李　琳

四君子湯對腸梗阻解除后腸黏膜屏障功能影響的實(shí)驗(yàn)研究

李琳

（天津市南開醫(yī)院第一外科，天津300100）

［目的］利用可復(fù)性機(jī)械性完全性腸梗阻模型，觀察腸梗阻解除后自然恢復(fù)及中藥四君子湯對腸屏障功能的影響。［方法］選用健康大耳白兔，隨機(jī)分為正常對照組、梗阻2 d組、自然恢復(fù)2 d組、中藥治療2 d組、自然恢復(fù)4 d組、中藥治療4 d組，每組6只。對動(dòng)物模型梗阻解除后2 d、4 d時(shí)內(nèi)毒素、腸黏膜損傷評分、小腸上皮層黏膜完整性情況分別進(jìn)行檢測和觀察。［結(jié)果］結(jié)果表明在腸梗阻解除后，內(nèi)毒素水平逐漸降低（P＜0.05），且中藥治療組血漿內(nèi)毒素水平以及Chiu腸黏膜損傷評分明顯低于自然恢復(fù)組（P＜0.05），中藥治療組絨毛表面積明顯高于自然恢復(fù)組（P＜0.05）。［結(jié)論］腸梗阻解除后，中藥四君子湯可有效地修復(fù)損傷的腸黏膜上皮細(xì)胞，防止腸道菌群移位，降低血漿內(nèi)毒素水平，具有保護(hù)腸黏膜屏障的功能。

四君子湯；腸黏膜屏障；腸功能障礙；內(nèi)毒素；腸黏膜損傷評分

腸梗阻后導(dǎo)致腸屏障功能破壞、腸道菌群易位及內(nèi)毒素血癥是內(nèi)源性感染難以控制的原因之一，而腸梗阻解除后腸屏障功能仍需要一段時(shí)間的恢復(fù)。本研究以可復(fù)性機(jī)械性完全性腸梗阻動(dòng)物模型為研究對象，對腸梗阻解除后腸屏障功能變化的影響，以及中藥四君子湯對于腸屏障功能的保護(hù)作用進(jìn)行進(jìn)一步探討。為臨床在腸梗阻解除后四君子湯的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料健康大耳白兔［由天津市明樂實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（津）07131］，雌雄各半，體質(zhì)量（2.5±0.2）kg。中藥方劑：四君子湯（選自《太平惠民和劑局方》）。由茯苓、人參、白術(shù)、甘草按3∶3∶3∶2比例配伍，水煎煮，濾液濃縮為100%（生藥含量為1 g/mL），滅菌處理，分裝處理，置于4℃保存。以上中藥制劑由天津市南開醫(yī)院藥劑室提供。

1.2實(shí)驗(yàn)方法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體質(zhì)量順序編號(hào)，對應(yīng)產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)，再按隨機(jī)數(shù)大小順序隨機(jī)分為正常對照組、梗阻2 d組、自然恢復(fù)2 d組、中藥治療2 d組、自然恢復(fù)4 d組、中藥治療4 d組，每組6只。應(yīng)用可復(fù)性機(jī)械性完全性腸梗阻動(dòng)物模型［1］。梗阻后48 h，自尿管水囊抽凈5 mL生理鹽水，解除小腸機(jī)械性梗阻。中藥各治療組：給藥劑量參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第3版（人民衛(wèi)生出版社，2002）計(jì)算。解除梗阻后灌胃給藥每日2次，每次5 mL/kg（即5 g/kg生藥）。正常對照組和自然恢復(fù)各組給予等量生理鹽水。分別在梗阻解除后2 d、4 d，家兔自耳緣靜脈給予20%烏拉坦（氨基甲酸乙酯，1 g/kg）麻醉，自門靜脈取血2 mL測內(nèi)毒素。距梗阻部位近端約5 cm，取回腸約5 cm，置于10%中性福爾馬林緩沖液固定。常規(guī)制備小腸全層組織石蠟切片，常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色。

1.3統(tǒng)計(jì)方法使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間兩兩比較時(shí)，若方差齊性采用LSD法，若方差不齊采用Tamhane’s T2法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1血漿內(nèi)毒素水平與正常對照組比較，其他各組均明顯高于正常對照組（P＜0.05）。與梗阻2 d后比較，其他各組均明顯低于梗阻2 d組（P＜0.05）。與自然恢復(fù)組比較，中藥治療組明顯低于自然恢復(fù)組（P＜0.05）。見表1。

