時(shí)菲菲 汪燕 張鐸 張亮

摘 要： 本研究采用高效液相色譜法，測(cè)定口服補(bǔ)液鹽泡騰片中有關(guān)物質(zhì)5-羥甲基糠醛含量，以乙腈-水（1：20，V/V）為流動(dòng)相，使用Luna C18柱為色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm，采用本法檢測(cè)5-羥甲基糠醛精密度、穩(wěn)定性良好，平均回收率為98.396%（n=3）、RSD為0.77%，最低檢測(cè)限為1.5ng/mL。5-羥甲基糠醛含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于口服補(bǔ)液鹽泡騰片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜法 5-羥甲基糠醛 口服補(bǔ)液鹽泡騰片

5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-HMF）又稱(chēng)5-羥甲基-2-糠醛，為葡萄糖等單糖的降解產(chǎn)物[1]，廣泛存在于含有糖類(lèi)物質(zhì)的食品和藥品中。有文獻(xiàn)[2]-[4]報(bào)道，5-HMF可能引起血栓性靜脈炎、致突變、促進(jìn)皮膚癌等不良反應(yīng)。在口服補(bǔ)液鹽泡騰片的處方中含有大量葡萄糖，制備中經(jīng)過(guò)烘干過(guò)程，葡萄糖易分解產(chǎn)生5-羥甲基糠醛。《中國(guó)藥典》2015年版二部[5]規(guī)定1%葡萄糖溶液中5-HMF的檢查是在284nm處測(cè)定溶液的吸光度，其值應(yīng)<0.32，當(dāng)其吸光度為0.32時(shí)，5-HMF濃度約為2.5ug/mL。本文建立了5-HMF的HPLC檢測(cè)方法并對(duì)口服補(bǔ)液鹽泡騰片中5-HMF含量進(jìn)行了檢測(cè)。

1.儀器與試藥

1.1儀器

LC-10ATvp（VP）高效液相色譜儀（日本島津）；色譜柱（Luna C18）；JB/T 5374-1991電子天平[梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司]。

1.2試藥

口服補(bǔ)液鹽泡騰片（自制）；5-羥甲基糠醛對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，標(biāo)準(zhǔn)品）；乙腈（色譜純）。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Luna C18（4.6mm×150mm，5μm）柱；流動(dòng)相：乙腈-水（1：20，V/V）；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm；進(jìn)樣量：20uL。在此色譜條件下，取5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照液各20uL注入色譜儀，記錄色譜圖，由圖1可見(jiàn)陰性對(duì)照無(wú)干擾。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖

A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照品

Fig 1 HPLC chromatogram of 5-HMF

A reference；B sample；C blank

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：取5-羥甲基糠醛對(duì)照品12mg，置于1000mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，搖勻。取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2mL、0.35mL、0.7mL、1.2mL、3.0mL，分別置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容并搖勻，5-羥甲基糠醛濃度分別為0.026ug/mL、0.042ug/mL、0.084ug/mL、0.144ug/mL、0.36ug/mL。準(zhǔn)確量取上述五種濃度5-羥甲基糠醛溶液20ul注入液相色譜儀。以峰面積與濃度進(jìn)行線性擬合，得線性方程Y=126720X-178.26，r=0.9995線性范圍：0.026～0.36ug/mL。

2.3精密度試驗(yàn)

配制濃度為0.042ug/mL、0.12ug/mL、0.16ug/mL的三種5-羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每種濃度溶液分別連續(xù)進(jìn)樣3次，每次準(zhǔn)確量取20ul注入高效液相色譜儀，計(jì)算RSD分別為1.08%、0.17%、0.89%。

2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

取線性測(cè)定中濃度為0.1856ug/mL樣品，分別于0，1，2，4，6h進(jìn)樣，每次準(zhǔn)確量取20ul注入高效液相色譜儀，計(jì)算RSD為1.68%，說(shuō)明本品在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取0.5g口服補(bǔ)液鹽泡騰片樣品三份，分別溶解于三個(gè)100mL容量瓶中，再分別加入0.0232mg/mL的5-羥甲基糠醛0.24mL、0.48mL、0.8mL，定容，搖勻。每份溶液分別進(jìn)樣三次，記錄色譜圖，取三次進(jìn)樣平均值，以峰面積由回歸方程計(jì)算出回收率。結(jié)果見(jiàn)表1：

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

Tab 1 Results of recovery tests

2.6最低檢測(cè)限試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取5-羥甲基糠醛對(duì)照品1.5mg置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液。取儲(chǔ)備液1.0mL置于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。再由以上溶液中量取1.0mL置于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定。在信噪比為3的情況下，其檢出限為1.5ng/mL。

3.樣品中5-羥甲基糠醛含量測(cè)定

取口服補(bǔ)液鹽泡騰片樣品三批各1.85g，分別置于100mL容量瓶中，用純凈水溶解并定容。所配儲(chǔ)備液相當(dāng)于1%葡萄糖溶液。精密量取20uL注入液相色譜儀，進(jìn)樣2次并記錄色譜圖，以峰面積由回歸方程計(jì)算5-羥甲基糠醛含量。結(jié)果如表2：

表2 樣品中5-HMF測(cè)定結(jié)果

Tab 2 Results of the sample determination（n=2）

4.討論

利用HPLC法可以準(zhǔn)確5-HMF含量，峰面積和含量之間存在良好的線性關(guān)系，測(cè)定結(jié)果具有較高準(zhǔn)確度，5-HMF回收率達(dá)98.396%。本法不僅適用于口服補(bǔ)液鹽泡騰片中5-HMF含量的測(cè)定，而且可作為其他情況下5-HMF檢測(cè)的依據(jù)，具有較強(qiáng)的現(xiàn)實(shí)意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳立軍.天然藥物化學(xué)[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：73-74.

[2]Cook AP，Macleod TM.Appleton JD，et al.Reversed-phase high-performance liquid chromatographic method for the quantification of 5-hydroxymethyl furfural as the major degradation product of glucose in infusion fluids [J].J Chromatogr A，1989，467：395-401.

[3]Surh Y，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-Hydroxymethyl furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination [J].Chem Res Toxico，l 1994，7（3）：313-318.

[4]Miyakawa Y，Nishi Y，Kato K，et al.Initiating activity of eight pyrolysates of carbohyates in a two - stage mouse skin tum origenesis model[J].Carcinogenesis，1991，12（7）：1169-1173.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì)中華人民共和國(guó)藥典[S].2015年版，二部.附錄22.