俄日姐

(青海省海南州興?？h河卡鎮(zhèn)獸醫(yī)站，興海 813300)

布魯氏桿菌病(brucellosis)又稱為布病或布氏菌病，由布魯氏桿菌引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的自然疫源性人畜共患的慢性傳染病，是我國二類動物疫病以及OIE規(guī)定的B類動物疫病[1]。在自然條件下，家畜對布魯氏桿菌的易感性存在種屬差異，羊、牛、豬易感性較強，其中以羊種危害最為嚴重。布氏桿菌多呈隱性感染，主要侵害牛羊的生殖系統(tǒng)，以妊娠母畜流產(chǎn)和公畜睪丸炎等為主要特征[2]。帶菌動物是人類和其他動物布氏桿菌病的主要傳染源?？赏ㄟ^消化道、呼吸道、交配等傳播，研究發(fā)現(xiàn)吸血類昆蟲(如蜱等)也可傳播布病[3]。因此，為了解掌握青海省海南州興?？h地區(qū)近年來牛羊群的布氏桿菌病的感染水平，切實做好該地區(qū)牛羊布病的監(jiān)測工作，對牛羊畜產(chǎn)品健康發(fā)展和人類健康都具有重要意義。

目前，有多種血清學方法用于布氏桿菌病的診斷，常用的檢測方法有試管凝集試驗(SAT)、虎紅平板凝集試驗(RPST)和補體結(jié)合試驗(CFT)、ELISA、膠體金免疫層析法等。其中虎紅平板凝集試驗愛國際上一直沿用，廣泛應(yīng)用于布病的臨床檢測；試管凝集和補體結(jié)合試驗因血清用量大、操作繁雜、檢測速度慢等缺點，臨床檢測方面應(yīng)用較少；但較RBPT特異，因此可作為布病的進一步確診[4]。本實驗我們選用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗兩種方法，先用虎紅平板凝集實驗做初步檢測，再用試管凝集試驗做驗證性診斷。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2014～2015年采自青海省海南州興?？h地區(qū)的血清樣品共1746份。其中牛血清232份，羊血清1514份，全部靜脈采血并做好標記，擺成斜面，于37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置1h，4℃環(huán)境中24h后分離血清，保存待檢。

1.2 主要試劑

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原，標準陰性和陽性血清及試管凝集抗原，標準陰性和陽性血清，稀釋液(牛用0.5%的石碳酸生理鹽水，羊用0.5%的石碳酸高滲鹽水)均購自哈藥集團生物疫苗有限公司。

1.3 檢測方法

首先，將待測血清樣品用布魯氏菌病虎紅平板凝集實驗抗原做平板凝集試驗初檢，然后將可疑血清用布魯氏菌病試管凝集實驗抗原作試管凝集試驗復核。平板凝集試驗和試管凝集試驗具體步驟按照規(guī)程[5]進行。

1.4 結(jié)果判定

虎紅平板凝集試驗判定標準：在陰、陽性血清對照成立前提下，如果樣品血清出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象的時間在4min以內(nèi)，為陽性；出現(xiàn)凝集現(xiàn)象時間過長或不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象視為陰性。

平板凝集試驗判定標準：在陰、陽性血清對照成立前提下，以參照比濁管C為凝集標準，備檢血清1:50及以上滴度出現(xiàn)（++）凝集時，判定為陽性；1:25出現(xiàn)凝集時為可疑，1:25不出現(xiàn)凝集時為陰性。

2 結(jié)果

2.1 初檢

本次實驗中用虎紅平板凝集實驗法共檢測1746份血清樣本。受檢的232份牛血清，檢出1份陽性，陽性率為0.43%，3份可疑血清。受檢的1514份羊血清，檢出4份陽性，陽性率為0.26%，9份可疑血清。為確定初篩陽性及可疑血清樣品，采用試管凝集實驗進行驗證試驗來作進一步的結(jié)果判定。

2.2 復檢

將所有陽性血清和可疑血清均采用試管凝集實驗進行驗證試驗，陽性和可疑的牛羊血清稀釋1：25，1：50，1：100三個滴度，結(jié)果在均無凝集現(xiàn)象，未檢出陽性血清。

3 討論

目前尚且沒有一種是特別理想的布氏桿菌病的檢測方法，雖然虎紅平板凝集試驗存在假陽性現(xiàn)象，但操作簡便，適合大規(guī)模流行病學篩查[6]，本實驗中筆者結(jié)合試管凝集試驗做為驗證方法，最終結(jié)果以試管凝集試驗結(jié)果為準。通過對海南州興?？h地區(qū)的1746份牛羊血清進行布氏桿菌血清抗體的檢測，結(jié)果顯示受檢的232份牛血清，檢出1份陽性，陽性率為0.43%，3份可疑血清。受檢的1514份羊血清，檢出4份陽性，陽性率為0.26%，9份可疑血清。但經(jīng)試管凝集實驗進行驗證試驗未檢出陽性血清，表明我國對布氏桿菌病采取的監(jiān)測凈化防控措施，取得了很好的效果。說明我國對布氏桿菌病采取的疫苗接種和檢疫、撲殺的防控策略，取得了很好的效果。

但是，目前依然不能松懈，布病防治工作是一項系統(tǒng)工程，必須堅持以預防為主的防控策略，加強對布氏桿菌病的監(jiān)測，淘汰凈化陽性病畜，以防布氏桿菌病再度蔓延。近年來，我國布病大規(guī)模暴發(fā)流行逐漸減少，小規(guī)模、分散、多點的流行較常見，典型病例增多[7]。我們要根據(jù)布病新的流行特點，堅持以預防為主，對健康畜群，加強飼養(yǎng)管理，每年定期預防免疫，堅持自繁自養(yǎng)的方針。相關(guān)部門應(yīng)進一步加大布病檢疫檢測、免疫預防、流通監(jiān)管、撲殺凈化等防控措施實施力度，按計劃接種布氏桿菌病疫苗，進一步加大無害化處理、市場流通監(jiān)管等防控措施的力度，切斷傳染源及傳播途徑，積極有效的防控布病的發(fā)生和傳播。

[1]陳俊，吳敏，施永超，等.布魯氏菌病的研究進展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊：2014,(1)：24-25.

[2]王彩茹，王艷梅.羊布魯氏桿菌病的診治與防治[J].河南畜牧獸醫(yī):2014,35（3）:47.

[3]許存有.樂都縣牛羊布氏桿菌病的血清學調(diào)查[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志，2013,43(4):21-22.

[4]張瑞.牛羊布氏桿菌病的血清學檢測調(diào)查[J].新疆畜牧業(yè)，2012，(5)：56-58.

[5]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫局.SNI1090—2002布氏桿菌病試管凝集試驗操作規(guī)程[M].北京，2003.

[6]樊三忠，劉金彪，陳冬毅，等.虎紅平板凝集試驗與試管凝集試驗檢測奶牛布魯茵病的比較[J].中國動物檢疫，2009，(9)：43.

[7]任皓，仉明亮，王濤，等.米東區(qū)牛羊布氏桿菌病的血清學調(diào)查[J].新疆畜牧業(yè)，2015，(2)：41-45.