2.2Chiu腸黏膜損傷評分結(jié)果與正常對照組比較，除中藥治療4 d組外，其他各組均明顯高于正常對照組（P＜0.05）。與梗阻2 d后比較，自然恢復(fù)4 d組、中藥治療4 d組均明顯低于梗阻2 d組（P＜0.05）。與自然恢復(fù)4 d組比較，中藥治療4 d組明顯低于自然恢復(fù)4 d組（P＜0.05）［2］。見表2。HE染色的結(jié)果表明自然恢復(fù)2 d組腸黏膜上皮絨毛排列高矮不一，絨毛變短、間距增寬，少-中量炎細(xì)胞浸潤，上皮層和固有層中度分離（圖1A）；中藥治療2 d組腸黏膜上皮絨毛排列尚整齊、間距輕度增寬，部分上皮層頂端固有層輕度分離（圖1B）；自然恢復(fù)4 d組腸黏膜上皮絨毛排列高矮不一，絨毛間距增寬，部分絨毛融合呈片狀，固有層充血、水腫，少-中量炎細(xì)胞浸潤，上皮層和固有層中度分離（圖1C）；中藥治療4 d組腸黏膜上皮絨毛排列尚整齊、無萎縮變短、無融合，部分間距輕度增寬（圖1D）。

表1　各組家兔內(nèi)毒素水平Tab.1　The endotoxin levels of rabbits in each groupEU/mL

表1　各組家兔內(nèi)毒素水平Tab.1　The endotoxin levels of rabbits in each groupEU/mL

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與梗阻2 d組比較，#P＜0.05；與自然恢復(fù)2 d組比較，△P＜0.05；與自然恢復(fù)4 d組比較，▲P＜0.05。

分組　n　內(nèi)毒素含量正常對照組　6　60.14±1.51梗阻2 d組　6　99.93±3.05*自然恢復(fù)2 d組　6　89.54±3.35*#中藥治療2 d組　6　80.93±2.65*#△自然恢復(fù)4 d組　6　76.27±2.89*#中藥治療4 d組　6　64.86±3.17*#▲

表2　各組家兔Chiu腸黏膜損傷評分Tab.2　Chiu intestinal mucosa injury score of rabbits in each group分

表2　各組家兔Chiu腸黏膜損傷評分Tab.2　Chiu intestinal mucosa injury score of rabbits in each group分

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與梗阻2 d組比較，#P＜0.05；與自然恢復(fù)4 d組比較，▲P＜0.05。

分組　n　內(nèi)毒素含量正常對照組　6　1.00±0.10梗阻2 d組　6　2.83±0.41*自然恢復(fù)2 d組　6　2.83±0.26*中藥治療2 d組　6　2.33±0.82*自然恢復(fù)4 d組　6　2.03±0.08*#中藥治療4 d組　6　1.25±0.42#▲

2.3小腸黏膜完整性的變化情況與正常對照組比較，梗阻2 d組、自然恢復(fù)2 d組腸黏膜厚度、絨毛高度、絨毛表面積均明顯低于正常對照組（P＜0.05），而其他各組絨毛表面積均明顯低于正常對照組（P＜0.05）。與梗阻2 d后比較，中藥治療4 d組腸黏膜厚度、絨毛高度、絨毛表面積均明顯高于梗阻2 d組（P＜0.05）。與自然恢復(fù)組比較，中藥治療組絨毛表面積明顯高于自然恢復(fù)組（P＜0.05）［3］。見表3。

3　討論

圖1　Chiu腸黏膜損傷的情況（HE染色，×200）Fig.1　The injury of Chiu intestinal mucosa（HE staining，×200）

表3　各組家兔腸黏膜厚度、腸絨毛高度、隱窩深度、絨毛表面積的測定結(jié)果Tab.3　The determination results of thickness of intestinal mucosa，intestinal villus height，crypt depth，villous surface area of rabbits in each group

