李靜芳，文 麗，周友全，郭鳳麗，楊 麗△

（1.云南省腫瘤醫(yī)院／昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院檢驗科，云南昆明650118；2.會澤縣人民醫(yī)院檢驗科，云南曲靖654200）

成年人最常見的感染性疾病是尿路感染，也是泌尿系統(tǒng)常見的疾病之一。男女比例約為1∶9［1］，尿路感染如果不及時治療常會變成慢性感染，嚴重地影響患者的生活質(zhì)量。尿路感染實驗室診斷的金標準是中段尿細菌培養(yǎng)［2］，對泌尿系統(tǒng)感染的診斷有著非常重要的價值，但是尿液的細菌定量培養(yǎng)從標本的采集、培養(yǎng)到出具報告，耗時比較長，常超過48h，一般是3 d，不能及時地為臨床提供診療依據(jù)。而尿沉渣細菌定量計數(shù)檢查耗時較短，當天可作出診斷。UF－1000i尿有形成分分析儀采用紅色半導體激光、核酸熒光染色、流式細胞等技術進行尿的有形成分分析，通過測定其前向散射光、側向散射光、熒光強度和電阻抗的變化可報告12個參數(shù)，對白細胞、細菌等5種尿有形成分進行定量分析［3］。若尿沉渣細菌定量計數(shù)可作為篩選尿路感染的一項指標，就會為臨床縮短確診時間，及時為患者治療尿路感染。

1 資料和方法

1.1 一般資料 2013年9月至2013年12月臨床疑似尿路感染患者191例，其中女97例，男94例。在帶塞的無菌試管中留取清潔的中段尿10mL 立即送檢，同時進行尿細菌定量培養(yǎng)和UF－1000i尿有形成分分析。

1.2 儀器與試劑 UF－1000i全自動尿有形成分分析儀（日本Sysmex公司產(chǎn)品和配套試劑），哥倫比亞血瓊脂平皿、MAC 平皿和沙保弱平皿（鄭州安圖生物工程股份有限公司）、細菌鑒定使用法國梅里埃公司的Vtike－2 Compact全自動微生物分析儀。

1.3 方法

1.3.1 尿細菌定量培養(yǎng)和菌種鑒定 用1μL 定量接種環(huán)按SOP文件取充分混勻的清潔中段尿一環(huán)接種在哥倫比亞血平皿上，再用相同的方法分別接種MAC 平皿和沙保弱平皿，置于35 ℃孵育箱培養(yǎng)18～24h，用于細菌菌落計數(shù)。若革蘭陽性球菌菌落計數(shù)104CFU／mL 或是革蘭陰性菌菌落計數(shù)105CFU／mL則判斷為尿細菌培養(yǎng)陽性［4］。（當尿中有2 種致病菌生長時，選擇其菌落的計數(shù)接近或者104CFU／mL 的細菌為陽性統(tǒng)計菌，如果有兩種以上的雜菌生長則視為污染）［3］，并對尿培養(yǎng)為陽性的菌落進行進一步的菌種鑒定。

1.3.2 UF－1000i尿有形成分分析 將接種后剩余的尿液在2 h內(nèi)用UF－1000i全自動尿有形成分分析儀進行檢測，記錄白細胞和細菌定量計數(shù)結果。

1.4 統(tǒng)計學處理 將尿細菌培養(yǎng)的結果和尿沉渣分析的結果用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，以細菌培養(yǎng)結果陽性為標準，繪制受試者工作特征曲線（ROC）曲線、計算和分析曲線下面積（AUC），求出尿沉渣白細胞和細菌定量計數(shù)的診斷閾值。

2 結 果

2.1 尿液細菌培養(yǎng)結果 191例尿液標本中有12例培養(yǎng)出3種菌，疑似污染，視為不合格標本。余下179例合格標本中培養(yǎng)陽性為71例，陽性率為39.7%，其中男性標本27 例，女性標本44例。培養(yǎng)結果為：革蘭陰性桿菌50 株，占70.4%（其中大腸埃希菌有41 株，占57.8%），革蘭陽性球菌21 株，占29.6%（其中腸球菌有15株，占21.1%）。

2.2 UF－1000i尿沉渣分析儀檢測白細胞計數(shù)和細菌計數(shù)的ROC曲線 用UF－1000i檢測179例尿標本，白細胞計數(shù)和細菌計數(shù)結果用SPSS17.0統(tǒng)計軟件繪制篩選尿路感染的ROC曲線。見圖1。以ROC 曲線的左上角距離最近點，即約登（Youden）指數(shù)最大者作為最佳陽性的判斷值。UF－1000i尿沉渣分析儀用于診斷尿路感染的閾值，細菌計數(shù)為1 024.5個／微升，白細胞計數(shù)為135.8個／微升，細菌和白細胞的AUC 分別為0.946和0.713。見表1。

圖1 UF－1000i檢測尿液白細胞和細菌的ROC曲線

表1 白細胞和細菌定量的ROC曲線指標

2.3 UF－1000i尿沉渣分析儀結果 以細菌計數(shù)1 024.5個／微升和白細胞計數(shù)135.8個／微升為診斷閾值。179例標本檢出細菌陽性59例，白細胞陽性45例。兩者與尿細菌定量培養(yǎng)之間的關系詳見表2。根據(jù)上述的檢測結果制作三線表，可計算出在該診斷閾值下的細菌和白細胞計數(shù)及其聯(lián)合應用于診斷尿路感染的評價數(shù)據(jù)，結果見表3。

