘤壞死因子等，促進(jìn)輔助性T細(xì)胞分化和誘導(dǎo)Tc細(xì)胞活化，由輔助性T細(xì)胞分泌的IL-17含量增加。因此，再生障礙性貧血患者血清IL-17水平顯著增高，其與相關(guān)文獻(xiàn)提及的再生障礙性貧血患者IL-17 mRNA表達(dá)上調(diào)具有高度一致性[8]。其次，IL-23由抗原提呈細(xì)胞分泌，其通過與成熟輔助性T細(xì)胞表面IL-23受體相結(jié)合，調(diào)控輔助性T細(xì)胞分化和功能，促進(jìn)T細(xì)胞，紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生干擾素和白介素-12，參與樹突狀細(xì)胞的共同刺激功能，其與炎癥和腫瘤性疾病顯著相關(guān)。小鼠缺乏IL-23基因后體液免疫系統(tǒng)嚴(yán)重受損，IL-23缺失的促紅細(xì)胞生成素刺激T輔助細(xì)胞分泌能力顯著降低[9]。再生障礙性貧血通過刺激輔助性T細(xì)胞異常分泌IL-17，刺激腫瘤壞死因子，干擾素和白細(xì)胞介素-12的異常分泌，促進(jìn)Th1/Th2失調(diào)，導(dǎo)致T細(xì)胞功能紊亂，調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞發(fā)育分化的調(diào)控因子IL-23含量增高。因此，再生障礙性貧血患者血清IL-23水平顯著增高。再生障礙性貧血患者由于骨髓造血功能障礙，骨髓血管生成能力減弱，血管通透性降低，供血供氧減少，新生血管形成能力減弱，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）分泌量減少，因此，再生障礙性貧血患者血清VEGF顯著降低。本研究還發(fā)現(xiàn)，重型再生障礙性貧血患者IL-17、IL-23增高程度更顯著，而VEGF降低水平更為明顯，三者水平改變在評估再生障礙性貧血病情程度中具有重要的意義，其中IL-17、IL-23水平越高，提示再生障礙性貧血病情較為嚴(yán)重，而VEGF水平越高則提示疾病病情較輕[10]。本研究經(jīng)相關(guān)性分析表明，再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23呈明顯的正相關(guān)，而兩者與血清VEGF呈明顯的負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了再生障礙性貧血患者血清IL-17、IL-23水平越高，疾病病情越嚴(yán)重；反之，血清VEGF水平越低，疾病病情越嚴(yán)重。

綜上所述，IL-17、IL-23水平在再生障礙性貧血患者血清中顯著增高，VEGF顯著降低，三者共同參與再生障礙性貧血疾病發(fā)生和發(fā)展的過程。

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Detection of serum IL-17, IL-23, VEGF in patients with aplastic anemia and its clinical significance*

YANG Xinping**
(Department of Hematology, The People Hospital of Yichun City, Yichun 333600, China)

Objective: To investigate the detection of serum IL-17, IL-23, VEGF in patients with aplastic anemia and its clinical significance. Methods: Forty cases of inpatients with aplastic anemia from January, 2010 to January, 2015 in our Department were selected as a research group while 45 healthy persons as a control group in the same period. Serum IL-17, IL-23 and VEGF levels were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results were compared between two groups and the relationship between serum IL-17 and IL-23 levels, IL-17 or IL-23 and VEGF levels were analyzed by Pearson correlation. Results: The levels of serum IL-17 and IL-23 were significantly higher while the serum VEGF levels were significantly lower in the research group than in the control group. The results were same when compared between the patients with severe and non-severe aplastic anemia and the differences had statistical significance (P<0.05). The Pearson correlation analysis showed that serum IL-17 and IL-23 levels were positive correlated (r=0.501, P<0.05) while serum IL-17 or IL-23 and VEGF levels showed a significant negative correlation (r=-0.541, -0.559, P<0.05). Conclusion: IL-17, IL-23 levels increase significantly while VEGF levels decrease significantly in patients with aplastic anemia, and three indexes together participate in the occurrence and development process of aplastic anemia disease.

IL-17; IL-23; VEGF; aplastic anemia

R556.5; R446.62

A

1006-1533(2015)13-0034-04

2013年江西省衛(wèi)生廳科研計(jì)劃（普通）課題（2013B012）

**

楊新平（1974-），男， 碩士，副主任醫(yī)師，從事血液科疾病臨床研究。E-mail: xp1002@126.com

2015-03-25）