李艷麗，卜慶

外周T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中髓源性抑制細(xì)胞的表達(dá)及意義

李艷麗，卜慶△

目的探索外周T細(xì)胞淋巴瘤（PTCL）患者外周血中髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）數(shù)量與預(yù)后的關(guān)系。方法收集PTCL患者23例，選取14例同期健康體檢者作為正常對(duì)照組，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其外周血MDSCs/單核細(xì)胞比例，分析MDSCs數(shù)量與PTCL患者預(yù)后及臨床特征的關(guān)系。結(jié)果MDSCs在PTCL患者外周血單核細(xì)胞中所占的比例高于正常對(duì)照組［（4.59±1.41）%vs（1.36±0.59）%，P＜0.01］。PTCL化療后外周血MDSCs的表達(dá)（1.29± 2.95）%較化療前明顯降低。結(jié)外侵犯部位、骨髓侵犯、臨床分期、IPI評(píng)分不同的PTCL患者外周血MDSCs的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論MDSCs在PTCL患者外周血中高表達(dá)，提示與腫瘤發(fā)生及預(yù)后不良有關(guān)。

淋巴瘤，T細(xì)胞，外周；流式細(xì)胞術(shù)；髓源性抑制細(xì)胞

髓源性抑制細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）是一群來源于骨髓祖細(xì)胞和未成熟髓細(xì)胞，具有免疫抑制功能的髓系細(xì)胞。MDSCs被炎性介質(zhì)從骨髓募集到外周，經(jīng)過活化可以抑制機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫功能，使腫瘤細(xì)胞免于被免疫系統(tǒng)防御，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展［1］。外周T細(xì)胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma，PTCL）是指所有起源于成熟（胸腺后）T細(xì)胞和自然殺傷（NK）細(xì)胞的惡性腫瘤，具有侵襲性強(qiáng)、病情遷延、容易復(fù)發(fā)、預(yù)后不良等特征，目前尚無標(biāo)準(zhǔn)治療方法，常規(guī)化療方案如CHOP、EPOCH等雖近期療效尚可，但復(fù)發(fā)率仍較高，遠(yuǎn)期生存率較低。本研究擬觀察PTCL患者外周血MDSC的數(shù)量，探討其作用及與PTCL患者預(yù)后的關(guān)系，并能否將其作為PTCL的治療靶點(diǎn)。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象收集2013年10月—2014年5月于桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、桂林市人民醫(yī)院、廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院接受治療的PTCL患者23例。所有患者臨床資料齊全，均經(jīng)病理學(xué)確診證實(shí)。其中男13例，女10例，年齡11～75歲，平均（43.52±17.16）歲。選取同期健康體檢者14例作為正常對(duì)照組，其中男7例，女7例，年齡23～70歲，平均（45.79±14.31）歲。2組性別（χ2=0.149）、年齡（t=0.413）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。全部臨床特征資料均來自于患者入院的首次檢查結(jié)果：包塊直徑≥10 cm為巨大包塊，乳酸脫氫酶（LDH）正常參考值114～240 U/L。入組人員均簽署知情同意書，并獲得本單位倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法收集患者外周血（肝素鈉抗凝）后混勻，取350 μL全血，加入熒光標(biāo)記抗體CD33-APC、CD11b-FITC、CD14-PE各20 μL，4℃冰箱避光孵育30 min，PBS洗滌，紅細(xì)胞裂解液裂解、洗滌、固定、重懸后，用FACS Canto（美國BD公司）檢測(cè)患者外周血MDSCs/單核細(xì)胞比例，BD FACS Diva軟件分析數(shù)據(jù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料若符合正態(tài)分布用±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，如不符合正態(tài)分布用中位數(shù)（M）表示，采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用卡方（χ2）檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

23例患者，隨訪8個(gè)月，有7例進(jìn)展，尚無死亡病例，中位無進(jìn)展時(shí)間（PFS）為6個(gè)月。

2.12組MDSCs表達(dá)情況比較PTCL組和正常對(duì)照組外周血中均存在CD33+CD14-CD11b+MDSCs，但在PTCL組外周血單核細(xì)胞中所占的比例高于正常對(duì)照組［（4.59±1.41）%vs（1.36±0.59）%，t= 9.224，P＜0.05］，見圖1。PTCL組化療后外周血MDSCs的表達(dá)（1.29±2.95）%較化療前明顯降低（t= 2.10，P＜0.05）