表2 UF－1000i檢測白細胞數(shù)、細菌和與尿定量細菌培養(yǎng)的關系（n）

表3 細菌、白細胞單獨或聯(lián)合在篩選尿路感染中的價值（%）

3 討 論

實驗室診斷尿路感染的金標準一直以來都是中段尿尿細菌定量培養(yǎng)，但是從培養(yǎng)到出具報告，時間均在2d以上，耗時長，費用高。本試驗按照尿中革蘭陽性球菌菌落計數(shù)104CFU／mL，或是革蘭陰性菌菌落計數(shù)105CFU／mL判斷為尿細菌培養(yǎng)陽性，作為尿路感染的診斷標準。在179份尿標本中有71份標本細菌培養(yǎng)為陽性，陽性率為39.7%，其中革蘭陰性桿菌占70.4%，尤以大腸埃希菌多見（57.8%）；革蘭陽性球菌21株，占29.6%，以腸球菌多見（21.1%）。因為尿細菌培養(yǎng)可直接查到患病的病原，所以在本試驗中作為標準。

UF－1000i全自動尿有形成分分析儀采用紅色半導體激光、核酸熒光染色技術、流式細胞等技術，對尿液有形成分進行多角度散射光、多級別熒光和電子基團的檢測，而且UF－1000i的檢測通道是雙通道，分別為沉渣通道和細菌通道，單獨的細菌通道可以對細菌進行特異性的核酸熒光染色，有效地避免了其他成分的干擾，使UF－1000i對細菌的檢出和定量更為準確［5］。有文獻報道，對尿液細菌計數(shù)UF－1000i具有良好的重復性和線性［6］。

根據(jù)尿沉渣分析和尿培養(yǎng)結果繪制ROC曲線得出診斷尿路感染的閾值，細菌計數(shù)為1 024.5 個／微升，白細胞計數(shù)為135.8個／微升，細菌和白細胞的AUC分別為0.946和0.713。AUC越接近1，說明診斷效果越好。AUC在0.5～0.7時有一定的準確性；AUC在0.9以上有較高的準確性。

從表3 可以看出，作為獨立的檢測項目，細菌計數(shù)（1 024.5個／微升）要比白細胞計數(shù)（135.8個／微升）的診斷性能更好。單獨以細菌作為篩查指標時，其靈敏度為78.9%，特異度為97.2%，陽性預測值為94.9%，陰性預測值為87.5%，假陽性率為2.8%，假陰性率為21.1%，準確性為89.9%。UF－1000i細菌計數(shù)在臨床使用中存在21.1%假陰性，分析其病原菌時發(fā)現(xiàn)有6株腸球菌和4株牛鏈球菌，此類細菌在同類研究假陰性標本中也有發(fā)現(xiàn)［7］。在感染早期，腸球菌類細菌因為生長的營養(yǎng)要求比較高會造成尿標本細菌計數(shù)結果偏低而呈假陰性。其中存在2.8%的假陽性，筆者分析其原因可能是：（1）儀器將其他有形成分誤認為是細菌。（2）患者已服用過抗菌類藥物，菌量過少或被抑制不能培養(yǎng)出來。單獨以白細胞為篩查指標時，其靈敏度為44.9%，特異度為87.0%，陽性預測值為68.9%，陰性預測值為71.2%，假陽性率為13.0%，假陰性率為55.1%，準確性為69.8%。所以白細胞計數(shù)對尿路感染的診斷起到了一定的作用，但假陰性率較高。當白細胞發(fā)生變性、崩解或聚集成團時，易被儀器誤認，從而導致前向散射光和熒光強度的改變，使檢測結果為假陰性，可致尿白細胞漏檢［8］。當兩者聯(lián)合檢測，以滿足其中任一條件作為尿路感染的篩查指標時，雖然靈敏度有所提高，但假陽性也跟著上升，陽性患者不能被及時有效地診斷。當以同時滿足兩者的條件作為篩查尿路感染的指標時，可得到較好的診斷效果，特異度達98.1%，準確度達83.8%，陽性預測值達95.7%，陰性預測值為79.6%，但假陰性也高達37.5%，表明在臨床使用中漏檢的概率也很高。

本試驗中得出診斷尿路感染的閾值為細菌計數(shù)1 024.5個／微升和白細胞計數(shù)135.8個／微升，和文獻報道中所得閾值細菌計數(shù)2 944.5個／微升和白細胞計數(shù)91.5個／微升有所差異［3］。筆者分析其原因可能是：（1）收集的尿液總樣本量較少，采集的標本以住院患者為主，細菌計數(shù)的數(shù)據(jù)主要集中在0～5 000個／微升，白細胞計數(shù)主要集中在0～100個／微升，得到的數(shù)據(jù)不呈正態(tài)分布。（2）不同細菌的營養(yǎng)要求和生長速度有差異。（3）尿培養(yǎng)和尿細菌定量的測定存在有時間差，會對結果造成一定的影響。

綜上所述，對臨床疑似尿路感染的標本，UF－1000i全自動尿有形成分分析儀能夠快速有效地進行檢測，細菌和白細胞計數(shù)的聯(lián)合分析可篩除大部分陰性結果，對尿細菌培養(yǎng)的陽性預測性高，可降低檢驗成本和減輕工作負擔，但存在一定的假陰性，故不可替代尿細菌培養(yǎng)。

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