徐 陽(yáng)，張彥平，張 磊，王香玲，王金華

（西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安710004）

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的，在各種類型的病毒性肝炎中，乙型肝炎對(duì)人類健康的危害最為嚴(yán)重。乙型肝炎病毒感染在成年后通常是自限性的，慢性持續(xù)性感染的病毒都是圍產(chǎn)期時(shí)獲得的。控制感染和肝細(xì)胞的損傷都是嚴(yán)格依賴于保護(hù)性免疫反應(yīng)，因?yàn)闄C(jī)體內(nèi)肝細(xì)胞最主要的作用之一就是消除細(xì)胞內(nèi)的病毒［1］。慢性乙型肝炎病毒感染者的疾病進(jìn)展和遠(yuǎn)期預(yù)后取決于其體內(nèi)的病毒水平，慢性乙型肝炎患者肝硬化、肝硬化失代償及原發(fā)性肝癌的發(fā)生率和血清病毒載量呈正相關(guān)［2］。Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀，其采用專用檢測(cè)通道，加入特殊的白細(xì)胞計(jì)數(shù)分類溶血?jiǎng)┖途鄞渭谆鶡晒馊旧海⊿FL）。DIFF通道中縱坐標(biāo)表示側(cè)向熒光強(qiáng)度，反映每個(gè)細(xì)胞核酸含量；橫坐標(biāo)表示側(cè)向散射光，反映每個(gè)細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度。根據(jù)每個(gè)細(xì)胞的上述兩項(xiàng)數(shù)值，可得到中性粒細(xì)胞參數(shù)Neut－Y、Neut－X 和 淋 巴 細(xì) 胞 參 數(shù)Lymph－Y、Lymph－X。本研究旨在探討乙型肝炎病毒感染患者Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀DIFF通道白細(xì)胞散點(diǎn)圖研究性參數(shù)的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2014年7～10月于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院感染科門診初診為乙型肝炎病毒感染的96例患者作為觀察組，以乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽(yáng)性且乙型肝炎病毒DNA（HBV－DNA）＞1.0×102IU／mL為診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男56例（58.7%），女40例（41.3%）。同時(shí)隨機(jī)選取同期于本院體檢的健康同齡人100例作為對(duì)照組，HBsAg、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（HBeAb）等乙型肝炎血清學(xué)指標(biāo)均為陰性且HBV－DNA＜1.0×102IU／mL，其中男43例（43.0%）、女57例（57.0%）。兩組在性別、年齡方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

1.2 儀器與試劑 主要儀器包括Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀、羅氏Cobas8000全自動(dòng)生化分析儀、PE－5700核酸擴(kuò)增儀、雅培西門子i－2000（Architect i2000SR）。使用的試劑及試驗(yàn)過(guò)程中所需要的標(biāo)準(zhǔn)液均為原裝配套。

1.3 方法 對(duì)所有乙型肝炎病毒感染患者和對(duì)照組人群進(jìn)行血液采樣，用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝管采集外周血2mL，在2h之內(nèi)采用Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)；本次研究的檢測(cè)方法均嚴(yán)格按照Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀、羅氏全自動(dòng)生化分析儀、PE－5700核酸擴(kuò)增儀、雅培西門子i－2000的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（SOP）文件操作步驟嚴(yán)格操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以中位數(shù)及四分位數(shù)間距（P25，P75）表示，對(duì)觀察組和對(duì)照組間各項(xiàng)指標(biāo)的比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)（Mann－Whitney U 檢驗(yàn)）；指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Spearman的rho非參數(shù)性相關(guān)分析；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 乙型肝炎患者組與健康對(duì)照組一般資料

2 結(jié) 果

2.1 兩組間各項(xiàng)指標(biāo)的比較 觀察組與對(duì)照組間的差異性分析表明，觀察組與對(duì)照組間參數(shù)Lymph－Y 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.030）；觀察組與對(duì)照組間HBV－DNA、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見(jiàn)表2。

表2 兩組間各項(xiàng)指標(biāo)的比較

2.2 Lymph－Y 各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性分析 乙型肝炎病毒感染患者淋巴細(xì)胞參數(shù)Lymph－Y 的變化與HBV－DNA、HBsAg的變化存在一定程度的相關(guān)性，淋巴細(xì)胞參數(shù)Lymph－Y 與HBV－DNA 呈正相關(guān)（r＝0.160，P＝0.026）；淋巴細(xì)胞參數(shù)Lymph－Y 與HBsAg 呈 正 相 關(guān)（r＝0.149，P＝0.037）。見(jiàn)表3。

表3 Lymph－Y 與4項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

一般認(rèn)為乙型肝炎病毒感染者外周血中淋巴細(xì)胞百分率相對(duì)增高。健康人群中，異型淋巴細(xì)胞是極為少見(jiàn)的，但異型淋巴細(xì)胞在病毒感染中卻比較常見(jiàn)［3］。異型淋巴細(xì)胞的形態(tài)分析與比值對(duì)病毒感染的鑒別診斷有很大的指導(dǎo)意義。

已有的研究表明，異型淋巴細(xì)胞的增多與病毒感染有著很大的關(guān)系［4］。乙型肝炎病毒的感染及發(fā)病主要與患者的細(xì)胞免疫功能有關(guān)。在機(jī)體的免疫防御機(jī)制中，乙型肝炎病毒特異性細(xì)胞毒T 淋巴細(xì)胞（CTL）對(duì)清除肝細(xì)胞內(nèi)感染的乙型肝炎病毒可能具有重要作用。在Sysmex XE－2100 血液分析儀的檢測(cè)結(jié)果中如果有淋巴細(xì)胞百分率的增高及出現(xiàn)異性淋巴細(xì)胞增多的提示可以對(duì)病毒性肝炎臨床的診斷提供參考。