2.2MDSCs與臨床特征的分析結(jié)果結(jié)外侵犯部位、骨髓侵犯、臨床分期、國際預(yù)后指數(shù)（international prognostic index，IPI）評(píng)分不同PTCL患者外周血單核細(xì)胞中的MDSCs比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，年齡、LDH水平、包塊大小不同PTCL患者外周血中的MDSCs比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

Tab.1　The correlation of clinical features in PTCL patients表1MDSCs與PTCL患者臨床特征間的關(guān)系（%）

Fig.1　Results of flow cytometry showing the expression of MDSCs in the peripheral blood in patients with PTCL group and normal control group圖1　在PTCL患者和正常對(duì)照組外周血中MDSCs表達(dá)的流式結(jié)果

3　討論

人類MDSCs的分子標(biāo)志目前還未確定，本研究選取的是CD33+CD14-CD11b+標(biāo)志的MDSCs，與國外報(bào)道類似［2］。有研究顯示，B細(xì)胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤中的MDSCs表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān)［3］，而PTCL預(yù)后不良，其機(jī)制尚未明晰，國外也少見MDSCs與PTCL相關(guān)性的研究，筆者推測(cè)MDSCs可能與PTCL的不良預(yù)后有關(guān)。

國內(nèi)對(duì)于MDSCs的研究尚處于起步階段，與臨床相關(guān)的研究更是罕見。奉松青等［4］的臨床研究顯示CD14+HLA-DRlow/-MDSCs在胃癌患者外周血中的表達(dá)高于正常對(duì)照組；Christiansson等［5］以CD33+CD14-CD11b+為MDSCs的表型研究了慢性粒細(xì)胞性白血?。–ML），發(fā)現(xiàn)CML組外周血中MDSCs的比例也要明顯高于對(duì)照組（P＜0.01），與本研究中MDSCs 在PTCL患者外周血中的比例高于正常對(duì)照組的結(jié)論一致；Gabitass等［6］證明外周血MDSCs在胰腺癌等實(shí)體瘤中顯著升高，且與腫瘤的大小和臨床分期等眾多臨床特征有關(guān)，與本研究結(jié)論相似。這提示MDSCs與腫瘤的發(fā)展、演進(jìn)有著密切的關(guān)系［7］，并可能與患者預(yù)后相關(guān)。國內(nèi)外尚少見關(guān)于MDSCs在外周T細(xì)胞淋巴瘤中與化療相關(guān)性的文獻(xiàn)報(bào)道，Wang等［8］報(bào)道CD14-CD11b+MDSCs在胃癌Ⅳ期患者化療前后外周血中比例也不一樣，提示其變化與治療有關(guān)；Tu等［9］研究結(jié)果顯示患者化療后外周血MDSCs的表達(dá)低于化療前，可能與腫瘤被清除后MDSCs的產(chǎn)生和募集減少有關(guān)，這也提示MDSCs有可能作為腫瘤化療效果的一種評(píng)價(jià)指標(biāo)，有待更深入的觀察和研究。在本研究中，因隨訪時(shí)間較短，尚未得出MDSCs與PTCL生存期的相關(guān)性，作用機(jī)制仍需探索，需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步開展研究。

總之，MDSCs在維持機(jī)體免疫系統(tǒng)平衡中起重要作用［10］。本研究證實(shí)了MDSCs在PTCL患者外周血中高表達(dá)，與多種臨床特征相關(guān)，且化療后較化療前明顯下降，因此可能是影響預(yù)后的因素。檢測(cè)MDSCs的變化有望為PTCL的療效及預(yù)后評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

［1］Duffy A，Zhao F，Haile L，et al.Comparative analysis of monocytic and granulocytic myeloid-derived suppressor cell subsets in patients with gastrointestinal malignancies［J］.Cancer Immunol Immunother，2013，62（2）:299-307.doi:10.1007/s00262-012-1332-3.

［2］Peranzoni E，Zilio S，Marigo I，et al.Myeloid-derived suppressor cell heterogeneity and subset definition［J］.Curr Opin Immunol，2010，22（2）:238-244.doi:10.1016/j.coi.2010.01.021.

