亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        亳州產(chǎn)丹參藥材UPLC-MS指紋圖譜研究*

        2015-08-26 05:41:26崔維利天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院天津300193
        天津中醫(yī)藥 2015年7期
        關(guān)鍵詞:溶性丹參酮水溶性

        王 洋,石 喆,陳 濤,李 正,崔維利,李 進(jìn)(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,天津300193)

        亳州產(chǎn)丹參藥材UPLC-MS指紋圖譜研究*

        王洋,石喆,陳濤,李正,崔維利,李進(jìn)
        (天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,天津300193)

        [目的]研究和建立亳州產(chǎn)丹參藥材的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(U PL C-M S)指紋圖譜,考察不同批次丹參藥材的質(zhì)量穩(wěn)定性,為全面的評(píng)價(jià)其整體質(zhì)量提供依據(jù)。[方法]采用U PL C-M S法分別對(duì)水溶性成分和脂溶性成分進(jìn)行測(cè)定,對(duì)10批樣品的相似度進(jìn)行計(jì)算分析;對(duì)共有峰進(jìn)行標(biāo)定,并通過M S數(shù)據(jù)對(duì)色譜峰進(jìn)行指認(rèn)。[結(jié)果]建立了10批亳州產(chǎn)丹參藥材中水溶性成分和脂溶性成分的U PL C-M S指紋圖譜,標(biāo)定共有峰18個(gè),其中水溶性成分8個(gè),脂溶性成分10個(gè),鑒定了其中9個(gè)色譜峰的化學(xué)成分,10批樣品的相似度均大于0.90。[結(jié)論]該方法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好,可以用于丹參藥材的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)。

        丹參藥材;液質(zhì)聯(lián)用;指紋圖譜;質(zhì)量控制

        DOI:10.11656/j.issn.1672-1519.2015.07.14

        丹參為唇形科植物丹參(Salviamiltiorrhiza Bge.)的干燥根和根莖,具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消痛的功效[1]。丹參中主要包括水溶性的丹參酚酸類和脂溶性的丹參酮類成分[2]?,F(xiàn)代研究表明,丹參具有多種藥理作用,特別是在治療心腦血管疾病時(shí)[3-7],其時(shí)常作為原料藥單一使用或與其他藥物配伍組成復(fù)方使用[8-13]。丹芪偏癱膠囊為國(guó)家中藥6類新藥,由丹參、黃芪、赤芍等14味藥物組成,主要用于腦梗死的恢復(fù)期[14-15],丹參為其中君藥,主要有效成分既有酚酸類成分,又包括脂溶性的丹參酮類成分。

        丹芪偏癱膠囊中丹參的產(chǎn)地已固定為安徽亳州,目前丹參藥材的企業(yè)質(zhì)量控制方法為2010版《中國(guó)藥典》,采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)藥材中丹酚酸B和丹參酮IIA進(jìn)行含量測(cè)定。而中藥作為復(fù)雜混合體系,其成分組成復(fù)雜,僅以其中的某幾個(gè)成分為指標(biāo)很難全面的表征其化學(xué)特征和控制整體質(zhì)量。指紋圖譜技術(shù)可以對(duì)中藥中的化學(xué)成分進(jìn)行全方位的表征,這正好與中醫(yī)強(qiáng)調(diào)的整體觀念相吻合[16]。本研究采用快速、高效且定性準(zhǔn)確的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS),建立了10批安徽亳州產(chǎn)丹參藥材的指紋圖譜,對(duì)丹參中水溶性及脂溶性成分進(jìn)行了全面分析,通過標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其中主要的指紋峰進(jìn)行了指認(rèn),并通過相似度計(jì)算對(duì)樣品進(jìn)行了評(píng)價(jià),為制定丹芪偏癱膠囊中丹參藥材的全面質(zhì)量控制方法提供了科學(xué)依據(jù)。

        1 儀器與試藥

        Acquity UPLC I-class超高效液相色譜儀、XEVOTQD三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、電噴霧離子化源(ESI)、MassLynx數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司);AG135電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;KQ300DE數(shù)控超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司。

