劉傳斌

(云南省德宏州芒市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,芒市 678400)

金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，是一種革蘭氏陽性菌，直徑0.5～1.5μm，菌落排列方式有單個(gè)、成對(duì)或呈葡萄串狀，是一種重要的人獸共患病原菌，能夠引起人和動(dòng)物的多種疾病。金黃色葡萄球菌是一種條件性致病菌，其廣泛分布于自然界，在空氣、土壤和水中廣泛存在，在人體皮膚毛囊、皮脂腺管、鼻腔和腸道中也常有本菌存在。金黃色葡萄球菌為兼性的細(xì)胞內(nèi)病原體，可在吞噬細(xì)胞內(nèi)生存，在乳腺組織中可形成膿腫，最終導(dǎo)致纖維化[1]。

1 重要的毒力因子

1.1α 毒素

又名α 溶血素，是一種胞外毒素，為不耐熱的蛋白質(zhì)，是金黃色葡萄球菌主要毒力因子之一。α 溶血素蛋白分子量為34KD，不耐熱，65℃30min可將其破壞。溶血素可作用于平滑肌細(xì)胞，可致牛羊的壞疽性乳腺炎，其類毒素對(duì)金黃色葡萄球菌所致的綿羊和山羊乳腺炎有部分保護(hù)作用[2]。

1.2腸毒素

是由血漿凝固酶或耐熱核酸酶陽性菌株產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)相似抗原性不同的可溶性蛋白質(zhì)，分子量約26～34kDa，抗酸耐熱，100℃30min或胃蛋白酶水解而不被破壞。到目前為止，根據(jù)抗原的差異性可分為A、B、C(Cl、C2、C3)、D、E、G、H、I、J、K、L、M、N和O等14種血清型[3]。細(xì)菌能產(chǎn)生一或兩個(gè)以上的類型，其中A、D型最為常見，B、C型次之，E型出現(xiàn)率最低，A型毒力最強(qiáng)，B型耐熱性最好。

1.3血漿凝固酶

凝固酶是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的能使含有抗凝劑的家兔或人血漿凝固，有助于致病菌株抵御宿主體內(nèi)吞噬細(xì)胞和殺菌物質(zhì)的作用，多數(shù)菌株都能產(chǎn)生。多數(shù)金黃色葡萄球菌致病株能同時(shí)產(chǎn)生兩種蛋白質(zhì)，一種分泌至體外，稱為游離性凝固酶，類似凝血酶原的作用；另一種結(jié)合在菌體表面，稱為結(jié)合凝固酶或聚集因子，在菌株表面起纖維蛋白原特異受體作用，可使血漿纖維蛋白與菌體交鏈，引起菌體凝集[4]。

1.4耐熱核酸酶

金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的一種細(xì)胞外酶，由致病性菌株產(chǎn)生，100℃作用15min不失去活性。耐熱核酸酶是金黃色葡萄球菌所特有的，且不同菌株間有較高保守性，常作為金黃色葡萄球菌檢測的重要指標(biāo)之一。金黃色葡萄球菌感染部位的組織細(xì)胞和自細(xì)胞崩解時(shí)釋放出核酸，使?jié)B出液粘性增加，能加速核酸分解，有利于病原菌的擴(kuò)散[5]。

2 耐藥性

目前，奶牛乳房炎的治療主要還是依賴抗生素，而抗生素的濫用造成乳房炎的治療效果不斷下降，乳汁中抗生素殘留日益嚴(yán)重，耐藥菌株不斷出現(xiàn)。隨著金黃色葡萄球菌耐藥性的增加，治療難度也越來越大，快速的診斷出金葡菌的耐藥類型，既可以避免了亂用藥的浪費(fèi)，也減少了由于免疫選擇壓而造成的對(duì)此種藥物敏感性降低問題。

在臨床上用藥之前用紙片擴(kuò)散法對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行耐藥性鑒定，對(duì)提高用藥的準(zhǔn)確性十分重要，對(duì)當(dāng)前在治療金葡菌中的常用藥物如青霉素，氨芐青霉素，苯唑西林，頭孢噻肟鈉，氟苯尼考，萬古霉素，利福平，復(fù)方新諾明等測量其抑菌圈的大小，再根據(jù)抑菌圈的直徑進(jìn)行比較，確定一下金葡菌對(duì)哪種藥物敏感。

3 診斷

急性乳腺炎癥狀明顯，根據(jù)乳汁和乳房的變化便可診斷。隱性乳腺炎無臨床癥狀，但可根據(jù)乳汁的體細(xì)胞數(shù)、pH值、導(dǎo)電率及炎癥因子等指標(biāo)的檢測作出初步診，但確證需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。傳統(tǒng)的細(xì)菌分離鑒定，毒素檢測以及耐藥性測定費(fèi)時(shí)費(fèi)力，敏感性差，難以廣泛應(yīng)用。PCR技術(shù)具有高特異性、靈敏性及操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，給金葡菌的檢測工作帶來極大便利。耐藥性相關(guān)基因、毒素基因、酶基因及多種特異性鑒別基因已成為國內(nèi)外許多研究人員研究熱點(diǎn)，建立了不同的PCR診斷方法，其中多重PCR和實(shí)時(shí)定量PCR檢測方法可以分析其耐藥性和毒素基因攜帶情況。