表3　各組家兔腸黏膜厚度、腸絨毛高度、隱窩深度、絨毛表面積的測定結(jié)果Tab.3　The determination results of thickness of intestinal mucosa，intestinal villus height，crypt depth，villous surface area of rabbits in each group

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與梗阻2 d組比較，#P＜0.05；與自然恢復(fù)2 d組比較，△P＜0.05；與自然恢復(fù)4 d組比較，▲P＜0.05。

分組　n　腸黏膜厚度（μm）　腸絨毛高度（μm）正常對照組　6　316.38±47.78　222.27±34.99梗阻2 d組　6　252.03±16.85*　143.96±20.55*自然恢復(fù)2 d組　6　268.38±12.62*　134.87±32.85*中藥治療2 d組　6　285.32±55.36　173.53±41.63自然恢復(fù)4 d組　6　275.12±51.11　168.86±05.85*#中藥治療4 d組　6　289.84±31.87#　187.39±27.72#分組　n　隱窩深度（μm）　絨毛表面積（mm2）正常對照組　6　084.76±18.20　0.053 8±0.009 1梗阻2 d組　6　073.43±15.90　0.027 3±0.005 4*自然恢復(fù)2 d組　6　074.19±17.97　0.021 3±0.005 2*中藥治療2 d組　6　102.59±33.63　0.029 9±0.007 7*△自然恢復(fù)4 d組　6　072.00±8.16　0.027 3±0.002 5*中藥治療4 d組　6　083.04±11.06　0.039 7±0.009 1*#▲

正常腸屏障功能的維持依賴于腸黏膜上皮屏障（機(jī)械屏障）、腸道免疫系統(tǒng)（免疫屏障）、腸道內(nèi)正常菌群（生物屏障）、腸道內(nèi)分泌物（化學(xué)屏障）、胃腸蠕動(dòng)等，其中防止腸道內(nèi)大量細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物吸收最關(guān)鍵的屏障之一，就是腸黏膜上皮屏障。維持高度抵御性能的腸黏膜屏障必須具有連續(xù)完整和健康的腸黏膜上皮構(gòu)成解剖結(jié)構(gòu)和生理功能［4-6］。

腸為六腑之一，中醫(yī)認(rèn)為六腑是受盛和傳化水谷，其功能瀉而不藏，以通降下行為順，滯塞上逆為病。故提出“六腑以通為用”，“腑病以通為補(bǔ)”的觀點(diǎn)。以往對腸梗阻的研究［7］，主要集中在通里攻下對于腸黏膜屏障的保護(hù)作用，對腸源性膿毒血癥以及多臟器功能障礙綜合癥的治療提供了許多新觀點(diǎn)與新方法。但是，在筆者臨床觀察治療腸梗阻過程中發(fā)現(xiàn)，腸梗阻患者解除梗阻后，往往同時(shí)有虛證的表現(xiàn)，所以提出了應(yīng)用四君子湯改善患者這種虛證狀態(tài)。

四君子湯是健脾益氣的基本方劑，脾氣虛證是以消化系統(tǒng)為中心的多系統(tǒng)、多器官功能障礙證候群［8］。鞠寶玲等［9］研究顯示，四君子湯納米化后能扶植腸道正常菌群生長，修復(fù)損傷的腸黏膜，增強(qiáng)腸黏膜免疫功能，且效果優(yōu)于常態(tài)中藥。張仁嶺等［10］研究顯示四君子湯加味能明顯降低胃腸道手術(shù)后患者血清D-乳酸水平，提示四君子湯加味可改善腸上皮細(xì)胞的功能，維持腸屏障的形態(tài)學(xué)完整性和腸黏膜正常通透性。

中藥四君子湯對腸梗阻解除后腸黏膜屏障保護(hù)作用的機(jī)制可能是：1）增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)，縮短細(xì)菌與腸黏膜的接觸時(shí)間，減少細(xì)菌在腸黏膜表面定植。2）增加胃腸細(xì)胞表面黏液糖蛋白的作用，從而增強(qiáng)腸黏膜屏障作用。3）促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的更新，明顯提高細(xì)胞琥珀酸脫氫酶和空腸細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶的活性，維持腸黏膜的正常結(jié)構(gòu)、細(xì)胞間連接及絨毛高度等完整性，提高空腸上皮細(xì)胞吸收營養(yǎng)物質(zhì)的能力。4）明顯提高腸黏膜血流量，為保護(hù)腸黏膜屏障提供可靠的物質(zhì)運(yùn)送途徑。5）還可對抗氧自由基對腸黏膜的損傷。