［3］Tadmor T，F(xiàn)ell R，Polliack A，et al.Absolute monocytosis at diagnosis correlates with survival in diffuse large B-cell lymphoma-possible link with monocytic myeloid-derived suppressor cells［J］.Hematol Oncol，2013，31（2）:65-71.doi:10.1002/hon.2019.

［4］Feng SQ，Liu CX，Zheng SB.Expression of myeloid-derived suppressor cells in the peripheral blood and its clinical significance in renal carcinoma［J］Journal of Southern Medical University，2013，33 （4）550-553.［奉松青，劉春曉，鄭少波，等.腎癌患者外周血中CD33+HLA-DR-髓源抑制性細(xì)胞的表達(dá)及其臨床意義［J］.南方醫(yī)科大 學(xué) 學(xué) 報(bào)，2013，33（4）:550-553］.doi:10.3969/j.issn.1673-4254.2013.04.19.

［5］Christiansson L，Soderlund S，Svensson E，et al.Increased level of myeloid-derived suppressor cells，programmed death receptor ligand 1/programmed death receptor 1，and soluble CD25 in Sokal high risk chronic myeloid leukemia［J］.PloS 0ne，2013，8（l）:e55818. doi:10.1371/journal.pone.0055818.

［6］Gabitass RF，Annels NE，Stocken DD，et al.Elevated myeloid-derivedtsuppressor cells in pancreatic，esophageal and gastric cancer are an independent prognostic factor and are associated with significant elevation of the Th2 cytokine interleukin-13［J］.Cancer Immunol Immunother，2011，60（10）:1419-1430.doi:10.1007/s00262-011-1028-0.

［7］Ko Js，Bukowski RM，F(xiàn)incke JH.Myeloid-derived suppressor cells：a novel therapeutic target［J］.Curr Oncol Rep，2009，11（2）:87-93. doi:10.1007/s11912-009-0014-6.

［8］Wang L，Chang EWY，Wong SC，et al.Increased myeloid-derived suppressorcells in gastric cancer correlate with cancer stage and plasma S100A8/A9 proinflammatory proteins［J］.J Immunol，2013，190（2）:794-804.doi:10.4049/jimmunol.1202088.

［9］Tu S，Bhagat G，Cui G.Overexpression of interleukin-1beta induces gastric inflammation and cancer and mobilizes myeloid-derived suppressor cells in mice［J］.Cancer Cell，2008，14（5）:408-419. doi:10.1016/j.ccr.2008.10.011.

［10］Gabrilovich DI，Nasaraj S.Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system［J］.Nat Rev Immunol，2009，9（3）:162-174.doi:10.1038/nri2506.

（2014-09-09收稿2014-11-17修回）

（本文編輯李國琪）

The expression and significance of MDSCs in peripheral blood in patients with peripheral T cell lymphoma

LI Yanli，Bu Qing△
Department of Medical Oncology，the Affiliated Hospital of Guilin Medical University，Guilin 541000，China
△Corresponding AuthorE-mail：buqing1993@qq.com

ObjectiveTo study the relationship between the number of myeloid-derived suppressor cells（MDSCs）in peripheral blood and prognosis in patients with peripheral T-cell lymphoma（PTCL）.MethodsTwenty-three patients with PTCL were selected in this study and 14 healthy persons were used as the normal control.The proportion of MDSCs/mononuclear in peripheral blood was detected by flow cytometry.The correlation between the number of MDSCs and the clinical character and prognosis in patients with PTCL was analyzed.ResultsThe proportion of MDSCs in peripheral blood was significantly higher in patients with PTCL than that of healthy subjects［（4.59±1.41）%vs（1.36±0.59）%，P＜0.01］.The number of MDSCs in peripheral blood was significantly decreased after chemotherapy compared with that before treatment［（1.29± 2.95）%，P＜0.05）］.There were significant differences in MDSCs expressions in patients between different extranodal involvement，bone marrow involvement，clinical stage and IPI score（P＜0.05）.Conclusion The higher expression of MDSCs may be related to the progression in patients with PTCL.

lymphoma，T-cell，peripheral；flow cytometry；myeloid-derived suppressor cells

R733.41

ADOI：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.03.016

廣西自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目（2011GXNSFB018092）

桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科（郵編541004）

李艷麗（1989），女，碩士在讀，主要從事各種惡性腫瘤的規(guī)范化治療研究

△E-mail：buqing1993@qq.com