吳 漪 曲亞南

（廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所包裝材料容器檢驗(yàn)中心）

技術(shù)發(fā)展方向—檢測(cè)技術(shù)

HPLC法測(cè)定三層共擠輸液用袋中抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076含量

吳 漪 曲亞南

（廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所包裝材料容器檢驗(yàn)中心）

目的：建立測(cè)定三層共擠輸液用袋中抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的HPLC方法。方法：采用Inertsil ODS-SP色譜柱（4．6 mm×150 mm，5μm），以乙腈、四氫呋喃、水（60：30：10）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，流速1．5m l／min，柱溫40℃。結(jié)果：抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076分別在1．0166～50．83 mg／L、2．0434～102．17 mg／L和1．02～40．8 mg／L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均為大于0．999。三層共擠輸液用袋提取方法中的抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的平均回收率（n＝9）分別為103．81%（RSD＝7．75%），90．79%（RSD＝3．99%）、92．55%（RSD＝4．21%）。結(jié)論本法簡(jiǎn)便、快速、專(zhuān)屬、靈敏度高，可用于三層共擠輸液用袋的產(chǎn)品質(zhì)量控制。

抗氧劑高效液相色譜三層共擠膜輸液袋

上世紀(jì)60年代之前中國(guó)大輸液包裝容器幾乎都是玻璃瓶，但是隨著包裝技術(shù)的發(fā)展，新型的包裝材料層出不窮，上世紀(jì)70年代就出現(xiàn)了聚氯乙烯（PVC）軟袋，80年代就引入了硬塑料瓶的生產(chǎn)，而到了90年代，三層共擠膜的輸液袋在我國(guó)生產(chǎn)。如今，三層共擠膜輸液袋因?yàn)槠鋸椥院?、耐高溫、透光性好、阻隔性能好、無(wú)毒性、吸附性小等優(yōu)點(diǎn)，已成了輸液包裝材料未來(lái)發(fā)展的方向之一，越來(lái)越多地應(yīng)用于臨床［1］。

其中三層共擠膜的主要材質(zhì)有聚酯（PET）、聚乙烯（PE）、聚丙烯（PP）、苯乙烯-乙烯-丁烯共聚物（SEB聚合物）等，由于這些材料在成型、儲(chǔ)存和使用的過(guò)程中會(huì)因受到熱、光、電場(chǎng)、射線、金屬離子或化學(xué)介質(zhì)等作用而老化［2］，從而導(dǎo)致抗沖擊強(qiáng)度、抗張強(qiáng)度、伸長(zhǎng)率等物理性能的大幅下降，因此在生產(chǎn)過(guò)程中通常會(huì)加入抗氧劑予以改善，抑制或延緩其老化降解過(guò)程［3］。國(guó)內(nèi)外對(duì)塑料制品中添加的化學(xué)助劑的檢測(cè)，多采用紅外光譜法定性定量分析抗氧劑［4，5］，而 HPLC法較少［6，7］。歐洲藥典中對(duì)于注射制劑包裝用聚丙烯中抗氧劑采用了HPLC方法進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)含量進(jìn)行了嚴(yán)格限定［8］。本文借鑒歐洲藥典的方法，建立一種測(cè)定三層共擠輸液用袋中抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076含量的HPLC方法，為進(jìn)一步研究材料與藥物的相容性奠定了基礎(chǔ)。

1 ．實(shí)驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

島津LC-20A液相色譜儀，包括低壓梯度洗脫泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、LC-solution工作站。

抗氧劑1010：四-［β-（3，5-二叔丁基-4 -羥基苯基）丙酸］季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，SIGMA-ALDRICH，批號(hào)：MKBF3728V，98%

抗氧劑330：，3，5-三甲基2，4，6-三（3，5-二叔丁基-4-羥基芐基）苯，C54H78O3，CAS： 1709-70-2，SIGMA-ALDRICH，批號(hào)：MKBF6188V，99%

抗氧劑1076：β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸正十八碳醇酯，C35H62O3，CAS：2082-79-3，SIGMA-ALDRICH，批號(hào)：MKBB8963V，99%

乙腈、四氫呋喃均為HPLC級(jí)，甲苯和甲醇均為分析純。

三層共擠輸液用袋：三層共擠輸液用袋由企業(yè)A、B、C、D提供。

1．2 樣品制備

1．2 ．1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：稱(chēng)取抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076各60 mg，置于10 ml容量瓶中，用混合液（乙腈：四氫呋喃＝1：1）溶解并定容。從中精密移取2 ml于50 ml容量瓶中，用混合液定容，備用

1．2 ．2 樣品供試液制備：取樣品約2．0 g，精密稱(chēng)量，放置于燒瓶中，加入甲苯80 ml，持續(xù)攪拌，加熱回流1．5 h，冷卻至60℃，在攪拌下加入甲醇120 m l，燒結(jié)玻璃過(guò)濾器濾過(guò)。用甲苯與甲醇（4：6）混合液25 ml沖洗燒瓶和濾渣，將洗液與濾液合并，并用相同的混合液稀釋至250ml，取50 ml在45℃真空蒸干，殘?jiān)?．0 ml的乙腈與四氫呋喃等體積混合液溶解，備用。

1．3 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP 4．6×150 mm，5 μm；流動(dòng)相：乙腈：四氫呋喃：水＝60：30：10；流速：1．5 ml／min；柱溫為室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣體積：20μl。