        對(duì)照品丹酚酸B(批號(hào)111562-200504)、丹參素鈉(批號(hào)110855-200809)、隱丹參酮(批號(hào)852-9903)、丹參酮Ⅰ(批號(hào)0867-200104)、丹參酮ⅡA(批號(hào)110766-200417)、迷迭香酸(批號(hào)111871-201001)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;紫草酸(批號(hào)20131203)購(gòu)自上海永恒生物科技有限公司;丹酚酸A(批號(hào)MUST-13020701)、二氫丹參酮Ⅰ(批號(hào)MUST-13082317)購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司;上述標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)構(gòu)式如圖1所示。試劑甲醇(德國(guó)Merck公司)、甲酸(美國(guó)Tedia公司)均為色譜純,其余試劑均為分析純,水為自制超純水。丹參藥材由天津市石天藥業(yè)有限責(zé)任公司提供(均采自安徽省亳州市),由天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院李進(jìn)主任藥師鑒定,為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。丹參藥材的具體產(chǎn)地見表1。

        圖1  9種丹參成分的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structuresofnine chem ical constituents in Danshen

        表1 安徽亳州不同地區(qū)產(chǎn)丹參藥材Tab.1 Danshens’origin in AnhuiBozhou from different habitats

        2 方法與結(jié)果

        2.1色譜條件色譜柱:ACQUITYUPLC?HSST3(2.1mm×100mm,1.7μm)。流動(dòng)相:0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脫,脂溶性成分:0~2min,25%~30%B;2~3min,30%~50%B;3~5 min,50%~60%B;5~10min,60%~70%B;10~15min,70%~80% B;15~16min,80%~25%B;16~18min,25%B;水溶性成份:0~3min,10%~19%B;3~7min,19%~23%B;7~9min,23%~30%B;9~11min,30%B;11~12min,30%~10%B;12~15min,10%B。流速:0.4mL/min;樣品室溫度:20℃;進(jìn)樣體積:5μL;柱溫:水溶性成分30℃,脂溶性成分40℃。

        2.2質(zhì)譜條件電離源:ESI,水溶性成分負(fù)離子掃描,脂溶性成分正離子掃描。脫溶劑溫度:400℃,脫溶劑氣體流量:700 L/h,錐孔電壓:50 V,錐孔氣流量:50 L/h,毛細(xì)管電壓:3 kV,離子源溫度:150℃,質(zhì)量掃描范圍:m/z100~1000。

        2.3溶液制備

        2.3.1對(duì)照品溶液的制備分別取丹酚酸B、丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸A適量,精密稱定,加50%甲醇分別制成約100μg/mL的對(duì)照品溶液;分別取二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA適量,精密稱定,加甲醇分別制成約100μg/mL的對(duì)照品溶液,即得。

        2.3.2供試品溶液的制備取丹參藥材,粉碎,過2號(hào)篩,精密稱定1.0g,置具塞三角瓶中,加入甲醇50mL,超聲40min,過濾,蒸干,用甲醇溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至50mL量瓶中,加甲醇稀釋至50mL,過濾,取續(xù)濾液,即得脂溶性成分供試品溶液。取甲醇超聲濾過后的藥粉殘?jiān)?,加?0%甲醇50mL,超聲40min,過濾,蒸干,用50%甲醇溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至50mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至50mL,過濾,取續(xù)濾液,即得水溶性成分供試品溶液。

        2.4指紋圖譜方法學(xué)考察

        2.4.1精密度實(shí)驗(yàn)取樣品S1 1份,按“2.3.2”項(xiàng)下

        方法制備丹參水溶性及脂溶性成分供試品溶液,精密量取同一供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,考察儀器的精密度。結(jié)果表明,色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%,峰面積的RSD均小于3.0%,說明儀器精密度良好。

        2.4.2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取樣品S1 6份,按“2.3.2”項(xiàng)下方法平行制備丹參水溶性及脂溶性成分供試品溶液各6份,考察方法的重復(fù)性。結(jié)果表明,色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于2.0%,峰面積的RSD均小于3.0%,表明方法重復(fù)性良好。

