羅澤旭，李 巖，羅文超 ，徐 飛

(1.鞍山市腫瘤醫(yī)院，遼寧 鞍山 114034；2.大連醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116044)

RUNX3蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義

羅澤旭1，李 巖2，羅文超2，徐 飛2

(1.鞍山市腫瘤醫(yī)院，遼寧 鞍山 114034；2.大連醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116044)

目的 探求腦膠質(zhì)瘤RUNX3的表達(dá)及生物學(xué)意義。方法 手術(shù)切除腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本55例相對(duì)制成石蠟組織微陣列，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)RUNX3在上述55例癌灶和其中19例癌旁相對(duì)正常腦組織中的表達(dá)情況和分布特點(diǎn)，并分析其表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 膠質(zhì)瘤中RUNX3蛋白表達(dá)率為38.2%(21/55)較相對(duì)正常腦組織中表達(dá)率94.7%(18/19)明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.05)。RUNX3蛋白表達(dá)無(wú)性別、年齡及病理分級(jí)間差異，但在病灶直徑≥3 cm及生存期<3年的膠質(zhì)瘤患者中，RUNX3蛋白表達(dá)顯著低于病灶直徑<3 cm及生存期>3年的患者(P<0.05)。RUNX3在不同類型腦膠質(zhì)瘤中呈現(xiàn)差異表達(dá)。結(jié)論 RUNX3蛋白表達(dá)下調(diào)可能與膠質(zhì)瘤進(jìn)展及患者的預(yù)后有關(guān)。

腦膠質(zhì)瘤；RUNX3；蛋白表達(dá)；免疫組織化學(xué)

腦膠質(zhì)瘤因其生長(zhǎng)位置險(xiǎn)要、極易局部浸潤(rùn)、手術(shù)難以完全切除、輔助放化療效果不佳等原因而致臨床預(yù)后不良，病死率很高[1]。腦膠質(zhì)瘤發(fā)生與多種癌基因異常激活及抑癌基因失活密切相關(guān)，但確切發(fā)病機(jī)制仍不明確。RUNX3是1994年首次報(bào)道的一種重要抑癌基因，目前已證實(shí)在多種腫瘤中其表達(dá)下調(diào)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后有關(guān)[2]，但RUNX3與腦膠質(zhì)瘤的相關(guān)性研究并不多見(jiàn)[3]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)RUNX3在腦膠質(zhì)瘤組織芯片中的表達(dá)，分析該基因與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征之間的關(guān)系，以期探求RUNX3在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的特點(diǎn)及生物學(xué)意義。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

腦膠質(zhì)瘤石蠟組織標(biāo)本選自2008年1月—2010年1月鞍山市腫瘤醫(yī)院診斷明確的腦膠質(zhì)瘤手術(shù)切除標(biāo)本。入選標(biāo)本55例，曾經(jīng)接受過(guò)放射治療者5例，未經(jīng)任何放化療處理者50例。患者中男性24例，女性31例，年齡9～83歲，平均(46.5±16.60)歲。將石蠟標(biāo)本行HE染色病理確認(rèn)，選取癌灶(55例)及其癌旁未見(jiàn)明顯組織學(xué)改變區(qū)域(19例)選點(diǎn)、制成組織微陣列，分別計(jì)為腦膠質(zhì)瘤組織及癌旁相對(duì)正常腦組織。

1.2 試劑及實(shí)驗(yàn)方法

多克隆兔抗人RUNX3抗體購(gòu)自北京博奧森，免疫組化試劑盒SP-9000 (通用型SP Kit) 與DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。石蠟組織制備成芯片，免疫組織化學(xué)染色：脫蠟、抗原修復(fù)，3%H2O2去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。山羊血清封閉37 ℃ 1 h，滴加RUNX3抗體，4 ℃冰箱孵育過(guò)夜。第2日去除一抗滴加二抗，并置于37 ℃恒溫箱內(nèi)孵育15 min。滴加辣根過(guò)氧化物酶，37 ℃恒溫箱內(nèi)孵育15 min。顯微鏡下二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸乙醇分化，脫水至透明，中性樹(shù)膠封片。判定標(biāo)準(zhǔn)：棕黃色為陽(yáng)性染色結(jié)果，無(wú)棕黃色著色為陰性(-)；與未加一抗的陰性對(duì)照比較，著色略深的為弱陽(yáng)性(+)，較深的為中等陽(yáng)性(++)，明顯加深的為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。其中前二者記為低表達(dá)、后二者記為高表達(dá)。本文將高表達(dá)記為表達(dá)[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)RUNX3在不同病變腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與分布應(yīng)用Kruskal-Wallis 和Mamm Whitney檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié) 果

2.1 RUNX3在相對(duì)正常腦組織和腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特點(diǎn)

RUNX3蛋白在相對(duì)正常腦組織和膠質(zhì)瘤中都有不同程度的表達(dá)(圖1，表1)，陽(yáng)性細(xì)胞呈彌散性分布，細(xì)胞核染成黃色或棕黃色。膠質(zhì)瘤中RUNX3蛋白表達(dá)率為38.2%(21/55)較相對(duì)正常腦組織中表達(dá)率94.7%(18/19)明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.05)。

圖1 膠質(zhì)瘤免疫組化染色Fig 1 Expression of RUNX3 in different gliomsA：星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤；B：少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤；C：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤

表1 相對(duì)正常腦組織和腦膠質(zhì)瘤中RUNX3的表達(dá)Tab 1 Expression of RUNX3 in glioms n(%)