綜上所述，四君子湯可通過維持腸黏膜的正常結(jié)構(gòu)，有助于防止腸黏膜萎縮及受損，保持黏膜的機(jī)械性屏障，達(dá)到保護(hù)腸黏膜的完整性，防止或修復(fù)黏膜損傷的功能，進(jìn)而有力地防止腸道菌群易位，降低血漿內(nèi)毒素水平，保護(hù)了腸屏障功能，達(dá)到預(yù)防多器官功能障礙綜合征（MODS）發(fā)生的效果。

［1］李琳，周振理.可復(fù)性機(jī)械性完全性腸梗阻模型的制作［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2009，26（4）：525-527.

［2］Chiu CJ，McArdle AH，Brown R，et al.Intestinal mucosal lesion in low-flow states.I.A morphological，hemodynamic，and metabolic reappraisal［J］.Arch Surg，1970，101（4）：478-483.

［3］王浩，吳國豪，周昭彥，等.不同營養(yǎng)方式對腸道缺血-再灌注大鼠腸屏障功能影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.腸外與腸內(nèi)營養(yǎng)，2004，11（1）：31-35.

［4］Daugherty AL，Mrsny RJ.Regulation of the intestinal epithelial paracellular barrier［J］.Pharm Sci Technolo Today，1999，2（7）:281-287.

［5］Berg RD.Bacterial translocation from the gastrointestinal tract［J］. Adv Exp Med Biol，1999，473（1）:11-30.

［6］張?jiān)平?腸道屏障功能損傷的中醫(yī)藥研究概況［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（1）：86-88.

［7］余建中.“六腑以通為用”與腸黏膜屏障功能［J］.中醫(yī)研究，2006，19（9）：8-9.

［8］施旭光，王閩予，吳美音，等.脾氣虛證4種造模方法的比較研究［J］.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30（2）：196-199.

［9］鞠寶玲，徐艷敏，劉秋梅，等.四君子湯及其納米制劑對脫污染小鼠腸屏障的影響［J］.中藥藥理與臨床，2012，28（2）：10-12.

［10］張仁嶺，張勝華，馮壽全.四君子湯加味對胃腸道手術(shù)后腸黏膜屏障功能的作用［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2006，12（1）：6-9.

（本文編輯：馬英，高杉）

Effects of early application of Sijunzi decoction on intestinal mucosal barrier after relieving obstruction

LI Lin
（Department of No.1 General Surgery，Nankai Hospital of Tianjin，Tianjin 300100，China）

［Objective］The changes of intestinal mucosal barrier after relieving obstruction was investigated.And the effects of early application of Sijunzi decoction on intestinal mucosal barrier after relieving obstruction was assessed.［Methods］The normal rabbits were randomly divided into 6 groups including control group，intestinal obstrution 2 d model group，natural recovery 2 d group，application of Sijunzi decoction 2 d group，natural recovery 2 d group，application of Sijunzi decoction 4 d group.Each group included 6 rabbits.After relieving obstruction the serum endotoxin，Chiu intestinal mucosa injury scores and the integrality of intestinal epithelium was observed by microscope in 2，4 d.［Results］The level of endotoxin was reduced gradually after relieving obstruction.Moreover，the level of endotoxin and Chiu’s histopathological evaluation score was obviously lower in the Sijunzi decoction groups than that in the natural recovery groups（P＜0.05）.The surface area of villus was obviously higher in the Sijunzi decoction groups than that in the natural recovery groups（P＜0.05）.［Conclusion］The Sijunzi decoction can efficiently restore the lesion of intestinal mucous epithelium to block bacterial translocation and to lower the level of endotoxin.Hence，it can obviously protect intestinal mucosal barrier function.

Sijunzi decoction；intestinal mucosal barrier；intestinal dysfunction；endotoxin；Chiu intestinal mucosa injury score

R285.5

A

1672-1519（2015）06-0356-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2015.06.10

李琳（1980-），男，副主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合外科相關(guān)研究。

（2015-03-30）