4 防治

金黃色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎是臨床上最頑固、危害最嚴(yán)重的疾病，由于金葡菌容易形成耐藥性，再加上金黃色葡萄球菌容易寄生在乳腺上皮細(xì)胞中引起持續(xù)性感染或嚴(yán)重的纖維性炎癥而使抗生素治療無效，因此對(duì)金葡菌引起的乳腺炎預(yù)防主要通過金黃色葡萄球菌菌苗或類毒素疫苗免疫。

4.1滅活苗

目前在預(yù)防金萄菌方面主要使用的是滅活苗，全菌滅活疫苗早在1902年最早使用，但免疫保護(hù)效果不理想。此后研究人員研制了由4種溶血型(a、a、a+B，不溶血)金黃色葡萄球菌全菌苗，能部分提高奶牛乳腺炎的自愈率，臨床發(fā)病率沒有減少。而且副作用較大、維持時(shí)間較短[6]。

4.2亞單位疫苗

金黃色葡萄球菌表面的莢膜多糖聚集在感染部位的中性粒細(xì)胞中，在清除細(xì)菌方面具有決定性的作用。能錨定宿主細(xì)胞壁的肽聚糖并使黃色葡萄球菌定植于宿主靶細(xì)胞外基質(zhì)的黏附素，被認(rèn)為是黃色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子。黃色葡萄球菌黏附素、莢膜多糖、酶和毒素作為影響黃色葡萄球菌致病性的主要因子，是目前疫苗研究的主要方向[7]。

4.3減毒活疫苗

與滅活苗相比，減毒苗在對(duì)試驗(yàn)性乳腺炎的免疫，增強(qiáng)體外吞噬作用及由乳腺內(nèi)中性粒細(xì)胞對(duì)病原菌的殺滅方面效果均顯著，但有傳播病原的危險(xiǎn)。Cristina等在化學(xué)條件突變后，構(gòu)建了一個(gè)突變株RC122，RC122突變菌株作為一個(gè)可以有潛力做奶牛群疫苗試驗(yàn)的有意義的菌株[8]。

4.4DNA疫苗

DNA疫苗是近年來備受人們關(guān)注的一種新型疫苗。2002年Broui l let te等研制了針對(duì)金黃色葡萄球菌聚集因子的DNA疫苗免疫小鼠， Shkreta等2004年設(shè)計(jì)了同時(shí)針對(duì)聚集因子(CIfA)和纖連蛋白結(jié)合蛋白(Fnbp)二價(jià)DNA疫苗。目前國內(nèi)外還沒有一種核酸疫苗獲得批準(zhǔn)使用[9]。

5 小結(jié)

目前，各種乳制品成了人們的日常食物，由于乳腺炎抗生素濫用造成的危害日益嚴(yán)重，疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防應(yīng)是防治奶牛乳腺炎的一個(gè)發(fā)展方向，根據(jù)金黃色葡萄球菌毒力因子特點(diǎn)，制備出有效的疫苗，己成為治療金葡菌的關(guān)鍵。同時(shí)應(yīng)該加強(qiáng)日常環(huán)境的消毒衛(wèi)生、飼養(yǎng)管理工作，采取綜合防治措施才是控制奶牛乳腺炎的關(guān)鍵。

[1]王娟,黃秀梅,劉書科,等.牛奶中金黃色葡萄球菌的耐藥性及其腸毒素分型研究[J].中國獸醫(yī)雜志,2013,49(3):31-32.

[2]彭立荇，萬成松.葡萄球菌腸毒素的研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2004，32(4)：67-69.

[3]王小紅，謝筆釣，史賢明.食品中金黃色葡萄球菌腸毒素檢測方法的研究進(jìn)展[J].山西食品工業(yè)，2003，3：39-42.

[4]李毅.金黃色葡萄球菌及其腸毒素研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2004，14(4)：392-395.

[5]楊天嬌，孫英峰，沈國順.小鼠模型在奶牛金黃色葡萄球菌乳房炎中的應(yīng)用[J].中國畜牧獸醫(yī)，2008，35(12)：116-118.

[6]劉春杰,楊麗華,張春,等.長春地區(qū)奶牛乳腺炎主要致病菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].南方農(nóng)業(yè),?2014，8(18)：155-156.

[7]劉麗娜，張潔，周靜，等.金黃色葡萄球菌疫苗候選分子StbA主要抗原表位區(qū)的表達(dá)及重組蛋白抗血清的制備[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2015，45(04)：375-379.

[8]姜延龍，張宇，田波等.PCR技術(shù)檢測金黃色葡萄球菌進(jìn)展[J].食品科學(xué)2006，27(5)：265-269

[9]王禮偉,楊亞東,屈勇剛,等.新疆石河子地區(qū)奶牛乳房炎鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,35(2):124-127.