孔德偉　聶強　朱永（永城市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，河南永城 476600）

食品中合成色素測定的改進

孔德偉聶強朱永
（永城市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，河南永城 476600）

目的：探討食品中色素的測定方法，對現(xiàn)行GB/T5009.35-2003，《食品中合成色素測定》進行提出修訂建議。方法：樣品經(jīng)提取后，經(jīng)聚酰胺粉吸附，用氨-乙醇溶液解吸附，中和后水浴濃縮，定容過濾，以甲醇與乙酸銨溶液為流動相，梯度洗脫，紫外254nm檢測，外標(biāo)定量。

食品 合成色素 檢測 方法 改進

色素作為食品添加劑，可分為食用天然色素和人工合成色素兩大類，前者一般較為安全，人工合成色素是用人工化學(xué)合成方法所得的有機色素，主要是以煤焦油中分離出來的苯胺染料為原料制成。本身無營養(yǎng)價值，但由于成本低廉，色澤鮮艷，著色力強，配色方面，可以增加食品的美觀，在食品生產(chǎn)過程中被廣泛使用。近幾年，在巨大的經(jīng)濟利益的驅(qū)使下，導(dǎo)致食品合成色素超標(biāo)，研究資料表明，過量的攝入人工合成色素，將會在體內(nèi)蓄積，對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害，因此加強人工合成色素管理，提高人工合成色素快速、準(zhǔn)確檢驗十分必要。

1　《食品中合成著色劑的測定》GB/T5009.35-2003在檢驗中遇到的問題

《食品中合成著色劑的測定》GB/T5009.35-2003，第一法為高效液相色譜法，該方法具有檢測靈敏度高、混合色素分離性能完全等優(yōu)點，且隨著液相色譜儀的普及，該方法已被廣泛的采用，但該方法在分析過程中存在以下幾個方面的問題：①固體樣品由于本身有很大的粘稠性，在G3垂融漏斗抽濾時，很難抽濾，有的樣品抽濾8、9個小時還不能完全抽濾干凈，嚴(yán)重的造成了檢驗效率低、人工合成色素?fù)p失率高等問題。②在聚酰胺吸附法中，GB/T5009.35-2003要求試樣溶液加檸檬酸調(diào)PH值到6，這樣會因PH過高引起人工合成色素在PH為6的弱酸環(huán)境內(nèi)有一定的溶解度，導(dǎo)致在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時，工合成色素?fù)p失，造成檢驗結(jié)果偏低。③流動相：GB/T5009.35-2003的 5.3.2中規(guī)定，流動相：甲醇：乙酸銨溶液（PH=4.0），這樣會因流動相成酸性，導(dǎo)致人工合成色素在流動相內(nèi)的溶解度降低，會引起結(jié)果不出峰和C18柱子的使用壽命縮短。④梯度洗脫：GB/T5009.35-2003的5.3.3中規(guī)定：甲醇：20%～35%，3%/ min；35%～98%，9%/min；98%繼續(xù)6min，該規(guī)定缺少甲醇：98%～20%以及甲醇：20%的持續(xù)時間這兩個梯度洗脫過程，甲醇：20%的持續(xù)時間應(yīng)根據(jù)柱壓是否穩(wěn)定來確定，否則會引起保留時間發(fā)生嚴(yán)重漂移，造成無法對人工合成色素的峰進行定性。⑤由于亮藍(lán)既溶于酸又溶于堿，被吸附的亮藍(lán)極易被甲醇-甲酸溶液洗脫，回收率幾乎為0，造成檢驗結(jié)果嚴(yán)重偏低，因此應(yīng)對亮藍(lán)的檢驗進行修定。

