段 龍，李學(xué)釗，田啟會

（甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威733006）

疫苗（Vaccine）是用于預(yù)防傳染病的抗原制劑，通常用鈍化、弱化或無害的病原體或其產(chǎn)物制成，用以刺激機體產(chǎn)生保護性免疫力。目前，新城疫（ND）疫苗主要有弱毒疫苗、滅活疫苗等常規(guī)疫苗，重組活載體疫苗、亞單位疫苗、DNA 疫苗、核酸疫苗等基因工程疫苗。

1 常規(guī)疫苗

1.1 滅活疫苗

滅活疫苗是經(jīng)處理而致死的病原體，安全性好，免疫應(yīng)激反應(yīng)小，一次免疫持續(xù)時間長，利于制造聯(lián)合苗或多價苗。聯(lián)合苗或多價苗通常包括傳染性支氣管炎病毒疫苗、傳染性法氏囊病病毒疫苗、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒疫苗以及呼腸孤病毒疫苗等，同時用于多種疫病的免疫預(yù)防，存儲也比較方便。ND 乳油劑滅活苗多用Ⅳ系疫苗制備，通常需要添加佐劑。目前，疫苗效力已達到國際上要求的滅活苗標準，可用于任何年齡的雞。

1.2 弱毒活疫苗

活疫苗一般由感染胚尿囊液凍干而成，通過飲水、進食、噴霧、氣霧等途徑大規(guī)模免疫雞群，為目前市場上最常見的疫苗，通常NDV 活疫苗分為緩發(fā)型和中發(fā)型兩種。緩發(fā)型疫苗主要包括F 株、V4株、B1 株、LaSota株、Ulsterzc株以及由LaSota株克隆得到的C30株與N-79株；中發(fā)型疫苗主要包括 Roakin 株、Komarov 株、Mukteswar 株、Hertlordshire株（又稱H 株）等。緩發(fā)型疫苗一般用于雛雞的首次免疫。Hitchner和Johnson發(fā)現(xiàn)的B1株是一種天然弱毒株，幾乎無致病性，不能完全致死雞胚，可經(jīng)滴鼻、點眼、飲水、氣霧等多種途徑接種免疫，均能達到良好的保護效果。另外，La Sota株也是天然弱毒株，比B1株毒力稍強，為我國最常用的活疫苗之一。對于中發(fā)型的疫苗如H 株、Roakin株等由于毒力較強，只能用于二次免疫。

2 基因工程疫苗

2.1 DNA 疫苗

DNA 疫苗是近年來發(fā)展的一項新型生物技術(shù)，DNA 疫苗與其它疫苗相比，具有易設(shè)計、穩(wěn)定性好、可以誘導(dǎo)體液免疫和細胞免疫、免疫效果好等優(yōu)點，是目前動物疫苗研究的重要方向之一。DNA 疫苗是將編碼抗原蛋白的外源性基因DNA 克隆到真核質(zhì)粒表達載體上，進而將重組質(zhì)粒DNA 直接注射到動物體內(nèi)，使外源基因通過宿主細胞的轉(zhuǎn)錄表達系統(tǒng)合成抗原蛋白，從而激活被免機體的免疫反應(yīng)，進而誘發(fā)免疫應(yīng)答。許發(fā)芝等以雞恒定鏈（Ii）作為載體，將雞ND 病毒F蛋白表位基因DNA 疫苗，經(jīng)3次免疫小白鼠后，結(jié)果表明雞恒定鏈作為載體的雞ND 基因DNA 疫苗能夠有效刺激小白鼠產(chǎn)生特異性的抗體免疫應(yīng)答。潘志明等將雞ND 病毒融合蛋白F 基因克隆入真核表達載體中，轉(zhuǎn)化到減毒鼠傷寒沙門氏菌，獲得了運送雞ND 病毒F 融合蛋白的DNA 疫苗重組沙門氏菌。兩次免疫小白鼠后，檢測到特異性雞NDF 蛋白血清抗體和小腸黏膜抗體。表明該運送雞ND 病毒F融合蛋白的DNA 疫苗減毒沙門氏菌系統(tǒng)，在免疫機體內(nèi)能成功釋放所攜帶的質(zhì)粒，能夠刺激機體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，并可以對雞ND 強毒株的攻毒試驗產(chǎn)生良好的免疫保護作用。

