關(guān)崇新，刁全平，侯冬巖，郭 華，李鐵純，回瑞華

(鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，遼寧鞍山114007)

海參為棘皮動物海參綱動物的總稱，全世界共有1100多種，約40種大型體壁較厚的海參可供食用［1］.海參為高蛋白質(zhì)、低脂肪食品，含有多種微量元素和豐富的生理活性物質(zhì)，如多肽、海參神經(jīng)苷酯等，這些生理活性物質(zhì)具有抗腫瘤、抗凝血、鎮(zhèn)痛、提高免疫力等作用［2］.多不飽和脂肪酸能使膽固醇酯化、降低血液中膽固醇和甘油三酯、提高腦細(xì)胞的活性、增強(qiáng)記憶力和思維能力.海洋生物體內(nèi)通常含有豐富的多不飽和脂肪酸［3，4］，因此，對海參脂肪酸的研究具有很高的醫(yī)用價值.

俄羅斯海參簡稱羅參，產(chǎn)于俄羅斯海參崴海域，也被稱為極地參.由于海參崴的海水溫度很低，海中的微生物和海藻之類的食物也比較少，生長在這里的海參生長非常緩慢，需要更長的時間才能長成成參，而且體積也要比一般的海參小很多，正因?yàn)槿绱?，俄羅斯海參體內(nèi)可以積蓄更多的營養(yǎng)，故其營養(yǎng)價值極高.本文采用Bligh-Dyer提取方法對海參體內(nèi)的脂肪油進(jìn)行提取［5］，然后進(jìn)行甲酯化處理，再利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對其進(jìn)行分析測定［6］，分離鑒定其中的脂肪酸成分.

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

俄羅斯海參購自鞍山某店，產(chǎn)地為俄羅斯.氯仿、甲醇、氫氧化鉀、正己烷、硫酸鈉等均為分析純，水為自制二次蒸餾水.

1.2 儀器與設(shè)備

HP6890GC/5973MS型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國惠普公司)；RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；85-1型恒溫磁力攪拌器(常州國華電器有限公司)；80-2B臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司).

1.3 方法

1.3.1 脂肪油的提取 稱取樣品2.503 1 g，置于干凈的500 mL三角燒瓶中，加入450 mL二次蒸餾水，室溫下浸泡24 h.將泡發(fā)的海參用剪刀剪碎，置于250 mL錐形瓶中，加入100 mL甲醇、50 mL氯仿和40 mL蒸餾水，膠塞蓋緊，電磁攪拌16 h后，加入50 mL氯仿和50 mL蒸餾水，搖勻后過濾，分液取下層有機(jī)相，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得脂肪油0.135 8 g，得油率為5.43%.

1.3.2 脂肪油的甲酯化 用12 mL正己烷將魚油溶解，加入2 mL濃度為0.5 mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液在70℃水浴中回流20 min，冷卻后加入10 mL蒸餾水，超聲振蕩5 min，然后以3 000 r/min離心10 min，取上層正己烷溶液用無水硫酸鈉干燥后，待GC/MS分析備用.

1.3.3 脂肪酸的分析鑒定

色譜條件：色譜柱為HP-5彈性石英毛細(xì)管柱(25 m×0.20 mm×0.33 μm)；進(jìn)樣口溫度300℃；

程序升溫：100℃→200℃升溫速率為10℃/min，200℃→280℃升溫速率為5℃/min，280℃保持5 min；分流比100∶1，溶劑延遲3 min.

質(zhì)譜條件：全掃描，四級桿質(zhì)量分析器，掃描范圍為20～500 m/z；離子源為電子轟擊源，離子源溫度為230℃；電離電壓為70 eV；電子倍增器電壓為1 988 V；發(fā)射電流為34.6 μA；接口溫度為230℃.

定性分析：取經(jīng)1.3.2項(xiàng)處理過的樣品0.4 μL，用GC/MS進(jìn)行分析鑒定.通過G1701 BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，檢索NIST98譜圖庫，確定樣品中各個化學(xué)成分.

定量分析：通過G1701 BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，分別求得各化學(xué)成分的相對百分含量

2 結(jié)果與討論

2.1 俄羅斯海參脂肪酸甲酯總離子流譜圖

按照步驟1.3.3進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，得俄羅斯海參脂肪酸甲酯總離子流譜圖，如圖1所示.

將樣品中的脂肪酸種類及其相對百分含量列于表1.

對表1進(jìn)行分析，從俄羅斯海參中鑒定出25種脂肪酸，其中飽和脂肪酸8種，相對百分含量為22.45%；不飽和脂肪酸為17種，單不飽和脂肪酸為9種，相對百分含量為34.94%；多不飽和脂肪酸為8 種，相對百分含量為 42.59%.5，8，11，14，17-二十碳五烯酸(EPA)和 4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(DHA)被稱為“腦黃金”，能夠?qū)π哪X血管疾病起到預(yù)防作用［7］，俄羅斯海參中含量分別為9.46%和11.77%.

表1 俄羅斯海參脂肪油中脂肪酸(以酯表示)的組成及相對含量

2.2 討論

不飽和脂肪酸特別是多不飽和脂肪酸化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，在較高溫度下長時間提取容易被氧化、變性，本文采用Bligh-Dyer法在室溫下對俄羅斯海參中脂肪油進(jìn)行提取，盡量避免不飽和脂肪酸在提取過程中的損失，提高俄羅斯海參脂肪酸分析的準(zhǔn)確度.

［1］崔清晨.海洋資源［M］.北京:商務(wù)印書館，1981.

［2］廖玉麟.中國動物志(第1卷)［M］.北京:科學(xué)出版社，1997.

［3］馬亭，陳文銳，胡國昌，等.深海魚油中脂肪酸的分析［J］.分析化學(xué)，1999，27(4):415－418.

［4］曾淑蘭，關(guān)紫峰，蔡云萍，等.深海魚油、海豹油脂肪酸組成的分析研究［J］.質(zhì)譜學(xué)報，1999，20(1):70－75.

［5］劉希光，于華華，趙增芹，等.海蜇不同部位脂肪酸的組成分析［J］.分析化學(xué)，2004，32(12):1635－1638.

［6］刁全平，何方奕，侯冬巖，等.青蝦脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜分析［J］.鞍山師范學(xué)院學(xué)報，2012，14(6):19－21.

［7］陳麗花，肖作兵，周培根.中國對蝦的脂肪酸分析及其營養(yǎng)價值評價［J］.上海海洋大學(xué)學(xué)報，2010，19(1):125－129.