2 ．結(jié)果與討論

2．1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別取標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品供試液、空白溶液各20μl注入色譜儀，記錄色譜圖，對(duì)照品溶液色譜圖如圖1所示?？梢?jiàn)抗氧劑1010、330、1076的保留時(shí)間分別為4．854 min、5．624 min、9．089 min，空白液在三種抗氧劑出峰位置均無(wú)干擾。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品（A）和樣品（B）的HPLC色譜圖Fig．1．The chromatography of standards（A）and sample（B）峰1-抗氧劑1010；峰2-抗氧劑330；峰3-抗氧劑1076 Peak 1-antioxidant1010，peak 2-antioxidant330，peak 3-antioxidant1076

2．2 線性關(guān)系

將抗氧劑1010標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至1、2、5、10、20、50 mg／L濃度，分別進(jìn)樣20μl，進(jìn)行HPLC測(cè)定。其線性方程為C＝0．0002639178×A+0．1748723，相關(guān)系數(shù)R2＝0．99998，表明在1．0166～50．83 mg／L范圍內(nèi)線性良好。

同理將抗氧劑330標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至2、4、10、20、40、100 mg／L濃度，分別進(jìn)樣20μl，進(jìn)行HPLC測(cè)定。其線性方程為C＝0．000173418×A-0．0698611，相關(guān)系數(shù)R2＝0．99994，表明在2．0434～102．17 mg／L范圍內(nèi)線性良好。

將抗氧劑1076標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至1、2、4、10、20、40 mg／L濃度，分別進(jìn)樣20μl，進(jìn)行HPLC測(cè)定。其線性方程為C＝0．0004266264×A+0．5195387，相關(guān)系數(shù)R2＝0．99999，表明在1．02～40．8 mg／L范圍內(nèi)線性良好。

2．3 精密度試驗(yàn)

取3種抗氧劑的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣20μl，進(jìn)行HPLC的測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)定其峰面積，結(jié)果抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的RSD分別為0．05%，0．04%，0．10%。

2．4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取抗氧劑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在0、0．5、1、2、6、24 h進(jìn)樣20μl，進(jìn)行HPLC測(cè)定其峰面積，結(jié)果抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的RSD分別為0．14%，0．17%，0．19%，表明溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2．5 回收率試驗(yàn)

取已知含量的三層共擠輸液用袋剪碎越2．0 g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，分別精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液（含抗氧劑1010：242．0 mg／L；抗氧劑330：240．8 mg／L；抗氧劑1076：241．6 mg／L）0．1、0．5、1．0 mL，制成低、中、高三種濃度的樣品，每種制備3份，然后按1．2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。結(jié)果抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的回收率分別為103．81%、90．79%、92．55%，RSD分別為7．75%，3．99%，4．21%。

2．6 最低檢測(cè)限與最低定量限

取標(biāo)準(zhǔn)品溶液加混合液稀釋測(cè)定，記錄色譜圖，當(dāng)信噪比S／N為3：1時(shí)，抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的最低檢出限分別為0．25 mg／L、0．15 mg／L、0．60 mg／L。當(dāng)信噪比S／N為10：1時(shí)，抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的最低定量限分別為1．0 mg／L、0．5mg／L、1．0 mg／L。

2．7 樣品的測(cè)定

取不同廠家不同批號(hào)的三層共擠輸液用袋樣品共10批，按1．2．2項(xiàng)下制備供試品溶液進(jìn)行HPLC測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 三層共擠輸液用袋中抗氧劑含量測(cè)定結(jié)果Tab．1．The results of determination of antioxidants in three-layer co-extrusion infusion bags

結(jié)果表明所有樣品的抗氧劑含量均較低，符合歐洲藥典的抗氧劑總量小于0．3%的要求。

3 ．結(jié)論

方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，采用高效液相色譜法測(cè)定三層共擠輸液用袋中抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076的含量，方法準(zhǔn)確可靠，操作較為簡(jiǎn)易，能較好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，易于推廣應(yīng)用。同時(shí)本文測(cè)定了檢測(cè)結(jié)果顯示，三層共擠輸液用袋中抗氧劑含量低，產(chǎn)品安全性較高。

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［8］European Pharmacopoeia 7．0［S］3．1．6．2010．

Determ ination of antioxidant 1010，antioxidant 330 and antioxidant 1076 in three-layer co-extrusion infusion bags by HPLC

Wu Yi Qu Yanan
（Packaging Materials and Containers Test Center of Guangdong Medical Instruments Quality Surveillance and Inspection Institute）

Object：To establish amethod for determination of antioxidant1010，antioxidant330 and antioxidant1076 in three-layer co-extrusion infusion bags by HPLC．Methods：The Inertsill ODS-SP column（4．6 mmx150 mm，5μm）was adopted with themobile phase of acetonitrile：tetrahydrofuran：H20（60：30：10，v／v／v）at a flow rate of1．5 ml／min．The column temperature was25℃．The detection wavelength was280 nm．Results：The linear relationship within the range 1．0166-50．83mg／L．2．0434-102．17 mg／L and 1．02-40．8 mg／L for antioxidant1010，antioxidant330 and antioxidant1076，respectively，was good with the correlation coefficients of all 0．999．The average recoveries of antioxidant 1010，antioxidant 330 and antioxidant1076 were 103．81%（RSD＝7．75%）．90．79%（RSD＝3．99%）．92．55%（RSD＝4．21%），correspondingly．Conclusionηle method is fast，convenient，accurate and can be used for quality control of antioxidants in three-layer co-extrusion infusion bags

santioxidant HPLC three-layer co-extrusion infusion bags

吳漪，女，博士，廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所包裝材料容器檢驗(yàn)中心研究室負(fù)責(zé)人，參與基金項(xiàng)目：廣州市生物醫(yī)用血液凈化材料研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。項(xiàng)目編號(hào)：穗科信字［2013］163-5號(hào)）