2.2 亞單位疫苗

亞單位疫苗是利用重組DNA 技術(shù)，將新城疫病毒保護性抗原基因通過載體在表達系統(tǒng)進行抗原表達，加以佐劑制成的疫苗，具有穩(wěn)定、安全、產(chǎn)量高、易于大規(guī)模生產(chǎn)以及表達產(chǎn)物和天然抗原相似等優(yōu)點，是近年來雞ND 疫苗研究發(fā)展的一個重要方向。桿狀病毒載體系統(tǒng)是目前研究開發(fā)ND 亞單位疫苗的主要工具，是以昆蟲桿狀病毒作為載體系統(tǒng)，將昆蟲或昆蟲細胞作為受體細胞表達目標抗原。曾黎平等將雞ND 強毒株F48E8的F 和HN 基因核心片斷，克隆到桿狀病毒載體上，得到了糖基化的F和HN 抗原蛋白表達產(chǎn)物。丁壯等應(yīng)用桿狀病毒表達系統(tǒng)，表達了雞ND 四平株和長春株兩個分離株的HN 蛋白。表明表達的雞NDHN 重組蛋白能夠誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生抗雞ND 特異性IgG 抗體和HI抗體。制備的疫苗免疫雞群后，用雞ND 強毒株F48E8進行攻毒試驗后，發(fā)現(xiàn)表達的HN 抗原蛋白對雞ND 四平株的保護率達到65%，對雞ND 長春株的保護率則達到了100%。

2.3 重組活載體疫苗

雖然DNA 疫苗和亞單位苗均顯示了良好的免疫性能，但因受到價格的限制往往難以實際推廣應(yīng)用。因此，研究者利用雞痘病毒、火雞皰疹病毒或者某些細菌作為載體，克隆插入ND 病毒HN 基因或者F 基因，通過接種動物，使得接種雞群獲得免疫保護作用。活載體疫苗的載體病毒或細菌表達目標抗原可以最大限度地不受接種動物體內(nèi)新城疫抗體的干擾，其中以重組痘病毒和皰疹病毒研究最為深入。張體銀等用雞ND 病毒F 基因，克隆構(gòu)建雞ND 重組雞痘病毒活載體疫苗。免疫1日齡的SPF雞群，試驗雞群沒有發(fā)生任何臨床癥狀，免疫商品蛋雞群后，用雞ND 強毒株進行攻毒試驗，發(fā)現(xiàn)活載體疫苗對試驗雞的保護率達到100%，表明雞ND 雞痘病毒活載體疫苗具有良好的安全性能和免疫效果。甘軍紀等用表達雞NDHN 基因的重組雞痘病毒活載體疫苗，免疫14日齡的SPF 雞群，7d后即可檢測到雞NDHI 抗體。用雞ND 強毒株F48E8進行攻毒試驗，保護率達到100%。4周后進行二免，發(fā)現(xiàn)可明顯提高機體的體液免疫應(yīng)答水平，對雞ND 強毒株F48E8 攻擊的保護率仍然為100%。綜上所述，以雞痘病毒為載體研制的NDV重組疫苗已顯示良好的免疫效果，與傳統(tǒng)的疫苗相比，具有高效、安全等優(yōu)點，可同時預(yù)防禽痘病毒的感染，并可在載體中同時表達其他病毒基因，起到一苗防多病的作用。

2.4 病毒樣顆粒疫苗

病毒樣顆粒（virus-like paeticles，VLPs）是指利用異源宿主系統(tǒng)表達的病毒結(jié)構(gòu)蛋白自行組裝成不含病毒基因組、不能復(fù)制、不具有感染能力的病毒樣蛋白顆粒。VLPs具備構(gòu)想逼真、安全、穩(wěn)定、可刺激體液和細胞免疫應(yīng)答、作為載體表達其他抗原以及可設(shè)計成區(qū)分自然感染與免疫接種等諸多優(yōu)點，使得VLPs在過去30年中成為新一代疫苗制備平臺。目前，在市場上使用和臨床研發(fā)中的VLPs疫苗至少35種以上。

McGinnes等將RSV 的F 和G 蛋白同時整合到新城疫VLPs骨架中，經(jīng)小鼠免疫攻毒保護試驗證實，以新城疫VLPs為骨架的呼吸道合胞體病毒疫苗與其他非復(fù)制型呼吸道合胞體病毒候選疫苗相比，具有較好的免疫保護效果。Sheng等以禽流感病毒M1蛋白為骨架，構(gòu)建了含有禽流感病毒HA基因和新城疫病毒HN 基因胞外片段的VLPs，結(jié)果顯示該VLPs疫苗能同時產(chǎn)生針對禽流感和新城疫的特異性抗體，而且能抵御NDV 強毒F48E9株的攻擊。韓國建國大學(xué)科研人員應(yīng)用昆蟲細胞表達系統(tǒng)研制出表達新城疫病毒（NDV）F 蛋白和流感病毒M1蛋白的NDV 病毒樣顆粒（VLP）。SPF 雞分別免疫含不同劑量VLP（0.8、4、20、100μg／mL）的NDV VLP油乳劑疫苗。同時用NDV 強毒株進行攻毒試驗以評估NDV VLP 疫苗對SPF 雞的保護效果，結(jié)果顯示NDV VLP 疫苗免疫后可產(chǎn)生大量抗NDV 的抗體，且SPF 雞對NDV 強毒株的抵抗力與NDV VLP疫苗免疫劑量相關(guān)。

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