        2.4.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品S1 1份,按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備丹參水溶性及脂溶性成分供試品溶液,分別在0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè),考察供試品溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果表明,色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.5%,峰面積的RSD均小于3.0%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定[17-19]。

        2.5指紋圖譜的建立與共有峰的確定按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備10批次的丹參水溶性及脂溶性成分供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件及“2.2”項(xiàng)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè),建立丹參藥材中水溶性成分及脂溶性成分的UPLC-MS總離子流色譜指紋圖譜,如圖2所示。將上述10批次藥材的結(jié)果導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”(2004A版),對(duì)亳州產(chǎn)丹參藥材的水溶性成分及脂溶性成分的UPLC-MS總離子流色譜圖譜進(jìn)行匹配。標(biāo)定匹配數(shù)目為10的色譜峰為共有峰,其中水溶性成分8個(gè),脂溶性成分10個(gè),且共有峰的總面積占總峰面積的90%以上。2.6指紋圖譜相似度計(jì)算采用國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”(2004A版)進(jìn)行相似度計(jì)算,結(jié)果見表2和表3。10批丹參藥材的水溶性成分和脂溶性成分的相似度結(jié)果均大于0.90。說明10個(gè)批次丹參藥材的化學(xué)輪廓比較接近,成分比較穩(wěn)定。

        表2  10批藥材水溶性成分指紋圖譜相似度Tab.2 Fingerprrint sim ilarity ofphenolic acids inn 10 batch herbs

        圖2 典型的丹參藥材UPLC-MS總離子流色譜指紋圖譜(S1)Fig.2 TypicalUPLC-MS total ionic chromatographic fingerp rintsof Danshen(S1)

        表3  10批藥材脂溶性成分指紋圖譜相似度Tab.3 Fingerprrint sim ilarity of tanshinones in 10 batchesherbs

        2.7指紋圖譜色譜峰的確認(rèn)采用對(duì)照品對(duì)指紋圖譜中的色譜峰進(jìn)行確認(rèn)。按“2.1”項(xiàng)色譜條件及“2.2”項(xiàng)質(zhì)譜條件,分別進(jìn)樣供試品溶液、對(duì)照品溶液,通過保留時(shí)間和質(zhì)譜信息,確認(rèn)色譜峰,結(jié)果見圖2。

        3 討論

        本研究通過采用UPLC-MS技術(shù)建立了安徽亳州產(chǎn)丹參藥材的總離子流色譜指紋圖譜。通過連續(xù)提取制備供試品溶液,主要考慮與丹芪偏癱膠囊的制備工藝保持一致,以便能最大限度的反應(yīng)藥材的化學(xué)指紋特性。選擇質(zhì)譜作為樣品測(cè)定的檢測(cè)器,可以有效地克服紫外檢測(cè)器的局限性以及蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的不穩(wěn)定性,并且其具有更加準(zhǔn)確的定性能力。在色譜條件的建立時(shí)考察了BEH及HSS T3兩種型號(hào)的色譜柱,結(jié)果表明對(duì)于極性較大的丹參水溶性成分,HSST3具有更好的保留特點(diǎn)和更多的色譜峰數(shù)目。在流動(dòng)相的選擇上,分別考察了甲醇、乙腈、甲酸、乙酸等溶液的組合,兼顧考慮分離及化合物的電離效果,確定以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈溶液系統(tǒng)梯度洗脫效果最佳。質(zhì)譜條件的優(yōu)化主要是考慮主要化合物的響應(yīng)情況,由于酚酸類化合物易產(chǎn)生[M-H]-離子,而丹參酮類化合物易產(chǎn)生[M+H]+離子,所以選擇負(fù)離子模式對(duì)水溶性成分進(jìn)行掃描,選擇正離子模式對(duì)脂溶性成分進(jìn)行掃描。通過文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn),質(zhì)量掃描范圍為m/z100~1 000可以有效地滿足丹參藥材中小分子有機(jī)化合物的分析要求。在此基礎(chǔ)上,再通過優(yōu)化毛細(xì)管電壓、錐孔電壓等質(zhì)譜工作參數(shù),使供試品獲得最大的離子響應(yīng)。

        中藥指紋圖譜可以全面的反應(yīng)其整體化學(xué)信息,避免單一組分的局限性。本研究建立了丹芪偏癱膠囊中君藥丹參中水溶性及脂溶性成分的UPLC-MS總離子流色譜指紋圖譜,共計(jì)標(biāo)定共有峰18個(gè),明確了其中9個(gè)色譜峰的成分。該方法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好,可以有效地控制丹參藥材的整體質(zhì)量。為從源頭上保證丹芪偏癱膠囊質(zhì)量的穩(wěn)定性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010.