2.2 RUNX3表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系

RUNX3蛋白在星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤中表達(dá)率為44.2%(19/43)，在少突膠質(zhì)瘤中為33.3%(2/6)，而在其他類型膠質(zhì)瘤中，RUNX3表達(dá)率均為0，但由于其他類型膠質(zhì)瘤樣本數(shù)目較少，故難以進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

將腦膠質(zhì)瘤病變依照其術(shù)后病理記錄分為小病灶(直徑<3 cm)和大病灶(直徑≥3 cm)，大病灶較小病灶組織中RUNX3表達(dá)顯著下調(diào)(8/33，24.4% vs. 13/22，59.9%，P<0.05)。患者生存期≥3年者RUNX3蛋白表達(dá)率為(16/31，51.6%)，顯著高于生存期<3年者(5/24，20.8%)，P<0.05。見(jiàn)表2。

表2 RUNX3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Tab 2 Relationship between RUNX3 expression and clinical parameters n(%)

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤是嚴(yán)重危害人類健康的顱內(nèi)腫瘤，其良惡性具有一定的相對(duì)性，無(wú)論分化高低均無(wú)包膜形成，呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，故預(yù)后極差。腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病原因至今不明確。近年來(lái)的研究表明，RUNX3 是重要的腫瘤抑制基因，定位于1號(hào)染色體短臂36區(qū)1段，該基因是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，參與了TGF-β對(duì)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)節(jié)作用[2]。其在腫瘤中失活的主要機(jī)制是雜合性缺失與高甲基化[2,5]，但導(dǎo)致這種基因組甲基化失調(diào)改變的內(nèi)在外在原因，尚無(wú)定論。

大量文獻(xiàn)證實(shí)在諸多消化道、消化腺及其他腫瘤中，呈現(xiàn)RUNX3隨著腫瘤惡性程度加深而表達(dá)逐漸下調(diào)，并與患者的預(yù)后密切相關(guān)[6-8]，因其在腫瘤的惡性轉(zhuǎn)變過(guò)程中扮演重要角色，而越來(lái)越引起人們的關(guān)注。Xue等[6]在胰腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)RUNX3在胰腺癌組織中表達(dá)顯著下調(diào)，并與腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及神經(jīng)浸潤(rùn)密切相關(guān)，但與患者年齡、性別、腫瘤位置、大小、分化程度及血清相關(guān)指標(biāo)CEA和 CA199未見(jiàn)顯著相關(guān)性。而在食管癌[7]及前列腺癌[8]中表達(dá)RUNX3基因分別逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的惡性行為，并通過(guò)抑制血管生成降低癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移特性。

有關(guān)RUNX3在神經(jīng)系統(tǒng)，特別是神經(jīng)腫瘤中的研究不多見(jiàn)。Inoue等[9]發(fā)現(xiàn)RUNX3對(duì)于顱腦、脊髓背根神經(jīng)節(jié)的發(fā)育起到調(diào)控作用，敲除該基因?qū)е滦∈笊窠?jīng)系統(tǒng)發(fā)育不全引起共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)功能障礙。本研究結(jié)果顯示，RUNX3蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)相對(duì)正常腦組織呈現(xiàn)顯著下調(diào)，但與性別、年齡、病理分級(jí)間未見(jiàn)表達(dá)差異，在病變大小間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。特別是對(duì)患者預(yù)后的分析證實(shí)，RUNX3蛋白低表達(dá)明確提示患者預(yù)后不良。這與Mei等[10]的研究結(jié)果一致，該研究結(jié)果顯示恢復(fù)膠質(zhì)瘤細(xì)胞RUNX3基因表達(dá)將有效逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移特性，這將為膠質(zhì)瘤的基因治療提供新的思路。綜上，RUNX3基因的表達(dá)產(chǎn)物可作為腫瘤生物學(xué)行為的參考指標(biāo)和預(yù)后判斷的生物學(xué)指標(biāo)，且該基因有可能成為膠質(zhì)瘤生物治療的新靶點(diǎn)。

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Expression of RUNX3 protein in glioma and its clinical significance

LUO Ze-xu1, LI Yan2, LUO Wen-chao2, XU Fei2

(1.AnshanCancerHospital,Anshan116085,China; 2.CollegeofBasicMedicalSciences,DalianMedicalUniversity,Dalian116044,China)

Objective To explore the expression characteristics and biological significance of RUNX3 in different glioma. Methods Surgically removed 19 relatively normal brain tissues and 55 glioma tissues were collected and embeded with paraffin to make tissue microarray using high-throughput tissue chip technology. Expression of RUNX3 in these tissues was detected by immunohistochemistry and the relationship between RUNX3 expression and clinical pathological features of glomia patients were analyzed. Results RUNX3 protein was highly expressed in relatively normal brain tissues (94.7%) compared to glioma tissues (38.2%,P<0.05). The RUNX3 expression was not obviously related to gender, age and pathologic stage, but was statistically corelated with tumor size (diameter≥ 3 cm) and patients' survival (overall survival <3 years)(P<0.05) and the expression of RUNX3 was different in different types of glioma. Conclusion RUNX3 gene expression is related to the tumor size and survival, which indicates important molecular events in glioma progression.

glioma；RUNX3；protein expression；immunohistochemistry

論 著

10.11724/jdmu.2015.01.04

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81102069)

羅澤旭(1975-)，男，遼寧大連人，副主任醫(yī)師。 E-mail:1795140791@qq.com

李 巖，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師。E-mail: ly316@126.com

R739.4

A

1671-7295(2015)01-0017-03

羅澤旭，李巖，羅文超，等. RUNX3蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015,37(1)：17-19,24.

2014-10-10；

2014-12-24)