Sysmex XE－2100全自動(dòng)血液分析儀是通過(guò)半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞儀原理結(jié)合細(xì)胞化學(xué)熒光染色技術(shù)對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。DIFF通道根據(jù)不同類型及不同成熟度的白細(xì)胞對(duì)熒光染料著色能力的差異，檢測(cè)散射光信號(hào)可以區(qū)分出淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。橫坐標(biāo)是側(cè)向散射光，反映細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度，如核和顆粒等；縱坐標(biāo)是側(cè)向熒光強(qiáng)度，反映細(xì)胞內(nèi)DNA 和RNA 的含量［5］。本次研究發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞參數(shù)Lymph－Y 與異型淋巴細(xì)胞的成熟度有一定的關(guān)系，即異型淋巴細(xì)胞中的幼稚型淋巴細(xì)胞數(shù)增多時(shí)淋巴細(xì)胞參數(shù)Lymph－Y 會(huì)有明顯的增高。

感染乙型肝炎病毒后，患者外周血淋巴細(xì)胞中T 細(xì)胞約占75%，B細(xì)胞占10%～15%。T 細(xì)胞受抗原刺激后，轉(zhuǎn)化為體積較大的母細(xì)胞，形態(tài)不整齊，胞漿增多變寬，常出現(xiàn)胞漿空泡，核增大，染色質(zhì)疏松。B細(xì)胞受抗原刺激后，在T 細(xì)胞的輔助下增殖分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生抗體參與體液免疫。在這過(guò)程中可表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大、大小不一，胞漿變寬而多，胞漿顆粒增多，核增大染色質(zhì)疏松等一列變化［6］。乙型肝炎病毒感染者淋巴細(xì)胞主要變化就是向著細(xì)胞變大、漿內(nèi)顆粒增多變粗的方向發(fā)展［7］。異型淋巴細(xì)胞的增多在Sysmex XE－2100 全血細(xì)胞分析儀中的Lymph－Y 參數(shù)會(huì)有一些相應(yīng)體現(xiàn)，所以對(duì)照組和觀察組Lymph－Y 參數(shù)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.030）。

淋巴細(xì)胞是一種免疫細(xì)胞，當(dāng)異常淋巴細(xì)胞絕對(duì)值增高時(shí)，人體的免疫力就會(huì)相對(duì)減弱，這個(gè)時(shí)期很容易感染一些疾病，早期發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化對(duì)乙型肝炎的治療可以提供一種參考，而且淋巴細(xì)胞散點(diǎn)圖對(duì)乙型肝炎患者體內(nèi)病毒復(fù)制及疾病進(jìn)程判斷及藥物治療轉(zhuǎn)歸也是一種方便的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

本研究基于Lymph－Y 參數(shù)在初診乙型肝炎患者與健康人群中的橫斷面進(jìn)行分析，展現(xiàn)出乙型肝炎病毒感染對(duì)機(jī)體外周血白細(xì)胞參數(shù)的影響。初步顯示出乙型肝炎病毒會(huì)引起反映淋巴細(xì)胞熒光強(qiáng)度的Lymph－Y 參數(shù)的增高。以往的觀點(diǎn)認(rèn)為，病毒與細(xì)菌感染機(jī)體，外周血細(xì)胞分析的主要區(qū)別在于淋巴細(xì)胞百分率和中性粒細(xì)胞百分率的變化。然而，新型的全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀運(yùn)用流式細(xì)胞儀和核酸染色原理進(jìn)行白細(xì)胞分類檢測(cè)時(shí)，可提供出其量化形式的研究性參數(shù)（如：Neut－X、Neut－Y、Lymph－X、Lymph－Y 等），但這些參數(shù)在臨床運(yùn)用中缺乏實(shí)際的證據(jù)支持。本研究著眼于常見(jiàn)且易于確診的病毒種類（乙型肝炎病毒）進(jìn)行了相關(guān)探討。發(fā)現(xiàn)Lymph－Y 指標(biāo)比傳統(tǒng)細(xì)胞分類百分率，如淋巴細(xì)胞百分率，變化更為敏感。這與病毒侵襲機(jī)體而引發(fā)的免疫反應(yīng)有一定的關(guān)系。另則，Lymph－Y 增高提示外周血異型淋巴細(xì)胞增多，這已經(jīng)量化地提示出淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面的改變，而且功能上提示機(jī)體免疫系統(tǒng)針對(duì)乙型肝炎病毒產(chǎn)生免疫反應(yīng)。誠(chéng)然，本研究存在一定的局限性，缺乏縱斷面乙型肝炎病毒感染患者不同病情臨床分期，以及治療前后的分析；缺乏其他肝炎病毒（如丙型肝炎）的比較研究。這些將在日后的觀察研究中進(jìn)行補(bǔ)充。

綜上所述，現(xiàn)代檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展為臨床疾病的診療提供大量準(zhǔn)確的信息，血細(xì)胞分析（血常規(guī)）報(bào)告已經(jīng)不單單是一種細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)的項(xiàng)目，更應(yīng)該提供給臨床醫(yī)生關(guān)于血細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面的信息，往往這些形態(tài)改變的信息與疾病的發(fā)生、變化，以及疾病的治療預(yù)后有非常重要、緊密的關(guān)聯(lián)，需要檢驗(yàn)工作者更多地去發(fā)掘這些良好的指標(biāo)、參數(shù)。

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