        [2]Li YG,Song L,Liu M,et al.Advancement in analysis of Salviae miltiorrhizaeRadixetRhizoma(Danshen)[J].JChromatogr A,2009,1216(11):1941-1953.

        [3]Cheng TO.Danshen:whatevery cardiologistshould know about this Chineseherbal drug[J].Int JCardiol,2006,110(3):411-412.

        [4]王怡,高秀梅,邢永發(fā),等.丹參酚酸B、丹參酮治療心血管疾病的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].上海中醫(yī)藥雜志,2010,44(7):82-87.

        [5]楊征,邱敏,等.丹參酮ⅡA的心血管作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2011,19(4):372-374.

        [6]劉士林.丹參酮保護(hù)心血管疾病的作用機(jī)制進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2015,5(4):32-34.

        [7]焦克勝.丹參抗心血管疾病有效成分的虛擬篩選研究[D].鄭州:鄭州大學(xué),2013:5.

        [8]劉梅,夏鑫華,侴桂新,等.丹參藥材超高效液相色譜指紋圖譜研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,26(6):559-564.

        [9]管敏國(guó),張宇燕,萬海同,等.丹參川芎有效成分配伍對(duì)缺氧損傷大鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J].安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,33(2):74-78.

        [10]黃文東,楊永飛,陳建文,等.丹參素與川芎嗪對(duì)心血管系統(tǒng)的協(xié)同作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013,29(3):432-436.

        [11]顧健,李佳川,譚睿,等.葛根-丹參組方配伍對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化鵪鶉脂質(zhì)代謝的影響[J].中國(guó)中藥雜志,2013,38(22):3939-3942.

        [12]高紅莉,王德才,曲曉蘭,等.黃芪丹參配伍對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織VEGF和bFGFm R NA表達(dá)的影響[J].中藥藥理與臨床,2013,29(5):95-98.

        [13]何增芬.烏腺金絲桃與丹參抗實(shí)驗(yàn)性快速心律失常的配伍研究[D].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),2014.

        [14]Chen C,Venketasubramanian N,Gan R N,et al.Danqi Piantang Jiaonang(DJ),a traditionalChinesemedicine,inpoststroke recovery[J]. Stroke,2009,40(3):859-863.

        [15]Quintard H,Borsotto M,Veyssiere J,etal.MLC901,a traditional Chinese medicine protects the brain againstglobal ischemia[J]. Neuropharmacology,2011,61(4):622-631.

        [16]羅國(guó)安,梁瓊麟,王義明,等.中藥指紋圖譜-質(zhì)量評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制與新藥研發(fā)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2009.

        [17]羅國(guó)安,梁瓊麟,王義明,等.中藥材和飲片的高效液相色譜指紋圖譜鑒別[J].世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2004,6(5):11-16.

        [18]屠鵬飛.中藥材指紋圖譜的建立及技術(shù)要求實(shí)例解說[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2000,1(4):22-29.

        [19]李耿,孟繁蘊(yùn),楊洪軍,等.UPLC法同時(shí)測(cè)定丹參中11種成分的含量[J].中國(guó)藥房,2014,25(19):1766-1768.