表1

表2

5種合成色素色譜圖

2　對《食品中合成著色劑的測定》GB/T5009.35-2003的幾點建議

針對上述問題，本中心根據(jù)多年的對食品人工合成色素檢驗經(jīng)驗，提出以下建議：

①對于固體樣品在G3垂融漏斗難以抽濾問題建議稱取5.00g～10.00g粉碎樣品放入100mL燒杯中，加30mL10%的氨水?dāng)嚢?5min進行溶解，然后用快速濾紙進行過濾、洗滌，每次用10%的氨水5mL，洗滌3～5次，收集濾液再用檸檬酸調(diào)PH值到3左右，這樣就可以把固體樣品轉(zhuǎn)化為液體樣品，再用G3垂融漏斗抽濾就比較容易抽濾了，因為人工合成色素是在堿性溶液中有較高的溶解度，樣品經(jīng)過上述方法處理后，絕大部分人工合成色素都轉(zhuǎn)化到濾液中了，這樣就解決了固體樣品在G3垂融漏斗抽濾難的問題和人工合成色素?fù)p失率較高的問題。②在聚酰胺吸附法中，GB/T5009.35-2003的5.2.1中要求試樣溶液加檸檬酸調(diào)PH值到6，這樣會因PH過高引起人工合成色素在PH為6的弱酸環(huán)境內(nèi)有一定的溶解度，導(dǎo)致在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時，工合成色素?fù)p失，造成檢驗結(jié)果偏低。建議用檸檬酸試樣的PH值到3，這樣就可以避免人工合成色素在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時，工合成色素?fù)p失的問題。③流動相： GB/T5009. 35-2003的 5.3.2中規(guī)定，流動相：甲醇：乙酸銨溶液（PH=4.0），這樣會因流動相成酸性，導(dǎo)致人工合成色素在流動相內(nèi)的溶解度降低而析出，會引起結(jié)果不出峰和C18柱子的使用壽命縮短，建議調(diào)流動相乙酸銨溶液的PH值到7左右。④梯度洗脫：GB/T5009.35-2003的5.3.3中規(guī)定：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%繼續(xù)6min，建議應(yīng)增加甲醇：98%～20%以及甲醇：20%的持續(xù)時間這兩個梯度洗脫過程，確保在進行下一樣品時流動相的比例過度到起始狀態(tài)，甲醇：20%的持續(xù)時間應(yīng)根據(jù)柱壓是否穩(wěn)定來確定，否則會引起保留時間發(fā)生嚴(yán)重漂移，造成無法對人工合成色素的峰進行定性。⑤如樣品中含有亮藍(lán)人工合成色素，由于亮藍(lán)既溶于酸又溶于堿，被吸附的亮藍(lán)極易被甲醇-甲酸溶液洗脫，回收率幾乎為0，造成檢驗結(jié)果嚴(yán)重偏低，建議取兩份樣品（若是固體樣品用上述方法轉(zhuǎn)化為液體樣品），一份直接進行調(diào)PH值、濃縮、定容、過濾后用于測定亮藍(lán)，一份按照5.2規(guī)定的處理方法測定其他色素。

3　試驗與結(jié)果

3.1儀器

Agilent1200高效液相色譜儀（帶自動進樣器）；真空泵；超聲波清洗器；抽濾器；G3垂融漏斗；0.45μm過濾頭。

3.2試劑

色譜純甲醇；二級水（電導(dǎo)率<0.10mS/m，25℃）；色素標(biāo)準(zhǔn)溶液［GBW（E）］；乙酸銨溶液（0.02mol/L）；甲醇一甲酸混合溶液（6+4）；無水乙醇一2%氨水一水混合溶液（7+2+1）；聚酰胺粉（過200目）；乙酸溶液（20%）。

3.3色素提取

稱取固體樣品綠豆糕7.00g共12份，其中6份用于加標(biāo)回收試驗（檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)均為0.1mg），按上述建議①至⑤制成的樣品溶液調(diào)pH到3，加熱至60℃，將1g聚酰胺粉加少量水調(diào)成粥狀，倒人樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH=6的水洗滌3～5次，然后用甲醇一甲酸溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇一氨水一水混合液解吸3～5次，每次3ml，收集解吸液，加乙酸溶液中和，80℃～85℃水浴蒸發(fā)濃縮至20%，加水定容至10ml，經(jīng)針頭過濾器（0.45μm）過濾，待測。

3.4色譜條件

色譜柱：SinoChrom ODS—BP柱（250 mm×4.6 mm×5μ m），C18預(yù)柱，柱溫為25℃，流動相：A為甲醇，B為乙酸銨溶液（0.02 mot/L，PH值為7），梯度洗脫，流速：1.0 mL/min，進樣量10μl，檢測波長254 nm。

3.5流動相編程（見表1）

3.6試驗回收率（見表2）

4　結(jié)語

實驗表明，在應(yīng)用GB/T5009.35—2003第一法過程中，按照上述5點建議控制實驗條件：吸附、解吸附、濃縮溫度及體積，梯度洗脫，結(jié)果：樣品抽濾快捷、工合成色素?fù)p失低、各色素保留時間漂移較小、各色素分離度良好，同時解決了亮藍(lán)不能檢出的問題，各色素回收率滿意。