        (本文編輯:高杉,滕曉東)

        UPLC-M S fingerprint of Salviam iltiorrhiza Bge.in Bozhou

        WANGYang,SHIZhe,CHEN Tao,LIZheng,CUIWei-li,LIJin
        (The FirstA ffiliated Hospitalof Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China)

        [Objective]To study and establish the UPLC-MS fingerprintof Salviamiltiorrhiza Bge.(Danshen),to investigate the stability of differentbatchesof sample for comprehensive evaluation of the quality of Danshen.[M ethods]The fingerprintof Danshen(including water-soluble phenolic acids and lipophilic tanshinones)was applied to UPLC-MS,and the similarity of 10 batchesofsampleswas analyzed.The common peak was determ ined,and identified by the MSdata.[Results]The UPLC-MS fingerprintof Danshen wasobtained,and 18 common fingerprintpeakswere indicated(including8water-soluble phenolic acidsand 10 lipophilic tanshinones),and 9 of them were identified by comparison with reference standards,and the similarities of the 10 samplesweremore than 0.90.[Conclusion]The method is reliableand stable,which can beused for the comprehensiveevaluation ofDanshen.

        Salviam iltiorrhiza Bge.;UPLC-MS;fingerprint;quality control

        R284.2

        A

        1672-1519(2015)07-0437-05

        天津市科技創(chuàng)新專項(xiàng)資金項(xiàng)目(06FZZDSH00 408);天津市西青區(qū)科技創(chuàng)新專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目(XQCXZX2012-006);天津市西青區(qū)科技型中小企業(yè)發(fā)展專項(xiàng)資金項(xiàng)目(XQKC 2013-022)。

        王洋(1981-),男,博士,主管藥師,研究方向?yàn)橹兴庴w內(nèi)外藥物分析和中藥藥理學(xué)。

        李進(jìn),E-mail:lijin@shitian.com。

        (2015-02-25)

        猜你喜歡
        溶性丹參酮水溶性
        A2B2型水溶性鋅卟啉的合成及其潛在的光動(dòng)力療法應(yīng)用
        云南化工(2021年5期)2021-12-21 07:41:26
        Systematic Review and Meta-analysis of Tanshinone Capsule in the Treatment of Polycystic Ovary Syndrome
        Medicinal Plant(2020年2期)2020-05-14 12:11:26
        脂溶性維生素:營(yíng)養(yǎng)需求之外的功能
        黔產(chǎn)丹參脂溶性成分的研究
        中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:22
        丹參酮ⅡA提取工藝的優(yōu)化
        中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
        丹參酮Ⅱ A 保護(hù)大鼠腎移植術(shù)后缺血再灌注損傷的機(jī)制研究
        水溶性肥料在日光溫室番茄上的應(yīng)用
        蔬菜(2016年8期)2016-10-10 06:48:52
        木菠蘿葉中水溶性黃酮苷的分離、鑒定和測(cè)定
        中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:52
        粗鹽中難溶性雜質(zhì)的去除
        水溶性有機(jī)肥的應(yīng)用技術(shù)
        无码日韩精品一区二区三区免费| 91乱码亚洲精品中文字幕| 日韩精品视频高清在线| 无码人妻h动漫中文字幕| av天堂久久天堂av色综合| 啪啪视频一区二区三区入囗| 国产一级一片内射视频在线| 国产av一区二区亚洲精品| 欧美日韩亚洲中文字幕二区| 成年女人毛片免费视频| 国产精品女丝袜白丝袜| 中文字幕综合一区二区| 亚洲乳大丰满中文字幕| 亚洲欧洲日产国码高潮αv| 欧美成人a视频免费专区| 91l视频免费在线观看| 18禁黄污吃奶免费看网站| 亚洲最大中文字幕无码网站| 黄片在线观看大全免费视频| 久久亚洲精品国产av| 少妇粉嫩小泬喷水视频www| 亚洲av无码一区二区二三区下载| 蜜桃视频一区二区三区在线| 女同同志熟女人妻二区| 久久久久久亚洲av无码蜜芽| 亚洲制服中文字幕第一区| 中文字幕亚洲精品第一页| 极品美女一区二区三区免费| 人妻少妇精品无码专区二区| 无码不卡免费一级毛片视频| 国产在线视频一区二区三| 国产freesexvideos中国麻豆| 男女肉粗暴进来120秒动态图| 巨臀精品无码AV在线播放| 国产视频激情在线观看| 国产农村妇女精品一二区| 国产真实露脸4p视频| 亚洲视一区二区三区四区| 亚洲成av人片在www鸭子| 少妇装睡让我滑了进去| 亚洲电影一区二区|